糖尿病大鼠心肌组织中bcl

1、糖尿病大鼠心肌组织中bcl【关键词】糖尿病；,心肌细胞；,bl摘要：目的：讨论糖尿病大鼠心肌组织中bl2的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法：按体重随机分为正常对照组(10只)和实验组(10只),各组大鼠禁食12h后,实验组大鼠以60g/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1l/L、pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11g/l的STZ溶液),正常对照组大鼠(N)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后,采尾血测血糖,以血糖浓度16.6l/L、饮水量40l/d、尿糖强阳性(+)的大鼠作为糖尿病大鼠。将糖尿病模型组和对照组大鼠处死,切取心室肌组织,进展组织

2、切片和免疫组织化学实验观察。结果：糖尿病模型组心肌细胞Bl2表达的平均光密度及阳性面积率与对照组心肌细胞比拟有显著性差异P0.01)。结论：糖尿病导致的心肌病与心肌细胞凋亡等有关。关键词：糖尿病；心肌细胞；bl2；细胞凋亡糖尿病性心肌病是糖尿病的慢性并发症之一,是糖尿病发病过程中特异性的心肌受损和心脏功能改变,糖尿病性心肌病的出现可以不伴有缺血性病变、血管病变及高血压等并发症。目前糖尿病性心肌病确实切病因还不清楚,但目前认为糖尿病性心肌病的发生主要与心肌能量代谢紊乱、a2+超载、血管动脉硬化、氧化应激、高血压及高血糖导致的心肌细胞凋亡等有关。本研究采用免疫组织化学方法，研究了糖尿病心肌组织中b

3、l2及bax蛋白表达情况，旨在讨论糖尿病所致心肌细胞凋亡现象。1材料与方法11材料昆明种SD大鼠20只,雄性,体重180200g,由武汉大学医学院实验动物中心提供,适应饲养1周后进展实验。12方法121糖尿病模型制备及分组按体重随机分为正常对照组(10只)和实验组(10只),各组大鼠禁食12h后,实验组大鼠以60g/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1l/L、pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11g/l的STZ溶液),正常对照组大鼠(N)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后,采尾血测血糖,以血糖浓度16.6l/L、饮水量40l/d、尿糖强阳性(

4、+)的大鼠作为糖尿病大鼠。将糖尿病模型组和对照组大鼠处死,切取心室肌组织,进展组织切片和免疫组织化学实验观察。122主要试剂和仪器浓缩型鼠抗人Bl2单克隆抗体美国Santaruz公司；超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒福州迈新公司；DAB显色试盒及多聚赖氨酸北京中山生物技术。YY781型医用微波仪(浙江临安电子器材厂消费)；家用高压锅。123方法免疫组织化学SP法检测Bl2抗原，其主要步骤如下：组织切片5，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；3%过氧化氢，37孵育10in以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗45in；Bl2采用微波抗原修复3档，10in，PBS洗45in；正常羊血清37孵育10in以减

5、少非特异性反响；一抗Bl2，1:50)37孵育1h，PBS洗45in；生物素标记的二抗，37孵育10in，PBS洗45in；链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37孵育10in，PBS洗45in；DAB显色液显色，自来水冲洗终止反响；苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组，人扁桃体作为Bl2阳性对照组。124免疫组织化学结果判断Bl2相关抗原以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反响。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反响物。采用HPIAS2000高明晰度彩色病理图文报告管理系统同济千屏影像公司对Bl2的表达进展定量分析，每张切片随机选取5个完好而不重叠的高倍镜视

6、野400)，测定每个视野下阳性反响的平均光密度、阳性反响面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值阳性面积率单位面积中阳性反响的总面积/单位面积中细胞的总面积100。125统计学处理对各组免疫组织化学反响阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNKq检验，检验水准为0.05。2结果对照组心肌细胞胞浆内可见较多棕黄色颗粒，糖尿病模型组心肌细胞胞浆内无棕黄色颗粒沉积。图像分析结果显示：对照组心肌细胞Bl2表达的平均光密度为0.1535，糖尿病模型组心肌细胞Bl2表达的平均光密度为0.0594；对照组心肌细胞Bl2表达的阳性面积率

7、为0.2589，糖尿病模型组Bl2表达的阳性面积率为0.1363。经单因素方差分析，组间有显著性差异P0.01)。经q检验，糖尿病模型组与对照组之间，Bl2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异P0.01)，见表1。表1略注：*糖尿病模型组与对照组比拟，P0.01。3讨论糖尿病是目前临床学科中进展最迅速的学科之一。糖尿病患者在中国及世界范围内均呈迅速增多的趋势,目前全世界有糖尿病患者1.125亿,我国糖尿病的患病率为2.51%15。糖尿病患病率最高地区为新疆自治区克拉玛依市,其次是北京地区。据报道，西藏糖尿病的患病率也呈上升趋势。重度糖尿病及合并多脏器严重病变的患者治疗尤为困难,假设不积极防治,

8、常常需截肢而致残,甚至导致死亡。因此防止糖尿病越来越引起广阔医护人员及患者的关注。糖尿病是一组由于多种原因引起的胰岛素分泌缺陷,或胰岛素作用缺陷,或两者兼而有之引起的以高血糖为特征的代谢疾玻胰岛素是由胰腺中细胞分泌的,是葡萄糖代谢中不可缺少的一种激素。当胰岛素分泌缺乏,葡萄糖利用及贮存受阻,血液中葡萄糖浓度(血糖浓度)就会升高。血糖浓度超过一定程度,多余的葡萄糖便通过肾脏排出体外,这时化验小便会发现尿糖阳性,故称糖尿玻糖尿病的根本特征是长期高血糖,慢性高血糖可引起多脏器的长期损害、功能减退和衰竭，尤其是眼、肾脏、神经、心脏和血管68。病情严重或应激时可发生急性代谢紊乱,例如:糖尿病酮症酸中毒、

9、糖尿病高渗性昏迷等。随着经济开展,人民生活程度不断进步,老龄化社会的到来,糖尿病(diabetesellitus,D)在中老年人群中的发生率日益增高。D及其并发症对患者的安康和生命造成严重威胁,甚至导致残废和死亡。血管病变是糖尿病主要慢性并发症,其中大血管病变是糖尿病死亡的主要原因。ai等9研究发现,高血糖可直接导致活体心肌细胞凋亡,高血糖导致的心肌细胞凋亡至少局部是通过细胞色素激活的aspase3途径的激活而控制。ai等报道在糖尿病患者和动物模型中都可观察到心肌细胞死亡,通过抗氧化剂或凋亡信号途径的特异性抑制剂抑制心肌细胞死亡,可以明显的阻止糖尿病的心脏毒性,因此心肌细胞死亡在糖尿病性心肌病

10、变中有重要作用。bl2原癌基因家族是一组存在于线粒体膜及核膜的蛋白质,与细胞凋亡关系亲密,其中bl2高表达可抑制凋亡，bax那么为促凋亡因子。当触发因素存在时,bl2与bax的比值决定着细胞是存活或是死亡。本研究结果显示，与对照组比拟,心肌中促凋亡因子bax的表达增加,而抑凋亡因子bl2的表达略有下降，同时发生心肌细胞凋亡现象，提示凋亡相关基因可能参与调控心肌损伤过程。参考文献1Karnafel.Diabetiardiypathy.Pathphysilgyandlinialipliatins.PrzeglLek,2000,57:9211.2nteagudPT,isesVA.Influenefa

11、utnineurpathyupnleftventriulardysfuntinininsulin2dependentdiabetipatients.linardil,2000,23(5):371375.3Ayaz,anB.Prtetiveeffetfseleniutreatentndiabetesinduedyardialstruturalalteratins.BiTraeEleRes,2002,89(3):215226.4FernandezFunezA,abreraSleR,HernandezA.Effetfatprilnleftventriulardiastlidysfuntininyng

12、insulindependentdiabetipatientsithiralbuinuria.edlin,2002,118(9):321326.5UngerRH,ZhuYT,QriL.Regulatinffattyaidhestasisinells:nvelrlefleptin.PrNatlAadSiUSA,1999,96(5):23272332.6FinkBN,LehanJJ,LeneT,etal.TheardiaphentypeinduedbyPPARalphaverexpressiniisthatausedbydiabetesellitus.JlinInvest,2002,109(1):121130.7FinkBN,HanX.AritialrlefrPPARalphaediatedliptxiityinthepahgenesisfdiabetiardiypathy:dulatinbydietaryfatntent.PrNatlAadSiUSA,2022,100(3):12261231.8LeeY,YuX.PPARisneessaryfrthelippeniat