实验动物生物安全市公开课获奖课件

1、试验动物生物安全 中山大学试验动物中心郭中敏第1页第1页引 言试验动物：指经人工饲养、繁育，对其携带微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者起源清楚，用于科学研究、教学、生产和检测鉴定以及其它科学试验动物。如大白鼠、小白鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型猪、沙鼠等。试验用动物包括：试验动物，野生动物，经济动物。如牛、羊、未试验动物化土种狗等。第2页第2页KM小鼠C57小鼠裸 鼠SD大鼠新西兰兔Hartely豚鼠第3页第3页试验动物是从事科学研究、教学、生产、检查主要支撑条件，广泛应用于医药研发、教学试验、药物生产、生物检查等方面。试验动物为人类健康和社会进步作出了巨大奉献。引 言第4页

2、第4页引 言当前我国试验动物生产量已达1900万只()，使用量高达1600万只，高于欧盟25国1210万只总和。我国试验动物环境设施规模和质量不断提升，试验动物进出口越来越频繁，新品系不断引进，使得我国试验动物资源日趋丰富。试验动物在生产、使用过程中，存在感染、繁殖病原体也许以及向环境扩散病原微生物危险，对人和环境造成生物安全危害。 第5页第5页1941年美国发生74例试验室相关吸入性布氏杆菌感染事故1960s中国相继发生三起布病试验室感染新加坡、中国台湾、中国CDC SARS试验室感染事故1976年英国某医学试验室工作人员体检时发觉结核菌感染者比其它人员高5倍引 言第6页第6页引 言1999

3、年北京某试验室曾发生试验人员感染流行性出血热事件。事件起因就是操作人员被携带病毒试验动物抓咬伤而受感染引起。第7页第7页引 言长春市某高校中药系试验室发生学生感染流行性出血热事件，76名学生中有10名学生受感染。整个事件起因也是由于试验操作过程中被动物抓咬伤而造成。第8页第8页引 言 试验动物生物安全问题已引起国、内外高度注重。我国实行新版试验动物国家原则，其中要求：试验用大小鼠等级提升到SPF级。取消普通级。年北京市试验动物管理条例，修改和增长了试验动物生物安全面内容，20第二届北京试验动物科学国际论坛上，日本国立大学生物安全委员会委员长佐藤浩专家提出，生物安全已成为试验动物研究中不容忽略主

4、要原因。 第9页第9页试验动物生物安全:是对试验动物也许产生潜在风险或现实危害防备和控制。那些环节造成试验动物各种风险和危害： 生产和使用试验动物时各个环节，如试验动物引种、保种、繁育、运送、进出口，使用试验动物(包括感染和非感染试验动物)进行动物试验、从事科研活动等过程中试验动物都有也许造成各种危害。 引 言第10页第10页动物试验造成生物危害，已引发微生物学、生物医学等相关学科工作者极大关注。动物性气溶胶、人兽共患病和试验室相关疾病感染是形成动物试验生物危害三大主要原因。因此，在制订防护生物危害生物安全办法上应包含试验室规程制订、试验设备设置(一次隔离)、试验设施规划(二次隔离)、个人防护

5、用具准备、感染动物喂养和管理以及生物危害评定等方面；动物试验生物安全试验室(ABSL)与普通微生物学生物安全试验室(BSL)相比，现有其相同之处，又有其不同特点。 第11页第11页试验动物生物安全条件与保障国家、地办法律、法规合格试验动物与和符合原则设施生产和试验中严格、原则化操作废弃物正确处理试验动物生物安全应急预案 引 言第12页第12页国家或地方试验动物主要法规、原则1、国家试验动物管理条例（1988）2、试验动物质量管理办法（修订版）（）3、试验动物许可证管理办法（试行）（国家：、广东省：）4、试验动物种子中心管理办法5、省级试验动物质量检测机构技术审查准则6、国家GB14925(.1

6、0.01)第13页第13页国家和地方试验动物主要法规、原则7.广东省试验动物管理条例10月1日6月2号通过；10月1号执行第四章： 生物安全与试验动物福利第二十二条 试验动物发生传染性疾病时，从事试验动物生产、使用单位和个人应当及时采用隔离、预防控制办法，预防动物疫情扩散，同时汇报当地畜牧兽医主管部门、动物防疫监督机构；当发生人畜共患病时，还应当马上汇报当地疾病预防控制机构。 第14页第14页国家或地方试验动物主要法规、原则1试验动物微生物等级及监测2试验动物寄生虫等级及监测3试验动物环境及设施4哺乳类试验动物遗传质量控制5试验动物配合饲料通用质量原则6试验动物配合饲料卫生原则第15页第15页

7、国家或地方试验动物主要法规、原则 试验动物生产许可证 第16页第16页 试验动物使用许可证 国家或地方试验动物主要法规、原则第17页第17页试验动物生产和使用许可证必须经监测机构检测合格后发给单位和个人，严禁转借、转让和出租或者超许可证范围使用，假如出现上述情况，科技厅主管部门将暂扣许可证，责令限期整改；情节严重或逾期不改，吊销试验动物生产、使用许可证。第18页第18页试验动物分为四级：一级为普通级（cv）；二级为清洁级（cl）；三级为无特定病原体（SPF）级；四级为无菌级（包括悉生动物）。当前比格犬、恒河猴、小型猪等大动物多为普通级，大、小鼠均为清洁级以上，豚鼠、家兔等有普通级、清洁级、SP

8、F级。国际上将试验动物分为三个级别； SPF级以上动物种群起源于剖腹产动物，微生物、寄生虫是按国家原则严格控制。试验动物设施分为三级：一是普通环境（洁净度8级、10万）；二为屏障环境（洁净度7级、万级）；三为隔离环境（洁净度5级、百级）。试验动物及其设施等级第19页第19页隔离系统(Insulation system) 是以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置构成饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。分正、负压隔离器。 屏障系统(Barrier system) 这是清洁级、SPF级动物生产或试验设施。人、试验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格微生物控制。人流、物流及动

9、物流要分开。 开放系统(Open system) 只能进行普通级试验动物生产与试验。试验动物及其设施等级第20页第20页试验动物及其设施等级不同等级动物：必须由省级试验动物监测机构监测合格，发放“试验动物质量监测保合格证”。动物试验中所用动物必须为质量合格动物。第21页第21页试验动物及其设施等级隔离环境以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置构成饲养系统（隔离罩、IVC等）。用作饲养无菌动物和已知菌动物。洁净度：百级。第22页第22页试验动物及其设施等级隔离环境动物设施主要指标洁净度：5或7级（空气三级过滤后，加隔离器）温 度：20-26日温差：4相对湿度：40-70%静压差： 50P

10、a换气次数：20次/h；气流速度： 0.2m/s落下菌数：0个/皿;氨浓度：14mg/m3第23页第23页屏障环境 主要用于进行SPF级、清洁级大鼠、小鼠等小动物试验（配备饲养室及操作室）。洁净走廊SPF动物试验室试验动物及其设施等级第24页第24页试验动物及其设施等级屏障环境（正压）动物设施主要指标洁净度：7级（空气通过初、中、高效三级过滤）温 度:20-26日温差：4相对湿度：40-70%静压差： 10Pa换气次数：15次/h；气流速度： 0.2m/s 落下菌数：3个/皿;氨浓度： 14mg/m3第25页第25页试验动物及其设施等级屏障环境动物试验设施设备第26页第26页试验动物及其设施等

11、级屏障环境动物试验设施设备第27页第27页 试验动物及其设施等级屏障环境动物试验设施设备第28页第28页普通环境 主要用于进行兔、猫、狗、猴等大动物试验饲养（配备饲养室及操作室）。试验动物及其设施等级第29页第29页试验动物及其设施等级屏障环境动物试验设施设备第30页第30页试验动物及其设施等级屏障环境动物试验设施设备第31页第31页 涉及传染性、中毒性、放射性、致癌性、致突致畸及致死性试验等应在有特殊要求生物安全试验室（负压）中进行，应依据生物安全防护要求进行建筑或改造，按照相关要求执行。WHO将动物生物安全试验室分为四级：动物生物安全试验室一级(ABSL-1) 动物生物安全试验室二级(AB

12、SL-2) 动物生物安全试验室三级(ABSL-3) 动物生物安全试验室四级(ABSL-4) 试验动物及其设施等级第32页第32页试验动物及其动物试验操作试验动物生产生物安全： 试验动物生产过程中，对试验动物也许造成各种风险和危害防备和控制。 试验动物生产，包括试验动物引种、保种、繁育、运送、进出口等过程。 定期进行严格微生物指标监测。第33页第33页试验动物引种：试验动物种子起源于国家试验动物保种中心，遗传背景清楚，质量符合国家原则。 试验动物保种和繁育：必须由国家或行业主管部门认可单位进行。试验动物及其动物试验操作第34页第34页适合用于SPF/无菌动物饲养或运送小鼠饲养笼大鼠饲养笼试验动物

13、运输：运输试验动物时，所使用转运工具和笼器具，应该符合所运试验动物微生物和环境质量控制标准。不同品种、品系、性别和等级试验动物，不得在同一笼盒内混合装运。试验动物及其动物试验操作第35页第35页试验动物及其动物试验操作试验动物使用生物安全：动物及饲养要求:1、引进动物进行试验必须具备试验动物质量合格证,隔离检疫一周，无异常时方进行试验。2、坚持卫生消毒制度：定期对动物房舍和饲养用具进行消毒（消毒办法及消毒剂交替使用）。3、饲养管理人员要定期做健康检查。第36页第36页试验操作要求：动物试验人员试验操作过程中做好防护，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;严格按原则操作规程进行。 试验动物及其动物试验操

14、作第37页第37页试验动物及其动物试验操作屏障环境原则操作规程SPF级动物试验室管理责任SPF级动物试验室工作人员职责SPF级动物试验室工作人员职责SPF级动物试验室人员进出原则操作规程SPF级动物试验室物品进出原则操作规程SPF级动物试验室动物进出原则操作规程使用SPF级动物试验室原则操作规程第38页第38页试验动物及其动物试验操作屏障环境原则操作规程SPF级试验动物购买原则操作规程SPF级试验动物接受和检疫原则操作规程SPF级动物试验室试验动物饲料、饮水、垫料管理原则操作规程SPF级试验动物抓取和保定原则操作规程SPF级试验动物逃脱处理原则操作规程SPF级试验动物死亡和伤病处理原则操作规程

15、高压蒸汽灭菌器使用与维护原则操作规程传递窗使用与维护原则操作规程渡槽使用与维护原则操作规程第39页第39页试验动物及其动物试验操作屏障环境原则操作规程空气压缩机和喷枪使用与维护原则操作规程SPF动物室照明及紫外线设备使用与维护原则操作规程消毒灭菌办法原则操作规程SPF动物试验室日常管理原则操作规程屏障系统日常卫生与消毒原则操作规程空调净化系统使用与维护原则操作规程SPF动物试验室净化原则操作规程SPF级动物试验室内环境监控原则操作规程SPF级动物试验室试验动物笼子标识原则操作规程第40页第40页试验动物及其动物试验操作普通环境原则操作规程普通级试验动物设施管理责任原则操作规程使用普通动物试验室

16、原则操作规程试验动物重新进入普通级动物室原则操作规程普通级试验动物、饲料、饮水、垫料购买及管理普通级动物室人员保健和安全原则操作规程普通级动物室试验动物接受原则操作规程普通级动物室试验动物和物资进出管理原则操作规程普通动物室抓取动物原则操作规程第41页第41页试验动物及其动物试验操作普通环境原则操作规程普级级试验动物逃脱、死亡和伤病处理原则操作规程进入普通级动物试验室内人员管理原则操作规程普通级动物室环境监控原则操作规程普通级动物室笼具和其它辅助设备管理原则操作规程普通级动物室环境卫生管理原则操作规程普通级动物室试验动物笼子标识原则操作规程试验用Beagle狗饲养原则操作规程试验用兔饲养原则操

17、作规程试验用豚鼠饲养原则操作规程第42页第42页试验动物及其动物试验操作第43页第43页试验动物及其动物试验操作 不同品种、不同等级和互有干扰动物试验，不得在同一试验间进行喂养，同一起源、相同品种、品系而用于不同试验目标动物试验喂养，也不得在同一试验间进行。 不得将普通级动物带进屏障环境中进行试验，如将试验动物带离屏障环境进行试验，不得再带回屏障环境中进行喂养、试验。第44页第44页试验动物及其动物试验操作在进行试验时，为了不损伤动物健康，不影响观测指标，并预防被动物咬伤，首先要限制动物活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理抓取固定办法。抓取动物前，必须对各种动物普通习性有所理解。操作

18、时要小心仔细、大胆灵敏、纯熟准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要珍惜动物，使动物少受痛苦。 第45页第45页试验小鼠抓取试验动物及其动物试验操作第46页第46页试验大鼠抓取试验动物及其动物试验操作第47页第47页试验兔抓取与给药试验动物及其动物试验操作第48页第48页豚鼠抓取试验动物及其动物试验操作第49页第49页试验狗抓取与固定试验动物及其动物试验操作第50页第50页试验动物及其动物试验操作 试验动物误伤处理试验动物咬伤救治在伤口上方扎止血带，然后用高猛酸钾或双氧水冲洗伤口，并用5石炭酸或硝酸烧灼腐蚀伤处。 如被试验犬咬伤，首先要把脏血挤出，别让血存在伤口里，否则容易引起感染。假如伤口小，

19、则能够先用肥皂水清洗伤口，然后用清水冲洁净，最后涂上一些碘酒。伤口若比较大或自己不好处理，最好去医院处理。同时二十四小时内到防疫站注射疫苗。 第51页第51页标本处理： 动物血液及组织标本马上按试验要求进行分离、冻存或固定等处理后存储。动物试验标本及废弃物处理第52页第52页 废弃物处理国务院医疗废物管理条例卫生部令医疗卫生机构医疗废物管理办法卫生部文献 医疗废物分类目录病原体培养基、标本和菌种、毒种保留液等高危险废物，在交医疗废物集中处置前应就地高压消毒。第53页第53页动物试验标本及废弃物处理试验动物使用各种废弃物可按医疗废物分类目录进行相应分类，并严格按照医疗废物管理条例要求进行处理。依

20、据试验动物使用废弃物特性可分为感染性废弃物：如被动物血液、体液污染物品 病理性废弃物：试验动物尸体等废弃物 损伤性废弃物：废弃锐器。 药物性废弃物：变质或者被污染废弃药物 化学性废弃物：含有毒性、腐蚀性、易燃易爆性 废弃化学物品第54页第54页动物试验标本及废弃物处理试验动物使用废弃物搜集将试验动物使用废弃物分别置于动物废弃物专用包装袋或者容器内。感染性废弃物、病理性废弃物、损伤性废弃物、药物性废弃物及化学性废弃物不能混合搜集。盛装试验动物使用废弃物每个包装袋、容器外表面应当有警示标识，注明：单位、日期、类别等。废弃物经包装、密封后存储于暂时贮存设施，不得露天存储；暂时贮存时间不得超出天，由爱

21、卫办或防疫部门统一运送、处理。第55页第55页动物试验标本及废弃物处理试验动物使用废弃物暂时贮存设施、设备要求：远离人员活动区和生活垃圾存储场合，以便试验动物使用废弃物运送人员及运送工具、车辆出入。有严密封闭办法，设专（兼）职人员管理，预防非工作人员接触动物废弃物。有防渗漏、防雨水冲刷、防阳光直射、防蚊蝇、防蟑螂、防盗以及预防儿童接触等安全办法。易于清洁和消毒。第56页第56页动物试验标本及废弃物处理如需暂时贮存病理性废弃物，则应当具备低温贮存或者防腐条件。设有明显动物废弃物警示和“严禁吸烟、饮食”标识。病原体感染性动物试验废弃物，需通过高压或消毒液初步处理后再分装搜集，然后统一由爱卫办或防疫

22、部门运送后进一步处理。第57页第57页1、人畜共患病毒性疾病：流行性出血热、淋巴性脉络丛脑膜炎病毒感染、口蹄疫、埃博拉病毒感染、灵长类痘病毒病、麻疹、鸡新城疫、A型肝炎、猴免疫缺点综合征、狂犬病、流感、节肢动物携带性病毒感染。2、人畜共患立克次氏体病：Q热、猫抓热。附：主要人畜共患病第58页第58页附：主要人畜共患病3、人畜共患细菌性疾病： 布氏杆菌病、李斯特菌、猴结核病、鸚鹉热、鼠咬热、鼠疫、钩端螺旋体病、沙门氏菌病、志贺氏菌病、肠炎耶森氏菌病。4、人畜共患病原虫性疾病：弓形虫病、包虫病、梨形虫病、隐孢子虫病、阿米巴原虫病、大肠纤毛虫病。第59页第59页 1、病原体：汉坦病毒。 传染源带病毒

23、黑线姬鼠和褐家鼠，试验大鼠也偶然传播。 2、传播路径污染尘埃飞扬形成气溶胶吸入感染。带病毒血、尿污染人皮肤破损处，也使人患病。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）第60页第60页3、易感者人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔。4、症状潜伏期14天；动物无明显症状；人感染后出现高热、出血、休克、肾功效受损和循环衰竭，严重者死亡。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）第61页第61页（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎1、病原体：淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒。传染源带病毒野小鼠或试验小鼠为传染源。2、传播路径带病毒小鼠分泌物、排泄物污染，吸血昆虫传播，胎盘垂直传播。第62页第62页（二）淋巴细胞性脉络丛脑

24、膜炎3、易感者人，小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗、鸡等。4、症状人感染后表现类似流感样症状，有三种表现：大脑型、内脏型、迟发型。第63页第63页（三）口蹄疫1、病原体：口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease，FMDV)。引起口蹄疫以患病动物口、蹄部出现水疱性病症为特性传染性疫病。传染源患病偶蹄动物。2、传播路径接触传播第64页第64页（三）口蹄疫3、易感者偶蹄类动物、人4、症状发热，呕吐，口腔组织发生红色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱)，偶有皮肤小水疱。值得注意是，该症状与另外一个病毒疾病“手足口病”症状类似。第65页第65页手足口病与口蹄疫区别病原不同：口蹄疫口蹄疫病毒 手足

25、口病数种肠道病毒，如EV71病毒传染源不同：口蹄疫染病动物 手足口病患者和肠道病毒携带者传输路径不同：口蹄疫接触病畜溃烂斑，偶有经口路径 手足口病接触病人、经口、呼吸道易感人群：口蹄疫发病人群广泛 手足口病多为3岁以下儿童第66页第66页（四）布鲁杆菌病1、病原体：布鲁氏杆菌。传染源主要是感染羊、牛及猪，另一方面是犬。2、传播路径经皮肤粘膜接触传染、经消化道传染 、经呼吸道、其它如苍蝇携带，蜱叮咬也可传播本病。第67页第67页（四）布鲁杆菌病3、易感者人、羊、牛、猪、犬等。4、症状长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等为特点，女性易引起流产和死胎。临床上分型为：多性期；慢性活动型；慢性期相对稳定型

26、。第68页第68页典型案例解析东北农大28师生剖活羊染“怪病”12月东北农业大学畜禽生产教育班30名学生进行“羊活体解剖学试验”后，28人感染布鲁氏菌病，症状为关节疼痛、全身乏力等，严重者生活不能自理。第69页第69页问题进一步分析试验前试验准备：学校从养殖场购买了4只没有检查检疫汇报山羊，也没有进行任何试验室前检查检疫，第二日就进入了试验室。试验室安全教育：老师交代学生们做试验需穿试验服、戴手套，但没有告知带口罩。学生反应：学校没有试验室安全面课程或培训，更没有讲到动物传染病传给人问题。老师反应：有试验室安全制度，但没有详细念给同窗们听。制度贴在试验室墙上，没有提醒同窗们看，老师们队动物传染

27、病结识也不够。第70页第70页试验中：学生：一些人并未戴手套，戴口罩者只有三两人，尚有一些学生由于戴手套不以便做试验，摘掉手套。老师：在没有戴手套情况下徒手扒开羊内脏。试验后个人消毒：学生没有进行消毒，老师也没有提醒学生消毒。试验室消毒：试验室未经消毒，这批山羊先后共进行了五次试验。问题进一步分析第71页第71页试验室基本防护应在试验前认真阅读试验室操作指南和安全操作程序；试验前应穿戴好必要防护器具，如手套、口罩、工作服，必要时穿上胶靴、戴上护目镜；试验过程中应严格按照技术规范进行操作，并严禁喝水、吃东西以及不必要往返走动等。试验结束后及时清理消毒地面、桌面、工具等，预防病原体污染，离开现场前

28、，进行个人清洁消毒。第72页第72页 动物福利（welfare， well-being ）就是让动物在康乐状态下生存，康乐就是健康高兴，包括身体健康和“心理健康”，即身心健康。也能够认为是对动物需求满足， 而动物需求包括下列三方面： 一、何为动物福利？试验动物福利第73页第73页动 物 福 利为动物健康提供良好确保办法。为动物舒适提供必要条件强调心里需要。为动物生命延续提供所需要营养和生存条件。维持生命需要维持健康需要维持舒适需要试验动物福利第74页第74页动物福利，强调确保动物健康、高兴外部条件。让试验动物享受下列五大自由，是保障动物福利基本原则：1 享受不受饥渴自由。2 享受生活舒适自由。

29、3 享受不受痛苦伤害和疾病自由。4 享受生活无恐惊和悲哀感自由。5 享受表示天性自由。第75页第75页动物福利观点：人类能够合理地利用动物资源造福人类和社会，试验动物是科学研究、社会进步和人类健康不可缺乏试验材料。因此提倡在动物饲养与使用中实行动物福利，予以动物必要人文关怀。积极提倡“3R”原则。动物福利与“动物权利”、“动物解放”等观点是有本质区别。试验动物福利第76页第76页“3R”原则：善待试验动物， 履行3R方案，即Replacement（替换）、 Reduction（减少）和Refinement（优化）替换：1.在试验动物替换方面，利用离体培养器官、组织和细胞代替整体动物，在单克隆抗

30、体产生、病毒疫苗制备、效力和安全试验、细胞膜研究等项目中已广泛使用。2.用低等动物代替高等动物。3.用物理、化学和信息技术办法代替动物试验，这些替换办法研究和应用，都减少了试验动物用量。试验动物福利第77页第77页试验动物福利降低：在降低动物用量方面办法有：合并使用动物，如利用死亡动物进行外科手术试验；利用病了解剖试验摘取动物器官等；改进统计学设计，以少许动物取得大量统计学资料；使用高质量试验动物，一样能够起到以质量代替数量作用等。优化：在动物试验优化方面：通过改良仪器设备，降低动物痛苦；改进试验室条件，降低对动物刺激，避免应激反应；优化试验方法，尽也许降低试验动物用量，给予动物人道处死、施行安死术。第78页第78页二、为何实行动物福利1、动物福利科学价值 良好福利使试验动物“身心健康”，使试验动物真正原则化，从而使科学研究结果数据准确、可靠，更加好地为人类服务。2、动物福利道德价值 动物福利是建立在人类文明道德