提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究

1、进步白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究【关键词】盐霉素；白色链霉菌；发酵工艺Studyntheiprveentfferentatinpressfryieldfsalinyin盐霉素(salinyin)是从白色链霉菌(Streptyesalbus)的深层培养液中别离得到的一种聚醚类抗生素，由6分子乙酸，6分子丙酸和3分子丁酸提供的相应酰基缩合而成12。日本于1979年批准盐霉素用作球虫病防治剂，1987年欧共体批准盐霉素用作抗球虫剂和促生长剂，1993年我国农业部正式批准其作同样的用处。盐霉素作为禽用抗球虫剂在世界范围内得到普及，应用前景将非常广泛。抗生素发酵程度的进步，主要取决于菌种改进和培养工艺

2、优化3。为进步白色链霉菌中盐霉素产量，在过去工作的根底上47，我们从菌种选育和补料工艺两方面进展研究，以期进步盐霉素的消费程度。1材料与方法1.2培养基斜面培养基高氏一号培养基。摇瓶培养基(g/L)牛肉膏5，酵母粉3，氯化钾2，丙三醇20，消泡剂1。种子培养基(g/L)葡萄糖15，黄豆粉20，小麦胚芽10，碳酸钙3，牛肉膏5，酵母粉3，氯化钾2，丙三醇20，KH2P41，消泡剂1。pH6.57.0。发酵培养基1(不补料工艺)(g/L)硫酸铵5，黄豆粉30，豆油85，,KH2P41，gS41.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.57.0。发酵培养基2(补豆油工艺)(g/L)硫酸铵5，黄豆粉3

3、0，豆油50，KH2P41，gS41.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.57.0。效价测定培养基(%)蛋白胨0.3，酵母粉0.3，葡萄糖0.1，琼脂粉1.4。pH6.87.0。1.3实验规模摇瓶种子250l三角瓶内装25l培养基，接入成熟斜面孢子，33于摇床培养70h左右，转速220r/in。种子培养20L种子罐装12L培养基，接入摇瓶种子，接种量120l，罐温35，罐压0.05pa，搅拌转速500r/in，通气比为10.5vv，培养30h左右。发酵培养50L发酵罐装培养基30L，从种子罐取种3L接入，罐温33，罐压0.05pa，搅拌转速400r/in，通气比为10.5vv，中途采用补加

4、豆油工艺与不补料工艺两种方式，12d放罐，测定放罐液效价。1.4测定方法复原糖测定斐林试剂法。氨基氮测定甲醛法。盐霉素效价测定以杯碟法测定，检定菌为短小芽孢杆菌。豆油和脂肪酸的测定按文献8进展。脂肪酶活力的测定37下，将1l发酵液每分钟分解底物产生11脂肪酸定义为一个酶活单位。菌丝浓度的测定10l发酵液于离心管内3000r/in离心10in，测量上清液体积，计算得出：菌丝浓度(%)=(10-上清液体积)10100%2结果与分析表1不同剂量氯化锂对出发菌株的敏感度略表2三种典型菌落的菌株诱变后的变异率情况略2.3补豆油工艺盐霉素的合成途径为聚多酮途径，起始单位是三碳单位丙二酰A。以植物油或动物油

5、作为培养基碳源能提供更多的三碳和二碳单位，有利于盐霉素的合成。葡萄糖作碳源时，尽管也可以转化为短链脂肪酸参与盐霉素的生物合成，但大局部进入TA循环而被作为能源。豆油是盐霉素发酵的优良碳源，一方面豆油能为初级代谢提供碳骨架和能量，另一方面能为盐霉素的合成提供前提物质，促进盐霉素的合成。由于豆油对发酵液溶氧影响非常大，而且过量的豆油会吸附在菌丝体上，严重影响菌体生长和代谢，采用减少培养基中初始豆油含量和发酵过程中补加豆油的工艺，有助于进步盐霉素的发酵程度。为进步盐霉素发酵程度，在原根底培养基中减少41%的豆油加量，采用中间补豆油控制。以豆油质量分数、脂肪酸质量分数以及脂肪酶活力为综合指标进展发酵补

6、豆油工艺。补豆油分阶段进展。在50L罐上发酵前144h，每24h的补油量(g)计算公式为：G=(5.0%-A%-B%)27100+10其中A、B分别为豆油和脂肪酸质量分数(%)，为豆油消耗速率(g/h)；发酵的第144168h期间，每8h补豆油80g；发酵第168h至发酵终止，用豆油消泡；发酵终止前8h停顿补豆油。发酵过程中每24h取样测定豆油、脂肪酸质量分数、抗生素效价，计算豆油消耗速率、补油量。结果说明，在初始发酵培养基中减少豆油质量分数，发酵过程分阶段进展补油，可以使豆油质量分数和豆油消耗稳定在一定程度，脂肪酸质量分数能保持在比拟高的程度，发酵程度有大幅度上升。2.5补豆油工艺与没有补料

7、工艺的比拟采用以豆油、脂肪酸质量分数和豆油消耗速率为指标的补油工艺，在50L发酵罐上连续进展8批试验，其发酵程度与没有补料的发酵相比效价进步22.3%，且该补油发酵工艺有很好的结果重现性，结果见表5。(3)盐霉素发酵过程中微生物产生的脂肪酶将豆油分解成甘油和脂肪酸，通过测定发酵液中的脂肪酸和豆油浓度，可以计算出脂肪酶活力，用于优化盐霉素发酵的补油工艺。(4)在根底培养基中减少豆油加量，采用发酵中途分阶段补豆油方式可进步盐霉素发酵程度22.3%。该补料工艺的发酵结果重现性很好，为今后工业化消费提供了一定的经历。但是豆油补加时机和补加量是否合理，对盐霉素发酵程度有重要影响，需要进一步深化的研究。【

8、参考文献】1iyazakiY,Shibuya,SugaaraH,eta1.Salinyin,aneplyetherantibitiJ.JAntibit(Tky),1974,27(11):8142est1eyJ,B1untJF,EvansRHJr,eta1.Bisynthesisf1asa1id.II.Xrayana1ysisfanaturallyurringiserf1asa1idAJ.JAntibit(Tky),1974,27(8):5973储炬，李友荣编著.现代工业发酵调控学.北京：化学工业出版社，20024陈代杰，周光分阝，许文思.盐霉素生物合成的研究.浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响J.中国抗生素杂志，1988，13(3)：2085陈代杰，周光分阝，许文思.盐霉素生物合成的研究.短链脂肪酸在盐霉素生物合成中作用机制的初步讨论J.中国抗生素杂志，1988，13(3)：2146罗敬完.国产盐霉素消费菌株白色链霉菌61477的诱变育种试验J.中国兽医科技，1991，21(12)：377曹廷弼，