流式细胞术讲义

1、流式细胞术讲义第1页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四流式细胞术的概念 流式细胞术（Flow cytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flow cytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达100010000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。第2页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四流式细胞术与PNH的诊断第3页，共24页，2022年，5

2、月20日，11点21分，星期四原 理 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPIanchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血。第4页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四样本要求：EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送检收费：CD55/CD59 280元 CD59 140元第5页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四临 床 诊 断 值CD59阳性的红细胞大于等于95%CD59阳性的中性粒细胞大于90%第6页，共24页，2022年，5月2

3、0日，11点21分，星期四流式细胞术与白血病免疫分型第7页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四免疫分型原理 流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体（McAb）检测相应抗原，经过多参数分析，测定白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在1000050000个细胞之间，而且快速、特异、准确、重复性好，能区分细胞的系列，划分其分化、发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制研究等有重要价值。第8页，共24页，2022年，5月20日，1

4、1点21分，星期四样本要求：肝素抗凝骨髓3ml(或外周血)每天上午送检收费： 70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗)第9页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四干/祖细胞标志： CD34、CA133髓系标志： CD33、CD13、CD11b、CD15、MPOB细胞相关标志： CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、 CyIg、SmIgT细胞相关标志： CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8第10页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义管号三色标记McAb染色细胞及目的1Mou

5、seIgG1/ MouseIgG1/CD45 PerCP阴性对照及设门2CD5 FITC/CD7 PE/ CD45 PerCPT淋巴系细胞、部分早期髓系细胞3CD10 FITC/CD19 PE/ CD45 PerCPB淋巴系细胞4Anti-HLA-DA FITC / CD13 PE/ CD45 PerCP髓系细胞、 B淋巴系细胞、部分T淋巴系细胞5CD34 FITC/CD38 PE/ CD45 PerCP反映细胞分化程度6CD14 FITC/CD33 PE/ CD45 PerCP髓系细胞和单核细胞7CD20 FITC/CD22 PE/ CD45 PerCPB淋巴系细胞及其分化程度8CD8 FI

6、TC/CD4 PE/ CD45 PerCPT淋巴系细胞及其分化程度9CD3 FITC/CD16+56 PE/ CD45 PerCPT淋巴系细胞、NK细胞10CD36 FITC/GP-A PE/ CD45 PerCP幼红细胞11CD61 FITC/CD41 PE/ CD45 PerCP巨核细胞第11页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四B-ALLT-ALLAMLCD10+CD19+CD22c/m+CD3c/m+CD5+CD7+CD13+CD33+MPO+第12页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四AML 免疫分型FAB/CD34CD33HLA-DR CD1

7、3CD14CD15CD11b其它M1M2M3CD38CD9M4M5M6CD71GP-AM7CD41CD61第13页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四T-ALL免疫分型CD2CD3CD5CD7CD4CD8TdT早期T-ALL+前TALL+T-ALL+第14页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四B-ALL免疫分型HLA-DRCD19CD10CD20CD22cIgMmIgMTdT早B前体ALL+普通型+前B-ALL+B-ALL+第15页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四FCM-IM诊断混合型白血病流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的

8、结果较多，但双表型白血病不一定就是混合型，理由如下：混合型白血病诊断：应根据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列（双克隆）？双表型（单克隆）？系列转换型？需考虑到抗原/单抗的多向性：CD4、CD7、CD10、CD38、CD56正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化：白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性（lineage infidelity）与免疫表型的阶段性（differentiation asynchrony），因而出现异常抗原表达，或过高或过低或不表达或交叉系列表达。第16页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四设门方案采用CD45/SS

9、C设门法（优于FSC/SSC设门法）CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞单核细胞成熟粒细胞原/幼细胞，而红细胞不表达。SSC在成熟粒细胞单核细胞原/幼细胞淋巴细胞红细胞。第17页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四临床原/幼细胞群定量按照新的WHO分型标准，对初发病者，原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。第18页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四白血病免疫分型病例分析病例1梁丽琴 女性 24岁异常表型中:CD10+. CD34+.CD22+.

10、CD38+.CD19+. HLA-DR+结论：表型符合Pre-B-ALL第19页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四白血病免疫分型病例分析病例2王丙午 男性 68岁异常表型中:CD33+. CD13+.CD15+.CD11b+. HLA-DR+.CD34+.CD19+结论：表型符合AML-M2第20页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四白血病免疫分型病例分析病例3冯亮 男性 33岁异常表型中:CD34+. CD10+. CD22+. CD19+. CD33+. CD13+.CD15+. HLA-DR+结论：表型符合双表型白血病第21页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四流式细胞术与造血干/祖细胞计数第22页，共24页，2022年，5月20日，11点21分，星期四原 理 造血干/祖细胞存在于骨髓和外周血中，形态与淋巴细胞相似，用普通形态学方法难于识别。但根据造血干/祖细胞的特征，可用FCM多参数分析血液、骨髓和浓缩白细胞悬液中造血干/祖细