实验必背知识

1、海门实验学校2013届高三 查漏补缺 回归基础- PAGE 9 -实验必背知识一、检测生物组织中的还原糖、脂肪和蛋白质1、实验原理：还原糖与斐林试剂，水浴加热，会生成砖红色沉淀。脂肪可以被苏丹 = 3 * ROMAN 染液染成橘黄色，或被苏丹 = 4 * ROMAN IV染液染成红色。蛋白质与双缩脲试剂，产生紫色反应。2、实验注意点：斐林试剂（甲液：0.1g/mlNaOH，乙液：0.05g/ml CuSO4）混合使用 双缩脲试剂（A液：0.1g/mlNaOH ，B液：0.01g/ml CuSO4）分开使用 还原糖是鉴定需要水浴加热 脂肪的鉴定需要显微镜3、实验结果及其分析：还原糖的鉴定：结果：

2、有砖红色沉淀； 分析：组织样液中有还原糖脂肪的鉴定：结果：有橘黄色或红色；分析：花生组织中有脂肪蛋白质的鉴定：结果：溶液呈紫色； 分析：组织样液中有蛋白质二、观察植物细胞的质壁分离和复原1、实验原理：原生质层相当于一层半透膜，当原生质层两侧的液体具有浓度差时，细胞就会发生渗透作用失水或吸水，细胞壁的伸缩性比原生质层的伸缩性小。2、实验结果及其分析：结果：质壁分离（液泡变小，颜色变深）； 分析：细胞液浓度外界溶液浓度 质壁分离复原（液泡变大，颜色变浅）：分析：细胞液浓度外界溶液浓度 质壁分离不能复原； 分析：外界溶液浓度太高，细胞已经死亡三、探究影响酶活性的因素1、实验原理：温度或pH等能够影响

3、酶的催化活性，在一定范围内，随着温度或pH的升高酶活性升高；越过这一范围酶活性下降，甚至失活。2、方法步骤 = 1 * ROMAN I探究温度对酶活性的影响步骤项目试管1试管2试管31加入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL2放置在不同温度环境下5分钟0100603加入新配置的-淀粉酶溶液（已在相应温度下保温一段时间）1mL1mL1mL4完成反应5min5滴入碘液2滴2滴2滴观察结果变蓝变蓝不变蓝注： = 1 * GB3 实验室使用的-淀粉酶最适温度为5070； = 2 * GB3 由于H2O2不稳定，因此探究温度对酶活性影响，不选择H2O2作为反应物。由于斐林试剂要水浴加热，所以探究T对酶活性影

4、响时，用碘液作为鉴定试剂。为确保实验结果的准确性，酶和反应底物分别在相应温度下保温一段时间，再混合反应。 = 2 * ROMAN II探究pH对酶活性的影响步骤项目试管1试管2试管31加入过氧化氢溶液2mL2mL2mL2加入蒸馏水1mL-3加入盐酸-1mL-4加入NaOH溶液-1mL5滴加肝脏研磨液2滴2滴2滴637水浴5min5min5min7检验放入带火星的木条不能够复燃能够复燃不能够复燃试管内气泡产生量很少少很少3、实验结果及其分析 (1)说明温度过高和过低均不利于酶活性的发挥，在适宜温度下酶的活性才最高(2)产生气泡多的试管中酶活性越高。只有在适宜PH条件下酶的活性才最高注： = 1

5、* GB3 先加底物，再加酸或碱，最后加酶。四、叶绿体中色素的提取和分离1、实验原理：提取原理：色素能溶解在无水乙醇中，可用无水乙醇提取色素；分离原理：不同的色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的在滤纸上扩散得快，反之则慢，达到将色素分离的目的。2、实验结果分析：加入二氧化硅有助于研磨充分，加入碳酸钙是防止研磨中色素被破坏。应注意不能让滤液细线触及层析液，防止色素色素溶入层析液。（橙黄色） 最快（溶解度最大）（黄色）（蓝绿色） 最宽（最多）（黄绿色） 最慢（溶解度最小）3、实验注意点：无水乙醇的用途是提取（溶解）叶绿体中的色素，层析液的的用途是分离叶绿体中的色素；石英砂的作用是为了研磨充分，碳

6、酸钙的作用是防止研磨时叶绿体中的色素受到破坏；层析液不能没及滤液线；滤液细线要细且直，而且干燥后要重复划几次；五、探究酵母菌细胞呼吸的方式1、实验原理： = 1 * GB3 酵母菌属于兼性厌氧微生物，有氧时进行有氧呼吸将葡萄糖彻底分解成二氧化碳和水，并释放大量能量，无氧时进行无氧呼吸将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，释放较少的能量。 = 2 * GB3 CO2可使澄清的石灰水变浑浊，也可以使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况。 = 3 * GB3 橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下可与乙醇发生化学反应，变

7、成灰绿色。2、实验结果及其分析：结果： = 1 * GB3 甲、乙两装置中石灰水都变浑浊，且甲中浑浊程度高且速度快；分析：酵母菌在有氧呼吸条件下产生的CO2比无氧呼吸条件下产生的多且快； = 2 * GB3 2号试管中溶液由橙色变成灰绿色，1号试管不变色；分析：酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖产生酒精六、观察植物细胞的有丝分裂1、实验原理： = 1 * GB2 高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。 = 2 * GB2 有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于哪个时期。 = 3 * GB2 细胞核内的染色体易被碱性染料（如龙胆紫、醋

8、酸洋红）染成深色。2、方法步骤：取材：取根尖2-3 解离液：质量分数为为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精混合液（1：1）解离 目的：使组织中的细胞分离开 时间：3-5min 漂洗液：清水漂洗 目的：洗去解离液，便于染色 时间：10 min 染液：0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液或醋酸洋红液染色 目的：使染色体（质）着色 时间：3-5min 用镊子将根尖弄碎，盖上盖玻片，复加一块载玻片用拇指轻压制片 目的：使细胞分散开来观察 = 1 * ROMAN I低倍镜观察：找到分生区细胞，其特点是细胞呈正方形，排列紧密，有分裂细胞 = 2 * ROMAN II高倍镜观察：在低倍镜观察的基

9、础上换高倍镜，直到看清细胞的物象为止 = 3 * ROMAN III仔细观察：先找中期，再找前期、后期、末期，最后找间期，注意染色体特点 = 4 * ROMAN IV移动观察：慢慢移动装片，完整地观察各个时期3、实验结果及其分析：视野中看到的细胞90%95%处于间期，所观察到的细胞都是死细胞七、调查人群中的遗传病实验1、方法：抽样调查法2、调查注意： 调查时选取群体中发病率较高的单基因遗传病（红绿色盲、白化病、高度近视）调查的群体要足够大（可先分组实施，再将数据汇总处理）。 根据汇总数据，计算每种遗传病的发病率。 在人群中调查遗传病的发病率，在家族中调查遗传病的遗传方式。八、培养液中酵母种群数

10、量的动态变化1、实验原理：（1）用液体培养基培养酵母菌，种群的增长受培养液的成分、空间、pH、温度、有害代谢产物等因素的影响。 （2）在理想的无限环境中，酵母菌种群的增长呈“J”型曲线；在有限的环境下，酵母菌种群的增长呈“S”型曲线。（3）在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。2、实验结果及其分析：（1）根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量7天中的变化曲线。（2）培养液酵母菌种群数量随时间呈S型增长变化。3、实验讨论a.从试管中吸出培养液进行计数之前，建议你将试管轻轻震荡几次，这是

11、为什么？使酵母菌在试管里分布均匀。b.本探究实验需要设置对照吗？为什么？不需要。该实验在时间上形成前后对照。c.需要做重复实验吗？需要，提高数据的准确性。d.如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？增加稀释的倍数。e. 对于压在小方格界限上的酵母菌，应遵循“取上不取下，取左不取右”的原则计数。注：血球计数板在使用时，先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。九、探究植物生长调节剂对扦插枝条生根的作用1、实验原理：植物插条经植物生长调节剂处理后，对植物插条的生根情况有很大的影响，而且用不同浓度、不同时间处理其影响程度亦不同。其影响存在一个最适浓

12、度，在此浓度下植物插条的生根数量最多，生长最快。2、结果分析：（1）分析不同插条的生根情况。不能生出不定根：有可能是枝条上没有芽、枝条倒插等。都能生出不定根：促进扦插枝条生根是指刺激枝条的下端生出不定根，而不是刺激根生长。不同的枝条可能生出的不定根的数目多少不一样，如枝条上芽多，则产生的生长素就多，就容易促使不定根的萌发。（2）分析与本实验相关的其他因素。温度要一致。设置重复组。即每组不能少于3个枝条。设置对照组，清水空白对照；设置浓度不同的几个实验组之间进行相互对照。注意：处理插条：枝条的形态学上端为平面，下端要削成斜面，这样在扦插后可增加吸收水分的面积，促进成活。每一枝条留3-4个芽，所选

13、枝条的芽数尽量一样多。处理方法：1）浸泡法：把插条的基部浸泡在配制好的浓度较低溶液中，深约3cm，处理几小时至一天。 2）沾蘸法：把插条基部在浓度较高的药液中蘸一下（约5s），深约1.5cm即可。可先设计一组梯度比较大的预实验进行摸索，再在预实验的基础上设计细致的实验。本实验的单一变量是生长素类似物的浓度，因变量是不同浓度生长素类似物处理后枝条生根情况，如生根条数，最长与最短根的长度等每一枝条留3-4个芽，【有芽是产生生长素，但你使用的是枝条，首先要确保它是活的，可以继续生长】所选枝条的芽数尽量一样多【保证所带芽自身提供的生长素含量相同，也是无关变量的一种】用显微镜观察多种多样的细胞 注意：先

14、用低倍镜观察，找到对象，移至中央（偏哪向哪移），再换用高倍镜观察。 使用低倍镜时用粗准焦螺旋，使用高倍镜时用细准焦螺旋。 使用低倍镜时视野较亮，使用高倍镜时视野较暗，可调节反光镜和光圈。 十一、观察细胞的减数分裂 注意：选用雄性的精巢或花粉，不选用雌性的卵巢（因为细胞数量少，分裂不连续）选修一、果酒制作的原理1、所需菌种：酵母菌；其代谢类型：兼性厌氧型。2、菌种的生活特点（1）在有氧条件下，进行有氧呼吸，大量繁殖； 酶反应式：C6H12O6 + 6CO2 + 6H2O6CO2 + 12H2O + 能量。（2）在无氧条件下，进行无氧呼吸。 酶反应式：C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2

15、+ 少量能量（3）发酵条件温度：18-25；时间：10-12天。自然发酵的菌种来源：附着在葡萄皮上是野生酵母菌。在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都受到抑制。二、果醋制作的原理1、所需菌种：醋酸菌；其代谢类型：好氧型。2、菌种的生活特点（1）当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；（2）当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变成乙醛，再将乙醛变为醋酸。反应简式：C2H5OH + O2CH3COOH + H2O（3）发酵条件温度：30-35；时间：7-8天。3、果酒、果醋的制作流程挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 醋酸发酵 果酒 果醋4、酒精可用酸性重铬酸钾检验，

16、出现灰绿色。注意：1、教材P4旁栏思考题2、为了提高果酒的品质，更好地抑制其他微生物的生长，可以直接在果汁中加入人工培养的酵母菌。三、腐乳的制作1、所需菌种：多种微生物参与豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，起主要作用的是毛霉，其代谢类型是好氧型，其是一种真菌。2、菌种的作用特点（原理）：产生蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；产生 脂肪酶将脂肪水解成甘油和脂肪酸。3、腐乳制作的实验流程让豆腐长出毛霉 加盐腌制 加卤汁装瓶 密封腌制注意：1、教材P7旁栏思考题2、腐乳的制作过程中，加盐的作用是杀菌、调味、使豆腐析水成型。3、配制卤汤时，加酒的作用是杀菌和调味。酒的含量控制在12

17、%左右。4、卤汤中的香辛料有杀菌、调味的作用。5、可以通过味道、形状和色泽等方面来评价腐乳的质量。四、加酶洗衣粉及酶制剂的种类1、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。2、常用的酶制剂包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。五、酵母细胞的固定化（一）固定化细胞技术1、概念：固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。2、方法：包括包埋法、物理吸附法和化学结合法。3、酶更适合采用物理吸附法和化学结合法固定化，因为酶分子太小，容易从包埋材料中漏出。细胞多采用包埋法固定化。（二）制备固定化酵母细胞1、酵母细胞的活化 配置物质的量浓度为

18、0.05mol/L的CaCl2溶液配置海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液与活化的酵母细胞混合固定化酵母细胞2、可通过观察凝胶珠的颜色和形状来评价实验结果。如果凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠溶液浓度过低或酵母细胞太少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠浓度过高。3、比较类型优点不足直接使用酶催化效率高、低耗能、低污染对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能再次利用；提高了生产成本；混合在产物中的酶会影响产品质量固定化酶既能与反应物接触，又容易与产物分离；还可以反复利用一种酶只能催化一种化学反应固定化细胞成本低，操作更容易大分子反应物不易与酶接近，反应效率降低七、DNA的粗

19、提取与鉴定（一）提取DNA的方法1、思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。2、原理（1）利用DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl2中溶解度不同，盐浓度为 0.14mol/L时，DNA的溶解度最小；DNA不溶于酒精，而蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以将 DNA与蛋白质进一步分离。（2）利用DNA的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA无影响；大多数蛋白质不能忍受60-80的高温，而DNA在80以上才会变性；洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA无影响。（二）实验设计一利用鸡血细胞提取DNA并鉴定方法步骤加入物质目的1、制

20、备鸡血细胞柠檬酸钠防止血液凝固2、提取鸡血细胞的细胞核物质蒸馏水使细胞吸水涨破3、溶解细胞核内的DNA2mol/L的NaCl溶液溶解DNA4、析出含DNA的黏稠物蒸馏水降低DNA溶解度，使DNA析出5、滤取含DNA的黏稠物去除溶解在盐溶液中的杂质6、将DNA的黏稠物再溶解2mol/L的NaCl溶液再次溶解DNA7、过滤含DNA的NaCl溶液去除不溶解在盐溶液中的杂质8、提取含杂质较少的DNA加同体积95%的冷酒精提纯DNA9、DNA的鉴定A：（1）向试管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入DNA （3）加入二苯胺4mlB：（1）向试管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入二苯胺4ml沸水浴加热5分钟DNA在水浴加热的情况下，与二苯胺反应呈蓝色（三）实验设计二利用新鲜菜花提取DNA并鉴定ADNA的粗提取（1）准备材料：将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。（2）取材：称取30 g菜花，去梗取花，切碎。（3）研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液（加洗涤剂和NaCl2），充分研磨10 min。（4）过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液滤入烧杯中，在4冰箱中放置几分钟后，再取上清液。（5）加冷酒精：将