主动载药法制备苦参碱脂质体的研究

1、主动载药法制备苦参碱脂质体的研究【摘要】目的考察脂质体不同制备方法对包封率的影响。方法采用被动载药和主动载药制备脂质体，用微柱离心-紫外分光光度法测定脂质体包封率。结果被动载药法制备脂质体包封率较低，主动载药制备脂质体包封率为84.38%。结论采用硫酸铵梯度法可制得包封率较高的苦参碱脂质体。【关键词】苦参碱；脂质体；主动载药；被动载药Abstrat：bjetiveTstudytheinfluenefdifferentpreparatinethdsntheentrapenteffiieny.ethdsTprepareatrinelipsesbypassiveladingethdandavtive

2、ladingethd,theentrapenteffiienieseredeterinedbyinilunentrifuge-UVethd.ResultsTheentrapenteffiienyithpassiveladingethdasl,hileupt84.38%ithativeladingethd.nlusinTheatrinelipsesithhighentrappingeffiienyanbepreparedbyaniusulphategradienethd.Keyrds：atrine;Lipses;Ativelading;Passivelading苦参碱是豆科属植物苦参、苦豆子、广

3、豆根等中草药的活性成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎等多种药理作用，尤其抗肝癌活性广泛应用于临床1。但如今临床应用的苦参碱制剂存在体内吸收分布广泛、半衰期短、治疗部位药物浓度低、有一定副作用的缺点。将苦参碱制为脂质体，可进步药物的肝靶向性，延长作用时间。脂质体制备很多，可分为被动载药和主动载药两大类。本文优选微柱离心法测定脂质体包封率，比拟了不同制备方法对其包封率的影响。1仪器和试药2方法与结果2.1被动载药和主动载药制备脂质体以下制备方法中，磷脂与胆固醇配比为31，药物最终浓度为2g/l，磷酸盐缓冲液pH6.8。2.1.1被动载药乙醚注入法：将磷脂和胆固醇溶于适量乙醚中，电磁搅拌下，

4、用注射针头注入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液中，继续搅拌至挥尽有机溶剂，即得。薄膜分散法：将磷脂和胆固醇溶于适量氯仿中，30减压旋转蒸发，除去氯仿成膜，参加溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，恒温摇床振摇20in，搅拌，即得。逆相蒸发法：将磷脂和胆固醇溶于氯仿中，参加溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，油水两相旋摇后置于超声仪中超声10in，直至形成稳定的/型乳剂，所得乳剂在旋转蒸发仪48上减压除去氯仿，再加适量磷酸盐缓冲液继续减压除去剩余氯仿，并洗下壁上的凝胶。水浴，使磷脂充分水合，再进展短时超声，即得。冻融法：结合其它方法，将制得脂质体放冰箱中冷冻，再在室温中融化，如此反复几次。2.1.2主动载药硫酸铵梯度法2，3

5、：将磷脂和胆固醇溶于氯仿中，减压蒸发，制备磷脂膜，参加200l/L的硫酸铵溶液预热至50，旋转蒸发，至50水浴中水化1h，超声10in，得空白脂质体。将空白脂质体依次通过0.8，0.65，0.45和0.22的微孔滤膜，进展整粒。整粒后脂质体装入透析袋中，置于100倍体积的0.9%Nal溶液中透析24h，每隔一定时间更换透析液，共3次。取此空白脂质体，参加溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，40水浴孵化5in。2.2包封率测定方法建立2.2.1脂质体中药物含量的测定取苦参碱标准品适量，用磷酸盐缓冲液溶解，稀释至一定浓度1g/l，与溴代麝香草酚兰络和显色，于413n处测定氯仿层吸光度A为0.327。另取磷酸

6、盐缓冲液5份，用Hl调pH分别为7.0，6.0，5.0，3.0，1.0。用上述5种溶液分别配制1g/l的苦参碱溶液，将每种溶液分成两份，其中一份参加适量氯仿，摇匀，3000r/in离心10in，取上清液调pH值至7.0并定容，与溴代麝香草酚兰络和显色4，于413n处测定氯仿层吸光度A1；另一份中参加空白脂质体适量，同法测吸光度值A2，结果见表1和图1。可见，溶液pH值对氯仿萃取回收率影响显著，当pH到达1.0时，回收率接近100%，因此，实验采用先调低pH值，再进展氯仿萃取的方法，可有效别离主药与脂质体膜材，为紫外分光光度法测定苦参碱脂质体中苦参碱含量奠定了基矗表1不同pH值苦参碱回收率比拟略

7、2.2.2透析法测包封率5透析时间确实定：精细汲取苦参碱磷酸盐缓冲液2l入透析袋中，扎紧上口，至磷酸盐缓冲液20l中，置于恒温水浴中振荡，每隔1h取样5l并补充等体积磷酸盐缓冲液，样液以磷酸盐缓冲液为空白，测定吸收度，由结果知9h可到达透析平衡，透析袋内外苦参碱浓度相等。精细汲取空白脂质体2l入透析袋中，置磷酸盐缓冲液中透析，每1h更换透析液，测吸光度，结果空白脂质体在12h后开场在透析外液中被检出。故确定透析时间为9h。苦参碱脂质体包封率测定：精细汲取苦参碱脂质体2l入透析袋中，扎紧上口，至磷酸盐缓冲液20l中透析，每隔1h取样5l并补充等体积磷酸盐缓冲液，共搜集9h透析液，定容，作为供试样

8、品透析液。精细汲取空白脂质体同法操作，以空白脂质体的透析液为参比，测样品透析液的吸光度A外，根据标准曲线计算透过药量外。转贴于论文联盟.ll.另精细汲取苦参碱脂质体2l，照苦参碱脂质体含量测定方法，测定脂质体中苦参碱总药量总。包封率总外总2.2.3微柱离心法测包封率6凝胶柱的处理：称取适量SephadexG-50，加水，在近沸水浴中将湿凝胶逐渐升温溶胀，大约需要5h，放冷备用。空白脂质体与游离药物的柱别离：微型柱的制备：5l塑料注射器，底部有一塑料板和玻璃棉，先用蒸馏水洗注射器，再用磷酸盐缓冲液洗。取充分溶胀的SephadexG-50适量，装入其中(约5)。将注射器针筒放入一干净的离心管中离心

9、5in(2000r/in)，去水备用。精细汲取空白脂质体、游离药物各0.5l，分别上样，于离心机中离心3in(1500r/in)，用0.5l磷酸盐缓冲液洗脱，离心3in(1500r/in)，搜集洗脱液，再用0.5l磷酸盐缓冲液洗脱，重复上述操作假设干次，将每次搜集的洗脱液稀释至5l，测定吸光度A，以A对洗脱液的累积体积V作图，见图2。由别离曲线可知，经磷酸盐缓冲液洗脱两次后空白脂质体几乎全部被洗脱下来，因此只搜集前两次的洗脱液，合并，测定包封率。苦参碱脂质体包封率测定：精细汲取苦参碱脂质体0.5l参加微型柱上照2.2.3项下离心，参加0.5l磷酸盐缓冲液洗脱，离心；再参加0.5l磷酸盐缓冲液，

10、离心，搜集洗脱液，测定吸光度，计算游离药物量游。另精细汲取苦参碱脂质体0.5l，照苦参碱脂质体含量测定方法，测定脂质体中苦参碱的总药量总。包封率总游总上述包封率测定中所用脂质体均为硫酸铵梯度法制备，透析法测得包封率为58.69%，微柱离心法测得包封率为85.47%。故采用微柱离心法测包封率较好。用微柱离心法分别测定被动载药和主动载药法制备的脂质体包封率，结果见表2。表2不同制备方法包封率比拟略由结果可知，主动载药硫酸铵梯度法制得的脂质体包封率最高。3讨论3.1在酸性染料比色法测定苦参碱含量时，脂质体膜材在413n处也有吸收，对主药测定有干扰，必须进展预处理消除膜材的干扰，再测主药含量。曾用Tr

11、itnX100破乳，但破乳剂对测定有干扰；此外还用甲醇溶解脂质体后离心，无法消除膜材对测定的干扰。实验采用先调低pH再进展氯仿萃取的方法，有效的实现了主药与膜材的别离。从试验数据看出磷脂作为外表活性剂能增加苦参碱在氯仿中的分配，随着溶液pH值的降低，药物在水相中分配比例不断增大，当pH到达1.0时，回收率接近100%，可作为测定脂质体中药物含量前处理的方法。3.2脂质体包封率测定的方法有超滤法、透析法、柱层析法、微柱离心法等。超滤法对实验设备要求较高，故未采用；柱层析法那么由于大量洗脱液的稀释，药物含量很低，造成含量测定的困难，且大量稀释也引起脂质体中药物渗漏；从所得试验数据可知透析法包封率较

12、低，可能是稀释后引起脂质体的破裂，且透析所需时间长，故不适用；用微柱离心法进展包封率测定，耗时短，脂质体溶液稀释倍数小，且不需要昂贵的仪器设备。3.3被动载药几种制备方法制备的脂质体包封率较低，而采用主动载药法制得的脂质体包封率可到达80%以上。硫酸铵梯度法是利用硫酸铵溶液作为水相，首先制备内外均含有硫酸铵的脂质体，然后通过除去脂质体外水溶液中的硫酸铵,使得脂质体内的硫酸铵浓度与外水相的硫酸铵形成浓度梯度,内水相的NH4+分解成NH3和H+，导致脂质体内外的H+离子浓度差，即pH梯度，使得外水相中分子态的苦参碱进入内水相后遇酸性环境变成离子态，无法通过脂质双层回到外水相，从而使得脂质体不易泄漏,更加稳定。【参考文献】1蔡宝仁，汤苏阳.苦参类生物碱的研究进展和临床应用J.医学信息(西安)，2001，14(4)：236.2邓意辉,王绍宁.主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体J.中南药学杂志，2022,39(1)：40.3邓意辉,李焕秋,王绍宁，等.主动载药与被动载药制备左氧氟沙星脂质体J.中国抗生素杂志，2001