绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究

1、绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究张凤，杨桂文，张福淼，赵静，崔英杰，安利国【摘要】目的研究绿茶提取物和表没食子儿茶素没食子酸酯EGG对脾脏细胞增殖和巨噬细胞N分泌的影响。方法采用TT法检测脾脏细胞增殖变化，用Griess试剂法检测N产量的变化。结果绿茶提取物和EGG都可以促进脾脏细胞增殖，并可以协同nA刺激脾脏细胞的增殖；还可以抑制LPS激活的巨噬细胞RA264.7的N产量。结论绿茶提取物和EGG具有免疫调节和减轻炎症反响的有益作用。【关键词】绿茶表没食子儿茶素没食子酸酯免疫细胞Abstrat：bjetiveTstudytheeffetfgreenteaextratan

2、dEpigallatehingallateEGGnspleenellprliferatinandarphageNprdutin.ethdsTTassayasusedtdetetspleenellprliferatinhangeandGriessreagentethdasusedtdetetarphageNseretin.ResultsGreenteaextratandEGGuldprtespleenellprliferatinandbeabletperateithnAtstiulatespleenellprliferatin.TheyuldalsinhibitLPS-ativatedarpha

3、gesRA264.7Nprdutin.nlusinGreenteaextratandEGGhaveiunregulativeeffetandanalleviateinflaatryreatin.Keyrds：Greentea;EGG;Iuneells现代研究说明绿茶具有抗氧化、抗癌和防癌、降血糖、抑菌和抗病毒等生物学活性15。在人们日益注重保健养生的今天，绿茶的系列生物学活性无疑也成为研究的热点。本实验选用山东日照绿茶为材料，用70乙醇法抽提得到绿茶提取物，研究其对免疫细胞的作用。1器材昆明种小鼠山东大学实验动物中心。EGGSiga；绿茶提取物70乙醇法抽提；RPI1640干粉GIB；小牛血清

4、杭州四季青生物工程材料；噻唑蓝Siga；青霉素、链霉素北京鼎国生物技术开展中心；nASiga；LPSSiga；DR显微镜LEia；-17A二氧化碳培养箱SANY；del550酶标仪BI-RAD。红细胞裂解液：NH4l8.29g，KH31g，EDTANa37.2g。将以上试剂溶解于800l三蒸水，充分搅拌溶解混匀后，用1N的盐酸调pH值至7.27.4，加水补足到1000l。过滤除菌，4保存备用。Griess试剂：A液：对氨基苯磺酰胺0.5g，10醋酸150l；B液：萘胺0.1g，三蒸水20l，10醋酸150l，冰箱中保存，使用前A液B液等体积混合。2方法2.1TT法测定小鼠脾脏细胞的增殖取实验小

5、鼠，脱颈处死。无菌条件下取出脾脏，剪碎，200目尼龙网过滤。搜集的细胞以无血清RPI1640培养液洗涤两遍，搜集后加红细胞裂解液，中止裂解后搜集细胞，以无血清RPI1640培养液洗涤两遍，重悬细胞于RPI1640培养液中。调整脾脏细胞浓度为2106ells/l，置于96孔板中，绿茶提取物或EGG作用48h及绿茶提取物或EGG与nA20g/l共作用48h。实验终止前4h每孔加TT(5g/l)20l，离心，弃上清液中止反响，每孔加150l二甲基亚砜，轻轻摇动30in溶解紫色结晶，490n波长酶标仪比色。SI=nA刺激后A值/未加刺激A值2.2GriessS法测定巨噬细胞RA264.7N产量N的定量

6、可通过测定N2-和N3-的总和来实现，根据这一原理，应用GriessS试剂来定量检测N程度。巨噬细胞培养上清与GriessS试剂室温下反响10in，于490n处检测吸光值。3结果3.1TT法测定小鼠脾脏细胞的增殖3.1.1绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响TT法检测绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响，结果说明它不仅能刺激脾脏细胞增殖，而且也能协同nA刺激脾脏细胞的增殖。见图12。3.1.2EGG对小鼠脾脏细胞增殖的影响TT法检测EGG对小鼠脾脏细胞增殖情况说明：EGG体外也可以刺激脾脏细胞的增殖，并协同nA刺激脾脏细胞增殖。见图34。3.2GriessS法测定巨噬细胞RA264.7N产量绿茶提

7、取物和EGG都可以降低LPS激活巨噬细胞RA264.7N产量，浓度越高，作用越强见图56。图1绿茶提取物体外刺激脾脏细胞增殖略图2绿茶提取物对nA刺激的脾脏细胞增殖的影响略图3EGG体外对脾脏细胞增殖的影响略图4EGG对nA刺激的脾脏细胞增殖的影响略图5绿茶提取物对LPS激活巨噬细胞RA264.7N产量的影响略图6EGG对LPS激活巨噬细胞RA264.7N产量的影响略4讨论脾脏内的大量免疫细胞是其执行免疫功能的根底,其中包括巨噬细胞、淋巴细胞、树突状细胞(dendritiell,D)等。脾脏既可通过吞噬作用完成机体的非特异性免疫功能,也可以通过T细胞介导的细胞免疫和B细胞介导的体液免疫完成机体

8、的特异性免疫功能,脾脏同时也是产生记忆性T细胞、B细胞的重要场所,对再次免疫应答起重要作用6。T淋巴细胞在非特异性物质刺激下，可被激活向淋巴母细胞转化，在转化过程中DNA、RNA及蛋白质合成增加，使细胞分裂增殖。淋巴细胞的分裂增殖那么是其发挥作用大小的一个衡量指标。nA激活T细胞增殖时可释放IL-2与IFN-等多种淋巴因子，且IFN-有促肾上腺皮质激素和-内啡肽的活性片断，均具有免疫调节作用。实验说明绿茶提取物和EGG都可以刺激脾脏细胞增殖，并且可以协同nA促进T淋巴细胞的增殖。因此，它们都能促进免疫活性物质的释放，具有免疫调节作用。同时，T细胞引起的特异性免疫应答在机体去除病原体、移植免疫和

9、抗肿瘤免疫中有重要作用。T细胞还可以分泌淋巴因子在多个环节上参与免疫调节7，8。综上，绿茶提取物及EGG可以通过促进免疫细胞增殖和免疫活性物质的释放来发挥其免疫调节作用。巨噬细胞具有较强的吞噬才能和杀伤才能，是近年来研究比拟活泼的一种重要的免疫活性细胞。它们既参与非特异性免疫这一重要的生理过程，又可以呈递抗原，产生细胞因子参与特异性免疫应答。N是巨噬细胞等对病原体和肿瘤细胞的细胞毒活性的效应分子，主要由活化的巨噬细胞等大量的表达一氧化氮合酶时产生。一氧化氮合酶在正常生理情况下不表达，主要在巨噬细胞、中性粒细胞和免疫细胞等受到细胞因子如IFN-，TNF-，Il-2，Il-1等及细菌脂多糖LPS作

10、用时被激活而产生，先表达iNS的RNA，再生成iNS，从而诱导产生持续时间长且大量的N9，10。高程度的N对细胞主要发挥细胞毒作用，N本身有毒性，能抑制线粒体酶，如柠檬酸合成酶、乌头酸酶等，此外N能与超氧阴离子-2反响产生一种氧化性更强的自由基过氧亚硝酸盐N-，这种自由基很稳定，一旦进入靶细胞或邻近细胞将引起强烈的细胞毒性作用甚至损伤组织，因此，测定巨噬细胞产生N的变化情况，对判断机体免疫状态具有重要的意义。利用内毒素LPS作为巨噬细胞RA264.7的N合成诱导剂，参加不同浓度绿茶提取物或EGG，培养后取上清液，测定N产生量。发现绿茶提取物和EGG对LPS诱导的N合成均有明显的抑制作用，其抑制

11、作用具有显著的量效关系。因此，绿茶提取物和EGG一定意义上都可以抑制炎症介质的生成，从而减轻炎症反响。然而，这种作用是如何发挥的，是通过抑制一氧化氮合酶的产量和活性还是通过其他途径，还需要进一步实验证实。综上所述，绿茶提取物体外具有免疫调节和减轻炎症反响等有益作用，这就为开发绿茶提供了实验基矗【参考文献】1ShutHA,YaR.TeaasaptentialhepreventiveagentinPhIParingenesis:effetsfgreenteaandblakteanPhIP-DNAaddutfratininfealeF-344ratsJ.Nutraner，2000,36(1):52.

12、2HazguiS,BnnetA,Narki-RabyB,etal.Epigallatehin-3-gallate(EGG)inhibitstheigratrybehavirfturbrnhialepithelialellsJ.RespirRes，2022,9:33.3LeeSI,KiHJ,BY.Effetfgreenteaand(-)-epigallatehingallatenethanl-induedtxiityinHepG2ellsJ.PhyttherRes，2022,22(5):669.4Venables,HulstnJ,xHR,etal.Greenteaextratingestin,f

13、atxidatin,andglusetleraneinhealthyhuansJ.AJlinNutr，2022,87(3):778.5hJ,YangES,ShinS,etal.Epigallatehingallate,anstituentfgreentea,regulateshighgluse-induedapptsisJ.ArhPharRes，2022,31(1):34.6李宗芳,张澍.脾脏的根底研究进展与展望J.西安交通大学学报(医学版),2022,29(1):1.7henS,hinnasayA,BisasSK,etal.ellinteratinknledgebase:annlinedatabasefrinnateiuneells,ytkinesandhekinesJ.InSiliBil，2022,7(6):569.8闵静，敖敏章.竹节参总皂苷免疫调节作用J.时珍国医国药，2022，911：2784.9YnDY,h,KiJH,etal.EffetsfaTetraethxyhydrxyflavnep7FntheExpressinfInflaatryediatr