标本提取与保存

1、应用聚合酶链反应（PCR）技术测定临床标本中的病原体核酸成分，是一种高度敏感，且 最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质，可干扰PCR反应，故在 做PCR反应前必须进行核酸提取。由于样本的处理及保存对DNA和RNA （尤其是RNA）的影响较大，因此在核酸测定时标 本的处理及适当保存对测定结果的准确有效非常重要。临床标本的处理血清（浆）标本应注意避免溶血，如为血浆标本注意抗凝剂的选择，一般用EDTA-Na2或枸橼酸纳，不可使用肝素。标本为全血时，及时分离出血浆，提取病毒DNA进行检测。由于RNA极易降解，标本的制备和保存方式往往可以影响测定结果。若用血浆标本，应使 用EDTA抗

2、凝。严禁使用肝素，因其对PCR扩增有抑制作用，且无法在核酸提取过程中去 除。抗凝后6小时内分离血浆。如用血清标本，则应尽快（2小时内）分离血清 进行检测，或-20oC保存。全血标本通常用来提取外周血单个核细胞核酸：如基因组DNA、线粒体DNA、总RNA等。抗凝剂：一般使用EDTA-Na2、枸橼酸纳，不使用肝素。7.组织组织有新鲜组织和石蜡切片。新鲜组织的处理步骤：先用生理盐水洗二次，然后将其捣碎或剪碎（用眼科剪），加蛋白酶K消化后提取核酸石蜡切片用于核酸提取，需先用二甲苯脱蜡，再用蛋白酶K消化后进行DNA提取。标本的保存血清（浆）分离出的血清（浆）如不立即提取核酸，保存于-20C待检。尽快分离

3、血清（浆），如不立即提取RNA,保存于-20C待检。长期保存：吸取200川血清，加20u RNasin （RNA酶抑制剂），保存于-70C。已发出结果报告的标本应及时转移至冰箱保存，并由专人负责管理，保存1-2周（时间长短 根据报告单上的承诺而定）。全血标本全血标本如用于DNA提取，可4C下短期保存（数天），时间长易降解，如用于RNA检测，应在取血后尽快提取RNA。最好将DNA或RNA提取后，置-70C保存。组织新鲜组织最好保存于50%乙醇中，具体方法：先用生理盐水将组织洗一次，切成小块，加 入适量生理盐水，然后边摇边加入无水乙醇至终浓度为50%，这样固定的组织标本室温下 可保存数日，4C可保

4、存6年。总而言之，标本的保存及适当的预处理对核酸模板的成功提取具有决定性作用。要强调的 是，所有用于上述处理的容器如试管或离心管，均应在使用前压灭菌。核酸的提取用 10pl DEPC 水溶解 RNA，并加 2u RNasinJ-20 C保存备用RNA若要长期保存，需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度，用的时候再离心下来除去无水乙醇，用DEPC水溶解RNA若要长期保存，需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇，用DEPC水溶解有下面这种说法：保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的 RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮 存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb 的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在 去离子的甲酰胺中，存于-70C。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA 至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RN