DB1308-T007-1999马铃薯茎尖脱毒技术规程

1、B23DB承德市地方标准DB1308/T007-1999马铃暮茎尖脱毒技术规程1999-07-1C 发布1999-C7T5 实施承律市技术监督局发布本标准由围场满族蒙古族自治县技术监督局提出。 本标准由围场满族蒙古族自治县农业局.负贵起草。 本标准附录A为本标准附录。本标准主要起草人：丁明亚、谭宗久隋友、陈福祥本标准自1999年7月15日实施。4.14.1无曹室灭荫：同3.2承養市抜术监督局承養市抜术监督局199-07T0批准1997-07-15 实施承徳市地方标准规程剛 w/Tog 殮本标准规定了马铃薯茎尖脱毒种薯生产中茎尖剥膏、脱毒苗培养、繁 殖等技术要求。本标准适用于马铃暮對培种及其各种

2、野生资源的脱毒。2.1母液配制按MS培养基配方.将大量元素加-A： 1 0倍.彼量元素、有机成份、. 生长调节熙 铁盐加大20倍满容重瓶精補配制定容,分别编号为母液 毋液2、母液3、毋液4、母液5放入冰箱.4C保存备用。2.2培养基液配制根据焙养基配方分别取母液按量加入定容，毎升加入20g為糖，搅样 紬,PH值调为5.8,毎升培养萋液中加入7g琼脂,加热。2.3培养基分装将制备好的培养基混趁热分装在洗刷于净、高温（200-220D灭菌 后的三角瓶中.毎瓶2 Oml.试管口以消毒棉塞或封口膜封紧。2.4高圧灭曹将分装好培养羞的三角緘装矛无菌锈中以L羁/血2的沃力逬行高压 灭首2。分钟，降压后衆出

3、平放于无菌案形成固体培养基备用。11308/T00719993.1茎尖组组剥得取材：在田阊选带有该品种典型峙紀植株结的块茎.经热处理进行钝化催芽. .芽长到长3-5cm时剪下做组.级剥專哲料.3.2无菌室灭菌:无菌室应用前应用70 %酒精蚤试地板及趙净工作台.幷 用5 7 %的来苏水刈天北板墙壁喷雾.紫外线灯照射2 4小时（初次用 照射4 8小时）。3.3剥膏材料消毒将芽剥去外面几层叶片.放于烧杯中.用.沙布封口.放于自来水下冲 洗30分钟。然后在无菌室内.用9 5%酒精浸泡下，放入5%漂白粉或 次氯映钠溶液中浸泡5分钟.再用无菌水冲洗3-5次。3.4茎尖组织剥商在无菌室中，超净工作台上.将消

4、毒好的材料在4 0倍双筒解剖镜下 迸行剥离，剥去幼阡.切取带1-2个叶原基的茎尖组织.0.2mm左右移置 到故有培养基的三角瓶或试管中的培养基上.每瓶只放一个茎尖组乳 3.5培养将放有茎尖组级的器皿放于日温2。2 5 C.夜温不低于i 5*C. 光照20003000勒克新条件下的组培室中培养.茎尖组织变绿（成祝 后转 移培养成组培苗。首长到6个叶片左右切段扩繁株系。0B1308/TOO7-1S994.2缰培笛株系扩约将组雄苗希号,按号逬行株系扩斜扩繁在无菌室 规净工作台上理行.每株苗训成4-5段.毎段一个茎节禮一片叶一个腋芽. 置三角瓶基上墙养.经2 0天成苗樗检。5.1系簞样，累-2个整株迸

5、行病濤检蒲。采用叫TUSA法检澳PVX* M, MV,釆用往返电澈技术检瀰PSTV。5.殖夂检测2-3次。E 3心检测结果，棒品中仍褶清PVX、PVY、PUVPSTVW#的为不舍格.裁将其对成编号的组堵苗灣汰.或作交温处再处理见附录A）。而PVX、PVL PUV和JSV瑞?专都是零的为脱爵舍格.其对应编号的组墙苗问滁为脱壽核心苜，待继续扩嫌。6.1无曹室灭菌：同3.2。6.2切段扩繁：同4.2（可不用编号）。6.3培养：同3.5,怛因敬置增大.要加襲管理。切段后首先将斌放在清赣射光源，并*日光补充光滌的培养架上培雅3夭左右见根、叶腋处蔽 芽萌生，再移到阳光黑射的培养强上。为使见光妁匀要经常上下移动或 转动方向。培养2Q天左右长8个左右叶片.逬行再次切段扩攀。6.4扩繁對预计数量，做为基础苗供原原种生产闻微型种暮生产使执附 录A术AR如果剥离苗经病毒检测.仍褶有病毒，又没有更 好的原剥离的材料时，可采取变温处理再脱毒。A2、把脱毒未合格的剥离苗，继续培养，苗长到4- 5cm 时进行变温处理。A3.把装