血清二氧化碳酶试剂法测定法

1、血清二氧化碳酶试剂法测定法1. 实验原理PEPCMg2+使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)和稳定的NADH类似物的酶检测终点法。磷酸烯醇丙酮酸+ HCO3- 草酰乙酸 + H2PO4-MDH草酰乙酸 + NADH类似物 + H+ 苹果酸 + NAD+类似物上述反应会破坏下列平衡：CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3-促使CO2向HCO3-的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO2的浓度。在405nm或415nm波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH类似物的减少，和样品中的总二氧化碳浓度呈比例。2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。2.2 类型：血清、肝素血浆。3.

2、标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于28。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。4. 标本运输：常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。6. 实验材料6.1 试剂 奥林巴斯CO2测定试剂盒（货号：1 0950 99 10 试剂6100ml）6.1.1 试剂组成试剂（R）：缓冲液 pH 7.5磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) 400U/L苹果酸脱氢酶(MDH) 4100U/LNADH类似物 0.6mmol/L活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂 适量6.1.2 试

3、剂准备：试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。6.2 校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCal Bicarbonate标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys公司提供的TruLab Bicarbonate控制品进行内部

4、质量控制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal Bicarbonate标准品碳酸氢盐浓度校准

5、仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12. 参考值范围 1：成年人：2229mmol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高和降低表明代谢和呼吸系统酸-碱平衡失调。14. 操作性能14.1 线性范围：450mmol/L。14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)

6、CV(%)样品120.80.311.48样品227.50.431.56样品345.50.531.1614.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对92个样品进行CO2检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.96x+0.56 mmol/L；r=0.984。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1mmol/L。14.5 病人结果可报告范围：450 mmol/L15. 超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为450 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释后，重新测定，结果乘以2。16. 病危报警值的处理17. 方法

7、局限性17.1 本法对二氧化碳的检测范围为450mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释后，重新测定，结果乘以2。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704 mol/L ，结合胆红素浓度 860 mol/L，游离胆红素浓度 684 mol/L，血红蛋白浓度 5.00g/L，甘油三酯浓度 15.8mmol/L时没有观察到干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 参考文献 Muller-Plathe O. Acid base balance and blood gases. In: Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft;1998.p.318-329.Norris KA, Atkinson AR, Smith WG. Colorimetric enzymatic determination of serum total ca