高三生物二轮复习学案：微生物的培养和利用

1、微生物的培养和应用学案三、保存菌种：1.临时保藏：固体斜面培养基 一4 c冰箱一转移【学习目标】.能根据不同的需要对实验材料进行灭菌或消 毒，会配制不同用途的培养基。.学会利用微生物的培养技术分离或鉴定某种 环境的微生物方法。.交流分享微生物的培养在生活实践中的应用。【课标要求】1.阐明无菌技术是在操作过程中， 保持无菌物品与 无菌区域不被微生物污染的技术2.举例说明通过调整培的配方可有目的地培养某种微生物.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法【高频考点突破】一、理清微生物培养的 5种基本技术培养基的

2、制备：计算一称量一溶化一灭菌(2)无菌技术：主要包括消毒和灭菌。实验室常用的消毒方法：实验室常用的灭菌方一核为什么 考本专题是偏重学生的实践，以学生动手操作为基础，利用微生物的特点进行分 离或培养而达到某种目的，进而推动生物学的不断进步，提高人类生活质量。四层考什么核心价值通过复习使学生形成科学技术服务于生产实际的核心价值，引导学 生形成合理的科学发展观，能够分析科学技术与生产力的关系，并 具有一定的实验操作水平。学科素养理解生命的本质及各种微生物的生长特点，了解系统分析的思想和 方法，学会用科学的方法和科学的思维去设计科学的实验程序，完 成相关的实验操作。关键能力要求学生有理解能力，分析现实

3、情境解决问题能力。生物技术实践对对学生的考察比较多， 如何利用已学知识解决现实问题比较重要。必备知识会进行无菌操作能根据需要配制不同的培养基学会不同环境中不同微生物的分离方法会用平板划线法、稀释涂布平板法分离、鉴定、计数某种微生物四翼怎么考基础性学案中突出主干知识，每部分都对课本内容进行知识引领，特别强 调容易忽视的文字图表部分。本专题利用选择题对学生的主干知识 进行考察，辅助理解，非选择题的部分内容加强对课本的熟悉。综合性知识综合性：微生物的培养与必修一中原核生物的结构和功能有 关系密切，与发酵工程的相关内容综合性强。能力综合性：图表 的分析能力，多个变量的分析能力等。应用性用于解决某种特定

4、物质污染、水质鉴定等问题创新性本部分内容与实际生活联系密切，只要与微生物相关的生产活动或 个人卫生行为都可以用到本专题的相关技术。2.长期保存：-20 C冷冻箱四、不同菌株筛选原理及部分颜色变化的比较法一法：(3)倒平板操作：待培养基冷却至,左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。(4)平板划线操作：平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作目的是:(5)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培 养基的表面，进行培养。其原理是：二、统计微生物数目的2种方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积的

5、样品中的微生物。O注意划线的方法如下图所示:种类处理结果纤维素分解菌培乔基中加入。与纤维素形成色复合物，纤维素分解后出现透明圈尿素分解菌培乔基中加入。分解尿素后，PH升高，指示剂 变红大肠杆菌用培养基培养菌落呈现黑色亚硝酸盐在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与 对氨基苯磺酸发生重氮反应后， 与N-1-奈基乙二胺盐结合形成玫瑰红色染料红方腐乳加入红曲深红色缺点：不能区分死菌和活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的,就能推测出样品中含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数=(C+V)XM,其中C代表某一稀

6、释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在平板进行计数。【高考链接】1.下列有关微生物培养的叙述，错误的是()A.测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B.在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C.酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用的 D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源2.做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将

7、打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上3.下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是（）A .采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的菌落数B.当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C.为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D.在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统 计结果4.（不定项）下列关于微生物培养的操作或过程正确的是：A.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株B.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细

8、胞的伤害C.无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料（如培养基、接种环等）都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌D.平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧5.（不定项）漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。如图是分离、 纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（多选）（）A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B.筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C.在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株6（不定项）在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素

9、（浓度 相同）的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图所示。以下判断正确的是（）A. a处抑菌效果小于 b处 B. b处的滤纸片没有沥干 C. c处抗生素无效 D. d为对照7.淀粉酶是用途最广、产量最大的酶制剂之一，广泛用于印染、酿造和医药行业。请回答:（1）配制筛选能分泌淀粉酶的微生物的培养基时，应以为 唯一碳源，在该培养基中加入碘酸钾一碘化钾后，有的菌落周围出现透明圈，说明这些菌落能分泌淀粉酶，原理（2）从面粉加工厂附近的土壤中，取 5g 土壤倒入装有45mL蒸储水并带有玻璃珠的锥形瓶中振荡， 制成土壤悬液。将土壤悬液稀释105倍后，用 法分别将0.1mL的菌液接种到3个平板

10、上，培养一段时间，3个平板中的菌落数分别为53个、60个、73个，则土壤悬液中分泌淀粉酶的微生物有 个/ mL将接种后的平板置于恒温培养箱中 （填“正置”或“倒置”）培养。（3）对该微生物鉴定表明，此菌是一种芽抱杆菌。淀粉酶是一种胞外酶，此菌中与淀粉酶的产生和分泌有关的细胞器有,因此，在动物饲料中添加芽抱杆菌或其代谢产物可提高动物 的效率。一般情况下，透明圈直径（D）和菌落直径（d）的比值（D/d）反映了淀粉酶的活性，它们的关系是（4）若需较长时间保存该菌种，可用的方法是 。验结束后，使用过的培养基应该需经 处理后才能倒掉。8.硝基苯酚（PNP）是一种黄色有机物，也是一种常见的环境污染物。目前

11、常用能降解 PNP的细菌处理含PNP的废水。请回答： 在筛选PNP降解菌的固体培养基中应加入 作为唯一碳源，将含PNP降解菌的菌液接种 在上述培养基上时常用的方法是，PNP降解菌的降解效率的高低可通过进行 鉴定。（2）在制备稀释倍数为IoZ。8的菌液时，依次用移液管移取1mL菌液至盛有 mL蒸储水的试 管中。在移液前，应吹吸3次，目的是。（3）此实验需要灭菌的材料或用具有 。用到的灭菌方法包括 。（4）实验结束后，与其他同学的实验结果相比 ，甲同学培养的不同浓度下的菌落数均显著偏低。导致甲同学的实验数据偏低的原因有 。.解磷菌能分泌酸性物质，分解并释放土壤中固化的磷元素。请回答下列问题：（1）

12、磷是植物生长发育白主要元素之一，可用于合成植物体内的 等化合物。（至少写两种）。（2）筛选土壤中的解磷菌时，普通培养基中加入磷酸钙 ，筛选原理是观察培养基中是否出现溶磷圈，培养基中出现溶磷圈的原因是 。解磷菌主要有细菌和真菌两种类型，欲从菌落特征上判断其类型，应观察并记录等参数。（4）在用稀释涂布平板法计数土壤中解磷菌数量时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 。甲、乙两同学用同一稀释培养液计数菌落数时，甲同学涂布了 3个平板，统计的菌落数分别是 135、146和152,乙同学涂布了 3个平 板，统计的菌落数分

13、别是45、51和60,甲、乙两同学统计的菌落数有较大差异的原因是.有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。 研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是 。(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是 。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有(3)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是 ,该实验设计是否合理？为什么？11.自生固氮菌可不与其

14、他植物共生，独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。研究人员 欲从土壤中筛选高效的自生固氮菌株进行研究。请回答下列问题：(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是 (填序号)。酒精灯接种环高压蒸汽灭菌锅棉塞(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后， 可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于 培养基上进行筛选。在如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、 四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源， 其原因是(3)稀释涂布平板法还可用于检测土壤中自生固氮菌的含量，图中用该方法得到的菌落分布

15、图中， 最符合计数要求的是图中的 。用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？ 为什么？ 。(4)将1 g 土样稀释103倍后分别取0.1 mL 土壤浸出液，涂布到 3个琼脂固体培养基的表面进行培 养，记录到自生固氮菌的菌落平均数为130。则每克土样中自生固氮菌为 。(5)若将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。种类处理结果纤维素分解菌刚果红种类处理结果纤维素分解菌刚果红红尿素分解菌酚红指示剂大肠杆菌伊红美监局

16、考链接一、微生物培养的5种基本技术调pH倒平板。(2)煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。(3)50 C(4)将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面(5)在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞 菌落。二、统计微生物数目的 2种方法(2)菌落数稀释倍数。 30-300三、2.甘油管藏，从而能在培养基表面形成单个四、不同菌株筛选原理及部分颜色变化的比较，从而能在培养基表面形成单个1-3.BDC 4.BD 5.BC 6.BCD(1)淀粉 淀粉遇碘变蓝，淀粉酶分解淀粉后出现透明圈(2)稀释涂布平板法6.2 X 107 倒置(3)核糖体 营养物质消化吸收 D/d 越大，菌株(菌落)产生淀粉酶的能力越强或淀粉酶活性越高(4)甘油管藏灭菌(1) PNP涂步平板 透明圈的大小(2) 9保证菌液与水充分混合(3)培养基、培养器皿、接种工具灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌(4)各梯度浓度的菌液浓度偏低；接种量偏少(1)(核酸、ATP辅酶(还原氢)、磷脂(答出两种即可)