说明中期报告

1、多酚类化合物对牙釉质脱矿的抑制作用Polyphenolic compounds on inhibition of enamel demineralization 指导老师：关晓旭 小组成员：俞媛媛 王姗姗 林梦娜 黄佳梦 金玲玲 文献检阅购买并配置保存液各地医院搜集离体牙完成综素，明确实验方案制定实验方案，进行开题答辩进一步探讨具体实验细节，明确任务分工列出实验耗材清单购买实验试剂联系口腔实验室，了解具体情况分工合作，收集离体牙预实验开展并完成熟悉实验过程，讨论实验问题整理思路，修改完善实验方案离体牙汇总进行中期汇报展示制定实验计划及人员分配实验准备离体牙地点：浙江省口腔医院浙江省口腔医院（城

2、西分院）浙江省第一医院成果：预计需要47颗人离体前磨牙累计收集牙齿71颗可用牙齿50颗原来用于收集的一次性离心管底部呈圆锥形，不便于放置收牙存在竞争，易被他人取走省口和浙一距离紫金港较远，每周收集较不方便牙齿储存液网上购买并查询文献采用适宜浓度进行配置请老师和学姐代为收集定期去医院回收牙齿自行准备数量适宜的广口平底瓶进行收集1. 厚朴酚：购于上海金穗生物科技有限公司，70元/20mg2. 没食子酸：购于上海华蓝技术有限公司，20元/25g3. 茶多酚4. NaF（1g/L）5. 盐酸溶液（1%）6. 冰乙酸（50mmol/l）7. 磷酸二氢钾（1.5mmol/l）8. HEPES（20mmol

3、/l）9. DDW10. 人工唾液11. KCl缓冲液12. 麝香草酚实验准备试剂 没食子酸：1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml 厚朴酚溶液：3.9ug/ml、7.8ug/ml、15.7ug/ml、31.3ug/ml、62.5ug/ml 茶多酚溶液：1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml 人工唾液:NaCl 0.4g、KCl 0.4g、CaCl22H2O 0.795g、NaH2PO42H2O 0.78g、Na2S5H2O 0.005g,尿素 1.0g、加蒸馏水至1L、用NaOH、HCl酸性缓冲液：冰乙酸（50mmol/l），磷

4、酸二氢钾（1.5mmol/l） 中性缓冲液：HEPES（20mmol/l），磷酸二氢钾（1.5mmol/l）钙标准液（1）钙标准贮备液（1000mgmL-1） （2）钙标准使用液（50mgmL-1） （3）钙标准溶液系列: 1.0、2.0、5.0、10.0 、20.0 、50.0 mg/mL。钙标准液的浓度范围需再确定实验室自行配制的该标准液不够精确0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/ml;现配现用试剂避光保存调节ph调PH到6.8调PH到5调PH到7麝香草酚实验仪器用途来源硬组织切割机3x3x2 mm釉质块口腔实验室超声洁净器清洁牙釉质-20冰箱保存离体牙及试剂碳化硅砂纸（

5、800、1200、2400）抛光37恒温仪脱矿病变原子吸光度分光光度仪钙浓度教C220金老师， 显微硬度仪前后釉质硬度口腔实验室张凯（罗巧洁学姐）扫描电镜SEM釉质表面结构生命科学楼陈老师，88206593实验准备仪器电子显微镜测试钙离子浓度测试硬度测试预实验流程牙体处理切割、抛光硬度测试PH循环预实验牙体处理预实验牙体处理 牙 体 形 态 可 操 作 度 对 比 性牛牙vs人牙切牙vs前磨牙显微硬度计HV-1000预实验硬度测试预实验PH循环试剂/仪器酸性缓冲液中性缓冲液茶多酚溶液 1、2、4 8、16mg/ml五倍子多酚溶液 1、2、4、 8、16mg/ml厚朴酚溶液 3.9、7.8、 1

6、5.7、31.3、 62.5ug/ml EP管 镊子 滴管 计时器人工唾液浸泡过夜实验溶液处理酸性缓冲液处理中性缓冲液处理12次注意：1.中性缓冲液配置需要的hepas需要提前跟学长预约使用2.实验耗时长，需要提前借好门卡3.操作量大4.提早做好标记，滴管勿混淆，6.换溶液时，釉质块掉落。原子吸收光谱仪MKIIM6原子吸收光谱仪可测定多种元素，火焰原子吸收光谱法可测到10-9g/mL数量级。预实验原子分光光度法测定钙离子浓度1.试剂: 无水碳酸钙、1mol/L盐酸溶液、蒸馏水、镧溶液2.配制溶液：（1）钙标准贮备液（1000g/mL） （2）钙标准使用液（50g/mL）3.实验条件：在电脑程序

7、中根据实验室的具体情况设置相关参数，并打开相应气阀。4.实验步骤：（1）钙标准溶液系列：利用钙标准使用液配置1 g/mL 、2.0g/mL、5.0g/mL、10.0 g/mL、20.0 g/mL、50.0 g/mL的钙标准溶液。5.样品准备：取一定量的样品溶液并按照比例加入镧溶液。6.分光光度仪测试：测定空白溶液，再依此测钙标准溶液系列和样品溶液。7.制备标准曲线和结果计算：利用电脑软件自动生成存在问题：1.实验中使用的钙标准溶液为自行配置，精确度不稳定；2.pH循环时酸性缓冲液的量较少，测定钙离子浓度时只够测定一次，没有备份。3.预实验中发现，在钙标准溶液和样品溶液中是否加入镧溶液，实验结果

8、差距不大，可以根据实验室具体情况进行操作。4.根据预实验结果可适当调准钙标准溶液的浓度梯度，以提高准确性。分组处理釉质硬度（前）kg/mm2釉质硬度（后）kg/mm2钙浓度mg/l钙释出率CDR（10-3）阴性对照DDW367.67301.431.065311.10阳性对照NaF-0.31123.2416mg/ml五倍子16mg/ml五倍子334.07322.750.15841.65Ph循环后，釉质硬度均降低，实验溶液降低比较小Ph循环后，钙离子释出率阴性对照阳性对照实验溶液。预实验实验结果1.实验材料1.1 样本：厚朴酚、茶多酚、没食子酸（五倍子多酚）处理的牛切牙1.2 仪器：硬组织切割机、

9、抛光机、800、1200、2400#碳化硅砂纸、原子吸收分光光度计、显微硬度仪、电子显微镜1.3 药品：1 g / L NaF、1%盐酸溶液、酸性缓冲液：50mmol/l冰乙酸，1.5mmol/l磷酸二氢钾，pH5.0中性缓冲液：20mmol/lHEPES，1.5mmol/l磷酸二氢钾，pH7.0、去离子水(DDW)、 抗酸指甲油、0 . 05 mmo l/ L麝香草酚液正式实验方案2、实验步骤2.1、脱矿实验2.1.1 标本制备： 取新鲜拔除的牛切牙，去除根部软组织，冠部超声洗净，-20冰箱保存，备用。取备用牙块，用高速硬组织切割机将牙冠切成3mmX3mm大小的釉质块，唇面釉质用抛光机及 #

10、碳化硅砂纸在流水下纸依次磨平、抛光，去除表层约150微米，以消除表面有机污染物和表面的不规则。2.2.2 获得性薄膜形成： 将准备好的釉质块浸泡在离心处理的人全唾液中，每块2ml，室温下震荡过夜。2.2.3 pH循环：将标本固定在pH循环模型上，进行如下循环: 实验溶液处理5min(2ml/样本)去离子水冲洗2次，1min/次酸性缓冲液处理1h 去离子水冲洗2次，1min/次 中性缓冲液处理5min 去离子水冲洗2次，1min/次，如此循环重复12次，保留酸性缓冲液。3、检测指标3.1 CDR: 原子吸收光谱测定酸性缓冲液中的钙浓度，计算机辅助图像分析系统测定釉质块脱矿面积，用钙释出率(CDR)表示。3.2