血小板抗原抗体检测

1、 血小板抗原抗体广州医科大学从属第五医院输血科第1页 目录血小板相关疾病血小板抗原血小板抗体抗体检测及交叉配血第2页血小板抗原血小板抗原泛指存在于血小板膜能够刺激机体产生抗体,并能与之结合血小板膜蛋白质和糖分子.血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）第3页血小板抗原血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原起源：血小板表面A、B抗原起源主要有两个：大部分是血小板本身所固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O型血小板和A或B型血

2、清温育，血小板就会带上A或B抗原。不一样个体间血小板膜ABH抗原量存在差异;同一个体每一个血小板抗原量差异非常大，由此能够解释有些人输入ABH不相容血液后,一部分输入血小板快速被破坏,而另外血小板其生命力不受影响. 第4页血小板抗原白细胞抗原：HLA抗原血小板存含有HLA-类抗原类抗原，主要是HLA-A和HLA-B位点抗原（少许表示HLA-C抗原）。HLA-类分子为血小板固有蛋白，少许从血浆中吸附。血小板HLA抗原免疫原性比白细胞弱。第5页血小板抗原血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）主要位于人血小板膜一大类抗原,称之为血小板特异性抗原高频率抗原以“a”表示

3、，低频率抗原以“b”表示人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发觉以来，迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,-17因为对偶抗原未检出而未到达系统命名标准。 第6页血小板抗原第7页血小板抗原第8页血小板抗原24个抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，GPb，GPa以及CD109上 ；GPa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4，HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw，HPA-14bw，HPA-16bw

4、GPb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD重链，经过二硫键与22 kD轻链共价结合。GPb上携带 HPA-3和HPA-9bw；第9页血小板抗体抗 体分 类疾 病HLA / HPA 抗 体其 它 抗 体同 种抗 体格兰茨曼血小板功效不全病抗GPb/a抗体同 种 异体 抗 体新生儿同种异体免疫性血小板降低症HPA1b(78%), HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36血小板输注无效症HLA-I抗体5080% 1725%(日本人为HPA-2b), HPA-15, anti-CD36极少数为ABO抗体血小板输血后紫癜HPA-1a,HPA

5、-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36少数为抗GPIa/IIa抗体被动同种异体免疫性血小板降低症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体免疫性血小板降低症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自 身抗 体自发性血小板降低症多数位于GPb/aGPIb/IX/V，少数位于GPIV/V 和 GPIa/IIa继发于母体自发性血小板降低症同上药品依赖性抗体奎宁/奎尼丁抗体所致疾病抗原位于GPb/a和GPIb/IX肝素抗体所致疾病抗原表位是PF4第10页抗体检测及交叉配血采取预防和治疗办法防止流产、出血等血小板相容性检测抗原定型抗体检测建立血小板供者库筛选基

6、因型相容供者防止血小板抗体产生诊疗血小板免疫性疾病交叉配型筛查血小板相容性供者降低血小板输注无效防止紫癜、出血和死亡第11页血小板抗原定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点：特异性抗体起源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏，当前国际上仅有HPA-1a单抗， 无其它HPA单抗。基因定型限制性片段长度多态性分析（RFLP）序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a b a b a b a b a b a b阳性对照条带等位基因条带 1

7、bb 2ab 3bb 4aa 5aa 15aa第12页血小板抗体检测 血清学ELISA法(酶联免疫试验)血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA)固相血小板免疫血清学试验(SPISA)简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA)流式细胞仪改良抗原俘获(ELISA)免疫荧光试验第13页简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA血小板谱细胞（三人份O型混合血小板）反应板（已包被血小板单抗）血小板单层阳性反应阴性反应患者血清/血浆抗人IgG指示红细胞（人IgG致敏红细胞）50g,5min离心洗涤3次50l/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50l/孔各50l/孔200g,5min离心200g,5min

8、离心第14页简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA直接测定法 血小板表面结合血小板抗体测定间接测定法 血清内抗血小板抗体测定交叉配血试验 选择配合血小板供体质量控制阴阳性对照第15页ELISA法(酶联免疫试验)单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体血小板共同孵育，再将孵育后复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最终加入酶联羊抗人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。第16页血小板相关疾病 临床上因为血小板血型抗原引发血小板降低症主要有5种：血小板输注无效（PTR）输血后紫癜（PTP）新生儿同种免疫血小板

9、降低症（FMAIT/NAIT）被动免疫血小板降低症（PAT）移植相关同种免疫血小板降低症（TAT) 第17页血小板相关疾病血小板免疫性疾病血小板输注无效症新生儿血小板降低症输血后紫癜本身免疫性血小板降低症药品引发血小板降低症移植相关血小板降低症血小板抗原 同种异体抗原 HLA-I,HPA,ABH 同种抗原 GPb/a,CD36 本身抗原 GPb/a,GPb/ 药品依赖性抗原 肝素、奎宁等 非特异性抗原临床病症 淤点 淤斑 流产（颅内）出血 死亡第18页血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接收充分治疗剂量

10、（2.5x1011个/次）血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提升，临床出血表现未见显著改进，处于血小板治疗不应状态。普通临床上认为最少有2次及以上输注血小板效果不佳才能做出PTR诊疗。1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时 CCI 6000/L 二十四小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无效输注2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%）若输注血小板二十四小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注由HLA抗体引发PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。现因为临床广泛输注去白细胞成份血治疗血液病，发病率已经大为下降第19页血小板相关疾病-血小板输注无效(PT

11、R）非免疫学原因(67.3%)发烧脾功效亢进感染药品作用DIC血小板质量问题免疫学原因(17.5%)HLA抗体HPA抗体ABO血型不合血小板本身抗体药品预防1.白细胞过滤2.辐照3. HLA和HPA配型输注第20页血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接收充分治疗剂量（2.5x1011个/次）血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提升，临床出血表现未见显著改进，处于血小板治疗不应状态。普通临床上认为最少有2次及以上输注血小板效果不佳才能做出PTR诊疗。1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时

12、 CCI 6000/L 二十四小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无效输注2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%）若输注血小板二十四小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注由HLA抗体引发PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。现因为临床广泛输注去白细胞成份血治疗血液病，发病率已经大为下降第21页血小板相关疾病- 输血后紫癜输血后血小板降低性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又称“输血后紫癜”, Post-transfusion purpura, PTP: 因为血小板输注后发生同种免疫反应所致，普通发病

13、率低。患者被输入不相容血小板/全血或屡次妊娠而产生血小板抗体，破坏输入和本身血小板而造成急性和暂时性血小板降低。患者多见于（95%)有屡次妊娠或输血史老年女性。第22页血小板相关疾病-输血后紫癜HPA-1a是引发该病主要抗原。我国绝大部分人为HPA-1a抗原阳性。试验室检验：血小板计数降低、骨髓巨核细胞增生活跃、血清学检验血小板抗体存在但效价和病情无关。本病输血小板无效，甚至有加重病情危险，肾上腺皮质激素不能缩短病程，不过，有可能改进出血症状。主要治疗办法为血浆置换或换血，换血浆优于换全血。在输血后血小板显著降低和发生严重出血症状时，应立刻做血浆置换，一次交换65%85%血浆量，平均在15天后

14、出血症状减退，血小板数目上升。尽可能防止或降低输注血小板及含血小板血液制品。 第23页血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板降低症(FMAIT/NAIT) 胎儿血小板 怀孕或生产时进入母体循环 胎儿血小板刺激母体产生抗体 母亲IgG抗体经过胎盘进入胎儿体内使胎儿血小板致敏 血小板破坏增加 发生FAIT第24页血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板降低症(FMAIT/NAIT)第一胎即可发病；病死率约13%；治疗：输入相合血小板以提升患儿血小板数，如找不到相合血小板，能够输注经洗涤和辐射母亲血小板，也可给患儿做放血治疗；治疗前交叉配血：以母亲血清与供者血小板进行交叉配合试验；预防：母亲在孕期可进

15、行血浆置换第25页被动免疫血小板降低症及移植相关同种免疫血小板降低症 Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT: 患者输入含有血小板特异性抗体血浆，在数个小时之内出现血小板降低症，约一周后缓解。一旦发觉献血员血浆、血清中含有血小板特异性抗体应马上停顿献血，这类献血员多为有妊娠史。Transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAT: 器官接收者淋巴细胞产生抗外来移植物（血小板）特异性抗体；或供体器官中残留淋巴细胞产生抗宿主血小板抗体第26页特发性血小板降低性紫癜（Idiopathic th

16、rombocytopenia purpura, I T P）ITP发病机制一、抗血小板抗体 约75%ITP患者可测到血小板相关本身抗体（PAIg），后者多为IgG、IgA也可是IgM。抗体经过Fab片段与血小板膜糖蛋白（Gpb/a等）结合。带有抗体血小板接触到单核-巨噬细胞表面FC受体，易被吞噬破坏。另外，抗血小板抗体对巨核细胞分化也有抑制作用。二、 血小板生成时间缩短 ITP血小板生存可缩短至23天或更短，ITP患者血小板易在脾脏被扣留。脾脏可产生抗血小板抗体，脾内巨噬细胞参加破坏血小板过程，切脾对相当部分患者有效。第27页特发性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocyto

17、penia purpura, I T P）ITP急性型：儿童多见，初起有上感，主要为病毒细菌所致。可有寒热，全身皮肤粘膜出血(瘢点，紫癜或血肿)、内脏出血。1%患者颅内出血，危及生命，但大多数呈自限性，普通46周可自行缓解。慢性型：主要见于40岁以下女青年，症状多在偶然中发觉，也有皮肤粘膜出血，内脏出血较少见，月经过多者可引发贫血。第28页特发性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP第29页特发性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP检测LIFECOD

18、ES PAKAUTO试剂盒第30页特发性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP一、糖皮质激素二、脾切除三、免疫抑制剂四、高剂量免疫球蛋白和血浆置换第31页血栓性血小板降低性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura，TTP)TTP是一个严重弥散性血栓性微血管病，以微血管病性溶血性贫血、血小板聚集消耗性降低，以及微血栓形成造成器官损害（如肾脏、中枢神经系统等）为特征。之前TTP预后差，病程短，不及时治疗病死率8090%，伴随血浆置换临床应用，预后大大改观，病死率降至1020%。临床五大特征，即血小板降低性紫癜、微血管病性溶血、中枢神经系统症状、发烧以及肾脏损害，并称之为TTP五联征，仅有前三大特征称为三联征。多数TTP患者起病急骤，病情凶险，如不治疗死亡率高达90%。 第32页TTP绝大多数患者是因为vWF蛋白裂解酶（vWFCP）异常所致。vWFCP 是正常止血过程中必须成在高剪切力