依诺沙星片血药浓度的测定及在健康志愿者体内的药动学研究

1、依诺沙星片血药浓度的测定及在安康志愿者体内的药动学研究【摘要】目的:建立人血浆中依诺沙星浓度的高效液相色谱HPL方法，研究口服单剂量依诺沙星片后安康志愿者体内的药物代谢动力学过程。方法:安康志愿者20名，单剂量口服依诺沙星片0.4g，分别于服药后24h内多点抽取静脉血。以HPL法测定血浆中依诺沙星的浓度。以DAS药代动力学程序计算药动学参数，分析体内的药动学过程。结果:依诺沙星片在(0.056.0)gL-1范围内线性关系良好(r=0.9999)，相对回收率均在85%115%范围内，绝对回收率大于75%；日内和日间变异均小于15%。依诺沙星浓度主要药代动力学参数为：Tax为(1.3500.580

2、)h；ax为(3.0290.671)gL-1；T1/2为(5.8350.908)h；AU(0-24)、AU(0-inf)分别为(17.6782.899)ghL-1和18.6853.172ghL-1。结论:本方法灵敏度高，选择性好，重现性佳，可准确测定人血浆中依诺沙星的浓度，合适药动学研究，为临床用药提供指导根据。【关键词】依诺沙星高效液相色谱法药代动力学依诺沙星Enxain，化学名为1-乙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧代-7-1-哌嗪基-1，8-萘啶-3-羧酸倍半水合物，为三氟喹诺酮类抗菌药，能通过抑制细菌的DNA盘旋酶、拓扑异构酶IV，抑制DNA的合成和复制而导致细菌死亡。其具有广谱抗菌作

3、用，对大多数革兰阳性菌和革兰阴性菌具有良好的抗菌活性，对沙眼衣原体、支原体、军团菌具良好的抗微生物作用，对结核杆菌和非典型分枝杆菌也有抗菌活性1。本实验旨在建立简单快捷的检测方法，研究依诺沙星片在中国安康志愿者体内的药代动力学，为临床用药提供参考根据。1材料和方法1.1药品、试剂和仪器依诺沙星片规格：0.1g/片、氟罗沙星由湖北百科亨迪药业提供。依诺沙星对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇和乙腈为色谱纯，由天津市科密欧化学试剂开发中心提供。三氟乙酸为Siga公司产品064K3647。70%高氯酸、冰乙酸为分析纯，由天津市化学试剂三厂消费。实验用水为本实验室自制重蒸水。1.2受试者选择根据药

4、物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原那么2，选取20名安康男性志愿者，年龄2124岁，体重5577kg。受试者无烟酒嗜好，无神经系统、精神异常及代谢异常等病史，血尿常规、肝肾功能及心电图等检查均正常。受试前2周至整个试验期间禁烟、酒和禁服其他任何药物。试验方案经医学伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。1.3给药方法和样品采集20名受试者禁食12h后，于次日清晨空腹口服单剂量依诺沙星片0.4g，200l温开水送服，服药2h前方可饮水，4h后进统一餐。服药前取空白血，服药后分别于0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h取静脉血3.0l，注入肝素化的试管，

5、离心3000rin-110in，取血浆，-65冰冻保存备测。1.4血浆样品处理及血药浓度测定1.5血浆标准曲线的制备和定量下限1.6方法学考察1.7统计学处理方法用DASDrugAndStatistis，versin2.0程序处理，非房室模型计算药动学参数。ax和Tax均为实测值；AU为DAS计算所得。2结果2.1方法学依诺沙星的色谱行为见图1。显示其保存时间为2.9in，内标氟罗沙星的保存时间为3.5in。两峰别离完全。准确度、回收率、稳定性实验结果如表14。依诺沙星血浆样品的日内日间精细度标准偏向均在10%以内，相对回收率标准偏向在5%以内，绝对回收率在75%以上。在室温放置12h以内测定

6、，结果没有明显变化；-65冰箱冰冻条件下冷藏1个月内测定，结果同样无明显变化。以上说明血浆样品具有较好的精细度和准确性，在室温放置和冰冻保存条件下表现出良好的稳定性。3讨论伊诺沙星血药浓度的HPL检测法，文献3-5报道多以柠檬酸-甲醇-乙腈作流动相为主。本研究曾参照该条件进展分析，但未获得良好的别离效果。由于伊诺沙星分子构造中的胺基和羧基能在水溶液中解离，故考虑单独以乙腈-水或甲醇-水为流动相，会出现色谱峰拖尾、对称性差、别离度低和保存值不稳定等问题，而采用离子抑制或离子对色谱能克制这些缺点6。三氟乙酸是离子对试剂常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性外表以多种形式互相作用

7、，来改善峰形、克制峰展宽和拖尾问题。此外，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200n，检测干扰校其添加在流动相中的浓度一般为0.1%，在该浓度下，大部分反相色谱柱都可以产生良好的峰形，故本研究以乙腈-0.1%三氟乙酸-水20：20：60，V/V/V为流动相，并获得了良好的别离效果。如图1所示，可见出峰对称，无杂质干扰，专属性高。且分析时间仅为4in，合适临床血药浓度的分析监测，有利于个体化用药的开展。依诺沙星在整个紫外区均有吸收，210n、270n和342n处有吸收峰，由于270n为最大吸收，故文献3-7报道多以270n左右作为检测波长，但本研究考虑到342n处血浆内源性物质少，为防止干扰，采用342n作检测波长，得到干净利落的检测峰形。对血浆样品的处理我们采用35%高氯酸蛋白沉淀法，较萃取法4，5操作简便，本钱低廉，且专属性高，别离完全，有较高的回收率和精细度，适用于依诺沙星人体药代动力学和血药浓度分析。本研究所得血药浓度数据及主要药物动力学参数与文献报道4，5根本一致。其达峰时间较短，Tax为1.3500.580h，T1/2为5.8350.908h，AU(0-24)、AU(0-inf)分别为17.6782.899ghL-1和18.6853.172