果实测酸、总糖、Vc、石细胞原理及方法

1、果实测酸、总糖、Vc、石细胞原理及方法可滴定酸含量测定方法：试剂：0.1%酚欧指示剂（少量95%乙醇溶解，蒸馏水定容100ml）、NaOH 0.01mol/L 器材：烧杯、碱式滴定管、电热恒温水浴锅、研钵、移液管、吸球步骤：不含有色素或者色素含量较低，易形成胶质体的果蔬品。可滴定酸含量测定步骤如下:1、剔除试样的非可食部分，用四分法取可食用部分切碎混匀，准确称取510g置 于研钵中，加入0.30.5 g石英砂研磨匀浆；2、用100mL蒸馏水洗入100mL烧杯后，用移液管吸取10ml加入25ml锥形瓶中，加 蒸馏水15ml，盖上封口膜，置于75水浴上加热，期间不时用玻棒搅拌，30min后取出，

2、冷却；3、加酚欧指示剂35滴，用0.01mol/L NaOH溶液滴定至淡红色，30s内不退色为终。4、计算通式为：含酸量=CV1 V2f / V3M X100%C： NaOH滴定液浓度；V1：滴定所用氢氧化钠体积；V2：提取液的体积；f：苹果酸折算系 数，0.067，0.067g/m mol； V3：被滴定的提取液体积；M：提取样品的质量。可溶性糖测定：还原糖是指具有还原性的糖类。在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游 离醛基的二糖都具有还原性。还原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。非还原性糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。总糖主要指具有

3、还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的 单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以 及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。可溶性糖包括单糖、二糖，多糖很难溶解；可溶性固形物主要是指可溶性糖类，包括单糖、双糖，多糖（除淀粉，纤维素、几丁质、 半纤维素不溶于水），我们喝的果汁一般糖都在100g/L以上（以葡萄糖计），主要是蔗糖、 葡萄糖和果糖，可溶性固形物含量可以达到9%左右。测定可溶性固形物可以衡量水果成熟 情况，以便确定采摘时间。总糖的测定一一蒽酮比色法糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮（C1

4、4H10O） 脱水缩合形成糠醛的衍生物 呈蓝绿色该物质在620nm处有最大吸收，在150昭/ml范围内， 其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30gg左右就能进行测 定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。仪器、试剂和材料仪器：电热恒温水浴锅、可见光分光光度计、电子天平、100ml烧杯、刻度吸管、100ul 和1000ul移液枪等试剂：（1）葡萄糖标准液：l00 gg/ml浓硫酸蒽酮蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100 ml浓H2SO4中，当日配制使用。操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作：取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶

5、液葡萄糖标准曲线测定编号12345678葡萄糖标准液ml00.10.20.30.40.60.81蒸馏水ml10.90.80.70.60.40.20葡萄糖含量ug/ml0102030406080100在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，注意混匀。迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完 后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出， 用冰浴冷却至室温，在620nm波长下以第1管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡 萄糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，作标准曲线。2、样品中可溶性糖的提取：剔除试样的非可食部分，用四分法取可食用部分切碎混匀， 准确称取510g置于研钵

6、中，砂研磨匀浆；用100 mL蒸馏水洗入100 mL烧杯中。3、在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，用1000ul移液枪加入975ul蒸馏水，用100ul 移液枪吸取25ul提取液加入到试管中，空白用蒸馏水代替提取液，注意混匀。迅速浸于冰 水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准 确煮沸10min取出，用冰浴冷却至室温，在620nm波长下以蒸馏水为空白，迅速测其余各 管吸光值。4、计算通式为：含糖量=CV2 V3/ V1M X100%C：标准曲线方程计算得到的样品总糖浓度；V1：测定所加样品体积；V2：测定体系的体积； V3：提取液的体积；M：提取样

7、品的质量。Vc含量测定I维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化还原 反应，并且有解毒作用。人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通 常还需储藏能维持一个月左右的Vc。缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。维生素c属水溶性维生素，分子式c6h8o6。分子结构中具有二烯醇结构。它易溶于水， 微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化 为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的 吸收。根据维生素C在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处(243nm)， 其吸收值A

8、的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯一比尔定律：A=gbc其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol L-1； b为吸收池厚度，cm； 8为 摩尔吸收系数，Lmol-1cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C在最大吸收波 长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查 得浓度，换算为Vc含量。仪器：紫外分光光度计、研钵、试管试剂：10%HCL、1mol/L NaOH、抗坏血酸试验方法:1、标准溶液的配制准确称取0.010 g抗坏血酸，加2mL10%HCl溶解，用蒸馏水定容至100ml，混匀，即 得100 ug-ml-1维生素C标准溶液。2

9、、标准曲线的绘制分别准确移取 100 ug- ml-1 维生素 C 标准溶液 0、0.1 ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.6ml、 0.8ml 于试管中，分别加入 5ml、4.9ml、4.8ml、4.7ml、4.6ml、4.4ml、4.2ml。以水为参比，在最大吸收波长243nm处测定吸光度，以维生素C浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制 标准曲线。VC标准曲线测定编号12345678标准VC ml00.10.20.30.40.60.81蒸馏水ml14.90.80.70.60.40.20VC ug/ml01020304060801003、提取液将样品洗净晾干，称取510g于研钵中，

10、加入1ml10%HCl，加少量石英砂，匀浆，转 移到50ml容量瓶中，稀释至刻度，混匀。移至离心管中离心10min，取上清液即为待测提 取液。4、吸光度的测定待测样品提取液：取1.0 ml待测提取液，放入盛有0.4ml 10%HCl、3.6ml蒸馏水的试 管中，摇匀。以蒸馏水为空白，在最大吸收波长243nm处测定其吸光度。碱处理提取液：依次吸取3.2ml蒸馏水、1.0ml待测池梨提取液和0.4ml 1mol-L-1NaOH 溶液放入试管中，摇匀；静置20min后加入0.4ml 10%HCl，混匀。以蒸馏水为空白，在吸 收波长243nm处测定其吸光度。待测池梨提取液与碱处理池梨提取液的吸光度之差

11、即为池梨样品吸光度。| 蒸馏水 3.6 ml 碱未处理j 10% HCL 0.4 mlI 提取液 1.0 ml | 蒸馏水 3.6 ml 碱未处理j 10% HCL 0.4 mlI 提取液 1.0 ml1mol-L-1NaOH 0.4 ml碱处理提取液1.0 ml静置20min10% HCL0.4 ml5、维生素C含量的计算测得池梨样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出池梨中维生素 C的含量mg-(100g)-1o维生素 C 含量=CXV2XV3X10 0/V XM X10 0 0c：标准曲线方程计算得到的维生素C浓度，ugml-1； V1为测吸光度时吸取样品溶液的体积， ml； V2为

12、测定体系体积，ml; V3为提取样品体积，ml； M为果蔬质量，g。石细胞测定方法(未亲身测定)试剂：匀浆机、烧杯、玻璃棒步骤：1、1cm3小块；3h+3h+3h，冷冻3h，取出完全融化后再冷冻3h，取出待完全融化后再 冷冻3h；2、取出待完全解冻后，加少量水，于匀浆机中22000r/min匀浆3min；3、将匀浆转移直1000ml烧杯中，加水至800ml，用玻璃棒搅拌1min，静置30s,倾出 上层悬浮液，再加水至800ml，重复上述漂洗过程4次，同时收集最初几次漂洗倾出的漂洗 液，重复进行石细胞漂洗收集。4、合并所得石细胞，用粗滤纸过滤。将石细胞铺开，连同滤纸置烘箱中60-65烘至 恒重，取出，干燥器中冷却至室温。收集石细胞，称量，精确导1mg。每处理3次重复。5、石细胞含量=提取的石细胞重量/所用果肉重量X100%。注意事项：加完样品需要混匀；标样（标准曲线）必需用容量瓶，必需要准确；其它试剂可以不用容量瓶；样品提取需过滤或离心，取上清（上面用定量的蒸馏水冲洗），定容；碱式滴定管用橡胶；酸式滴定管用玻璃；分光光度计分可见光和紫外光，可见光用玻璃比色皿；紫外光用石英比色皿；分光光度计预热30min，比色皿注意排