组织化学染色市公开课获奖课件

1、特殊染色在临床病理学中应用第1页第1页染色意义和目的 用染料对组织切片进行处理，使组织中不同成份被染上对应颜色，产生不同折射率，以利于光镜观测和分析。病理染色属于生物性染色范围。第2页第2页 应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色剂，显示组织或细胞正常结构或病理过程中出现异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（Special staining） 。 特殊染色（special staining）第3页第3页染料和染色原理一、染料特点：组织病理学染料是生物学染色剂对所染组织成份含有亲和力染色剂中同时具备发色团和助色团才含有染色功效发色团是使染料显色化学团（色原），一个染料由一个或多个发色团，染料

2、颜色取决于发色团多少和强弱。助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产生亲和力原子团第4页第4页染料和染色原理二、染料分类染料起源分类：天然和合成染料化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料用途分类： 细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等 细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等 脂肪染料：油红O，苏丹III，苏丹IV 纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等第5页第5页染料和染色原理三、染料原理物理机制：毛细管渗入作用：染色剂沿组织间微孔渗入到组织中。吸取或溶解作用：组织吸取或溶解染料而着色，如脂肪染色吸附作用：染料色素粒子浸润组织中，因分子引力，色素粒子被吸附而染色第6页第6页比如脂肪染色: 苏丹类

3、染色剂在脂质中溶解度酒精中溶解度 溶解于酒精苏丹类染色剂与组织中脂质接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，从而使脂质着色。 第7页第7页染料和染色原理三、染料原理化学机制： 组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中阳离子和阴离子结合。 如HE染色：细胞核主要由核酸构成，与碱性染料-苏木素结合，而胞浆主要由碱性物质构成，与酸性染料-伊红结合。第8页第8页普通染色：又称常规染色，即指HE染色（haematoxylin and eosin HE）特殊染色：除HE以外所有染色，显示特定组织结构和成份。单一染色：用一个染料进行染色，如甲苯胺蓝染幽门螺杆菌多色染色：用两种以上染液染色办法，如三色染

4、色对比染色：又称复染或衬染，先将某一成份或结构染色后，再用另一个染料染其它成份，如苏木素衬染细胞核染色惯用术语第9页第9页进行性染色：渐进性染色，采用低浓度染液，使组织成份着色自浅入深，直到到达适当强度，退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过度，再用一些溶液脱去多出染液，到达适当染色强度媒染剂：含有增进染色能力，对染料和组织都有亲和力并与染料和组织结合在一起试剂。如硫酸铝钾等染色惯用术语第10页第10页促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不参加染色反应，如乙酸异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与染料不同颜色分化：指用某种溶液选择性脱去过深着色，并使不应着色组织细胞成份脱色过程

5、，HE染色时盐酸酒精分化蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱性水使核变蓝，称蓝化染色惯用术语第11页第11页按照染色办法分类普通办法分类：常规染色，特殊染色等按主要组织和细胞成份分类：结缔组织染色，肌组织染色，神经组织染色按染色对象种类分类：切片染色法，组织块染色法，大体标本染色法染色办法分类第12页第12页按创造者姓名命名：如Van. Gieson（VG）染色按所有染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色按所染组织分类：如网状纤维染色其它分类：染色办法命名第13页第13页选择适当组织处理办法：包括固定液和切片选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片染色

6、液有效期和保留方式染色液浓度和pH值染色时间控制染色前切片预处理：如脱甲醛色素，脱汞盐固定液汞结晶等染色中易出现问题和对策第14页第14页注意特染应用范围，如某种病变应用什么办法染色才干达到目的，普通依据HE切片所见，选择适当特染办法。必须掌握各种特殊染色结果，避免造成错误结论或严重误诊，如在网染时把胶元纤维误认为网状纤维。应做阳性切片作对照，确保染色结果可靠性。染色所用器皿都必须清洗。染色中易出现问题和对策第15页第15页惯用染色办法和应用第16页第16页 结缔组织由细胞和细胞间骨架成份构成，分为无定形间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力纤维。网状纤维）。各种

7、纤维成份辨认有助于病理学诊断和判别诊断。结缔组织染色第17页第17页网状纤维特性 网状纤维是构成组织网状支架 广泛分布于实质器官内，其中最丰富区域是肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、基膜、血管等形态学上为交错成网纤细纤维化学成份为网状蛋白，一个特殊胶原蛋白，抗酸病理状态下可转化为胶原纤维含有嗜银性，又称嗜银纤维HE染色着色淡，特殊染色可显示 结缔组织染色网状纤维染色第18页第18页网状纤维染色原理 网状纤维染色办法诸多，但基本原理相同，即通过氧化剂氧化使网状纤维对银离子含有选择性亲和能力（嗜银性），并在媒染剂作用下网状纤维吸附二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显示出网状纤维。结缔组织染色网状

8、纤维染色第19页第19页惯用网状纤维染色办法 Gomori染色法 结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄褐色，细胞核呈灰黑色。 特点：此法简朴可靠，染色时间短，惯用于活检病理组织检查。结缔组织染色网状纤维染色第20页第20页网状纤维染色应用肿瘤诊断和判别诊断： 癌和肉瘤判别：癌巢周围存在网状纤维；肉瘤中网状纤维围绕每个细胞 尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，淋巴瘤内存在大量网状纤维 脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质瘤少结缔组织染色网状纤维染色第21页第21页网状纤维染色应用一些梭形细胞肿瘤诊断：已被免疫组化取代，很少用 平滑肌瘤瘤细胞间可见大量平行分布网状纤维； 纤维肉瘤则见大量网

9、状纤维密集包绕细胞； 滑膜肉瘤梭形细胞产生网状纤维少。结缔组织染色网状纤维染色第22页第22页网状纤维染色应用判断组织坏死性质和预测坏死后结局： 、凝固性坏死：用网染能够观测到早期凝固性坏死处网状纤维支架还保留特点。 、肝炎坏死范围和程度：如网状支架塌陷，则演变成肝硬化。 结缔组织染色网状纤维染色第23页第23页网状纤维染色应用骨髓网状纤维染色： 结缔组织染色网状纤维染色第24页第24页580例骨髓病变网状纤维染色结果第25页第25页胶原纤维是结缔组织中含量最多一个，皮肤，肌腱，硬膜等处丰富纤维母细胞合成，化学成份为胶原蛋白不溶于水，在酸性溶液中膨胀HE染色呈红色，易辨认出现质和量改变时，与疾

10、病状态相关 结缔组织染色胶原纤维染色第26页第26页染色原理： 胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸性染料含有不同程度扩散性，扩散性高小分子容易进入结构致密组织（肌纤维）间隙，扩散性低大分子只可能进入结构疏松组织（胶原纤维）间隙，从而产生不同染色。结缔组织染色胶原纤维染色第27页第27页Van Gieson（V.G）染色：结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑色或灰色Masson三色染色：结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：灰蓝色或灰黑色结缔组织染色胶原纤维染色第28页第28页应用：显示组织，器官损伤或炎症修复与纤维化程度，如早期肝硬化显示与判断心肌坏死后被纤维组

11、织取代区域和病变新旧程度：HE染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则颜色不同；胶原染色新形成胶原多呈细丝状，成熟后则粗大，不规则波浪状区分透明变性和淀粉样变性判别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症肿瘤判别诊疗：纤维源性肿瘤诊疗结缔组织染色胶原纤维染色第29页第29页第30页第30页第31页第31页染色办法和结果：Verhoeff铁苏木素染色结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原纤维呈红色结缔组织染色弹力纤维染色第32页第32页应用：（1）显示皮肤组织中弹刀纤维改变：如硬皮病，皮肤松解症等（2）显示与判断心血管疾病： 判别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板情况 高血压小

12、动脉改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚 （3）观测疾病时弹力板是否破坏结缔组织染色弹力纤维染色第33页第33页第34页第34页 糖类物质除参与细胞代谢外，现已证实还参与各种细胞功效活动，包括蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫辨认等，糖生物学已成为一门复杂学科。 糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，病理学中最故意义是糖原和黏多糖。 因糖原极不稳定，易自溶，因此做糖原分析组织应在取材后立刻固定。糖原是水溶性，提议最好使用酒精福尔马林。 糖类物质（碳水化合物）染色第35页第35页染色原理： 过碘酸是一个氧化剂，它能氧化糖类及相关物质中1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff试剂

13、结合形成亮红色终产物-碱性品红。形成颜色深浅取决于组织内反应乙二醇浓度。结果： 糖原和其它PAS阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色糖类物质染色1、PAS染色（Periodic Acid Schiff PAS）第36页第36页应用：肿瘤诊断和判别诊断基底膜厚度判断（肾病诊断）基底膜完整性病原菌感染诊断 糖类物质染色1、PAS染色第37页第37页糖类物质染色1、PAS染色PAS反应阳性物质第38页第38页染色原理： 染色机制不清，也许是阿辛蓝中异硫脲基通过静电与组织内多聚阴离子相连。结果： 酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）： 蓝色 蛋白多糖和透明质酸： 蓝色 细胞核：红色糖类物质染色2、AB染色第39

14、页第39页应用用于普通黏液性病变观测。在肿瘤诊断与研究中： 用于肿瘤类型判别，如黏液腺癌与未分化癌判别，黏液表皮样癌与鳞癌判别； 黏液染色还能够证实癌细胞是否浸润间质； 观测胃黏膜腺体肠上皮化生等糖类物质染色2、AB染色第40页第40页组织中粘液物质分类糖类物质染色2、AB染色第41页第41页中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十二指肠腺等处；酸性黏多糖：其基质成份可分为硫酸性（HID染色呈棕黑色）和非硫酸性（AB染色呈蓝绿色）两种形式存在，主要分布于消化道、呼吸道及其它部位黏液腺分泌物中；黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白，见于各种组织上皮和腺体导管分泌物中。糖类物质染

15、色第42页第42页 AB与PAS共同染色，亦称套染，对于显示和区别酸性黏液物质与中性黏液物质都有较好效果。结果： 酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。糖类物质染色2、AB-PAS染色第43页第43页 脂类物质染色染色办法和结果：苏丹染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染色后不能长期保留)。Lillie油红O染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细胞核呈淡蓝色。以上两种染色原理：是染料在脂质中溶解度不小于所用溶液溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片，甘油或甘油明胶封固。锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质氢氧化锇；黑色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。

16、应用组织块浸染。第44页第44页 脂类物质染色应用：证实和区别脂肪变性。显示病变脂质沉着，如动脉粥样硬化斑块内胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉积病，如戈谢病（Gaucher disease），尼曼皮克病（Niemann-Pick disease ）等。脂肪源性肿瘤诊断和判别第45页第45页淀粉样物染色 淀粉样物质（Amyloid）是一个细胞外无定形，嗜酸性物质，刚果红染色后在偏正光镜下呈“苹果绿”双折射，含有独特原纤维超微结构，大多数由B-折叠层构象蛋白质组成。 淀粉样物沉积与很多疾病相关，不同疾病所组成淀粉样物蛋白质不同。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻链；Alzheimer病

17、为淀粉样蛋白B前体。第46页第46页染色办法和结果：刚果红染色：淀粉样物，弹力纤维呈红色，核呈蓝色甲基紫染色：淀粉样物呈紫红色，细胞核和基质呈蓝色染色原理： 机制不清楚淀粉样物染色第47页第47页应用：肿瘤诊断与判别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细胞癌可 出现淀粉样物质，染色阳性对诊断提供可靠依据。辨认器官淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等淀粉样物染色第48页第48页微生物染色微生物主要包括：病毒细菌真菌原虫寄生虫第49页第49页微生物染色细菌染色Gram碱性复红结晶紫染色：应用：辨认Gram菌感染结果：Gram阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核呈红色原理：Gram阳性菌含核糖核酸镁盐-蛋

18、白质复合物多，摄取结晶紫多且较牢固，呈蓝色或紫色，而Gram阴性菌则较少，易与碱性复红结合呈红色第50页第50页微生物染色细菌染色抗酸染色（Ziehl-Neelsen染色）：应用：辨认分枝杆菌，如结核杆菌和其它分枝杆菌结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成份是分枝菌酸，它含有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙醇脱色。第51页第51页微生物染色细菌染色其它细菌染色Wathin-Starry染色显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色改良Steiner染色：螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背景呈亮黄色至金黄色第52页第52页微生物染色真菌染色真菌（f

19、ungus）种类较多，常见致病菌如毛霉菌、曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。真菌基本结构成份是含较多黏多糖和蛋白质。常形成肉芽肿和坏死培养是最好办法第53页第53页微生物染色真菌染色Grocott六胺银染色法 结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。 原理：铬酸氧化真菌内多糖化合物，醛基暴露，醛基将六胺银中银尚有呈黑色金属银过碘酸-Schiff （PAS）反应法： 结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色。 原理：第54页第54页色素和矿物质生物体内色素可分为：1）内源性色素： 血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等 非血源性色素 内源性矿物质2）人工色素：组织成份和一些化学物质

20、之间互相作用后产生物质沉积，如福尔马林色素3）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体第55页第55页色素和矿物质染色铁染色： 组织内沉积铁质主要以含铁血黄素方式存在，HE染色下呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结构中，含铁血黄素中铁可分为三价和二价铁，可用不同方式显示。第56页第56页色素和矿物质染色Perls blue（普鲁士蓝）染色： Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁 原理：盐酸与含铁血黄素中三价铁反应形成三氯化铁，三氯化铁与亚铁氰化钾反应生成一个稳定化合物蓝色亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。 结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。第57页第57页色素和矿物质染色Turn

21、bull-Sehmaltzer铁染色：显示二价铁和三价铁 原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价铁转变为二价铁，本来存在二价铁不变，与Turnbull反应呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与turnbull反应，则只显示二价铁结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。第58页第58页色素和矿物质染色 黑色素（Melanin）在黑色素母细胞内合成，黑色素母细胞起源干神经脊，在胚胎发育过程中，由神经脊移行到皮肤、眼和中枢神经系统。 皮肤表皮、毛囊、眼虹膜、睫状体、脉络膜，脑软脑膜、黑质、蓝斑、迷走背核，以及交感神经节和脊神经节节细胞内均可有黑色素沉着。第59页第59页Masson-Fontana银染色法原理：黑色素含有还原性，嗜银，将染液中银还原后使黑色素着色 结果：黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色。色素和矿物质染色第60页第60页应用