LAMP技术在微生物检测中的应用

1、LAMP技术在微生物检测中的应用LAP技术在微生物检测中的应用一、前言LAP技术是随着微生物检测技术开展而不断开展的，LAP技术在微生物检测中的应用中越来越广泛。经过几十年的迅速开展，目前LAP技术已广泛应用于很多微生物检测当中，成为一门实用的技术。二、LAP技术的优缺点1、优点一、特异性强、灵敏度高4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域,反响过程不会受到反响混合物种非靶序列DNA的影响,保证了LAP扩增的高度特异性。在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目的基因是否存在,可用于细菌或病毒的定性检测。二、等温高效LAP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1h内可将靶序列扩

2、增至1091010倍。而且受非靶序列的影响小,模板也不需要热变性。三、整个扩增反响操作简便、快捷LAP反响过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀,肉眼即可直接观察,是鉴定反响是否进展的最直接方法。另外,LAP扩增产物可以像PR反响利用凝胶电泳结合成像系统进展鉴定,通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。四、实验装置简单,费用相对较低LAP反响不需要进展模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等,在操作过程中,仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。2、缺点一、LAP技术对试验设计的要求较高需要设计的引物数目相对较多、构造复杂,需要考虑到靶序列的片段及茎环构造等因素。在

3、检测高度变异的病原体时,实验设计相比照拟困难二、LAP技术在一次反响中只能检测一个病原体LAP技术的阳性反响并不只呈现单条带,而出现拖尾和一些低分子质量的带,一旦产生非特异性扩增,那么不易鉴别。三、食源性致病徽生物和临床致病微生物检测行业的开展现状随着生态环境的破坏、经济全球化的急剧开展等环境和社会因素变化,食品平安、环境保护和医疗安康问题日益受到关注。病原微生物正在向人类发起挑战:新的致病微生物突变对人类社会构成严重威胁;大规模突发性疾病是当前生物医学面临的重大挑战;一些重大传染病的死灰复燃,在我国和世界人口大多数的欠兴旺地区情况仍然严重。致病微生物的检测技术急需向本文由论文联盟.LL.搜集

4、整理高通量、高精准度和快速现场应用多元方向开展。目前基层食品平安、环境卫生和医学临床对致病微生物的检测诊断仍以微生物别离培养技术为主、分子或生化手段为辅,通常序繁复、耗时长、费用高,并且灵敏度和特异性不强。国内外学者对致病微生物的检测方法进展了大量研究,建立了从病原别离鉴定、特异蛋自的免疫学检测技术、形态学鉴定和白动生化鉴定,到核酸探针、PR等分子生物学检测方法。在基因程度上的核酸检测,其灵敏度远高于病原别离鉴定,同时防止了医学临床检验上的窗口期影响,赢得时间,对于预防控制重大传染性疾病至关重要。近年来核酸检测在快速性、平安性、准确性和灵敏性等方面都有很大的进步。这些新技术打破了传统的形态学、

5、生化反响等旧形式,不需要对微生物进展别离提纯,而直接用样品或样品的增菌液进展快速检测,并且与分子生物学技术及生物信息学设计相结合,向准确、快速、灵敏和自动化的方向开展。日前流行的以PR为代表的核酸检测技术在实际应用中也存在一些问题,如PR技术需要专门的PR仪,且存在易穿插污染和操作过程烦琐的缺点。而荧光实时定量PR虽然较好地解决了交义污染,并简化了操作过程,但却需要定量PR仪,因此不适用于现场快速检测。且实时定量PR技术中荧光探针的本钱较高,加大了推广的难度。目前国内外的致病微生物的检测产品市场中,缺少快速、准确、简便的分子检测试剂盒,不能满足用户的检测要求,加上现有产品的假阴性和假阳性问题比

6、拟严重,导致用户使用的信心缺乏。所以,及时运用生物技术开展的最新成果对满足病原微生物检测的要求具有重要意义。食品平安检测,医学病原微生物诊断,农畜牧致病微生物检测,水体微生物等等领域,都非常需要快速、准确、简便、设备投入少的核酸检测技术。四、LAP技术在微生物检测中的应用1、细菌检测一、分枝杆菌属检测由于分枝杆菌生长缓慢,目前临床上使用的检测方法如培养法和分子诊断方法存在耗时长及需要先进的仪器设备等缺点,通过检测24株分枝杆菌和7株非分枝杆菌证实了法的特异性和敏感性。二、志贺菌属及侵袭性大肠埃希菌检测临床和卫生检疫机构一般通过细菌培养和法检测志贺菌属及侵袭性大肠埃希菌。通过设计6对引物(包括4

7、个特异引物和两个环引物)来扩增志贺菌属和侵袭性大肠埃希菌均携带的侵袭性质粒抗原基因(),用法来检测志贺菌属及侵袭性大肠埃希菌,整个过程只需2,且每次反响最低只需8。三、假结核耶尔森菌检测假结核耶尔森菌是一种重要的动物媒介性传染性病原微生物,可自猴、狗、猪、兔、鹿、禽鸟等多种动物中别离到此种细菌。目前的基因诊断方法中,的应用最为广泛。四、肺炎链球菌检测目前临床使用的检测方法鉴别肺炎链球菌、轻型链球菌、口腔链球菌三种基因相似性链球菌的结果不太理想,针对肺炎链球菌的特异性基因序列设计6条引物,认为利用法检测肺炎链球菌是一个可靠且敏感的检测手段。五、耐药性细菌检测耐药性细菌已成为医院感染的重要病原菌,

8、因此快速、准确检测耐药性细菌,对预防耐药性细菌的感染具有重要意义。认为该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速,适用于直接快速基因检测临床标本中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。2、病毒检测一、丙型肝炎病毒()检测是一种常见的病毒,它可以通过血液和母婴传播等方式感染人而造成丙型肝炎的流行。而在基因诊断方面普遍采用的套式-不但繁琐,而且因为特异性低和易穿插污染,往往结果并不可靠,很难作为一种临床上的常规方法进展推广。二、诺瓦克病毒检测诺瓦克病毒是引起人类腹泻的一种重要的传染性病原体,可在幼儿园、医院、学校传播流行,由于诺瓦克病毒培养困难,目前一般通过电镜或-进展检测。三、人疱疹病毒6型检测原发性-6

9、感染虽然是一个良性的自限性疾病,但它也可引起严重的并发症。由于-6感染的早期表现为发热,没有任何皮肤病症,临床早期诊断显得很困难。故建立一个可靠和快速的检测方法用于早期-6感染发热阶段的诊断显得尤为重要。3、支原体检测用于肺炎支原体感染的常规检测方法有培养法、血清学和核酸扩增技术,培养法条件要求较高,别离和鉴定需12周,周期太长且阳性率低,因此对临床帮助不大。血清学方法灵敏度不高且要求采集病人急性期和康复期的血清标本,更快更灵敏的和-用于肺炎支原体的检测已有报道,然而其需要昂贵的设备限制了其广泛运用。4、真菌检测南美牙生菌病()是一种由热依赖的二相真菌巴西类球孢子菌()引起的疾病,高发于拉丁美洲国家,而在非流行地区,的诊断比拟困难。5、寄生虫检测非洲锥虫是医学和农业上重要的原虫,可引起人类的睡眠疾病或牛的那加那病,如不治疗或误诊可造成人或动物的死亡,假如能做到早期诊断,将会大