柿叶黄酮对离体心脏缺血再灌注损伤的干预作用

1、柿叶黄酮对离体心脏缺血再灌注损伤的干预作用 孙懿，谭宏棣，蓝晓步，黄建春，黄仁彬【关键词】柿叶黄酮；缺血再灌注；自由基Keyrds：Persinleafflavnes;Isheia-reperfusin;Freeradial心肌缺血再灌注损伤是指心肌缺血一定时间再重新恢复血液供应后,心肌不一定都会恢复其正常功能和构造,反而出现心肌细胞损伤加重的表现,如心律失常、出血性坏死、堵塞面积扩大、心功能低下等现象。目前认为，其发活力理主要与再灌注后细胞内a2+超载、氧自由基大量生成、微血管内皮细胞损伤等有关1。在我国，柿叶资源非常丰富，柿叶中的黄酮类成分为作用于心血管系统的主要有效成分2。近年来,有关黄

2、酮类物质抗心肌缺血再灌注损伤的报道很多3,而柿叶黄酮是否具有抗心肌缺血再灌注损伤作用尚未见报道。我实验室近几年对柿叶黄酮进展了大量而深化的研究，发现其对心血管系统具有多方面的生物活性。本文对其抗心肌缺血再灌注损伤的作用进展讨论。1材料1.1动物安康istar大鼠48只，体质量25030g，雄性，由广西医科大学实验动物中心提供。1.2药品柿叶黄酮，由本实验室自行提取；盐酸维拉帕米注射液，上海禾丰制药出品，批号：060901。1.3仪器及试剂722N可见分光光度计，由上海精细科学仪器有限提供；Langendrff离体心脏灌流实验系统，由上海奥尔科特生物科技提供；AL-B5恒流泵，由上海奥尔科特生物

3、科技提供。K试剂盒、LDH试剂盒、DA试剂盒、SD试剂盒、Na+-K+-ATP酶试剂盒、a2+-ATP酶试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供；AST试剂盒，由英国朗道公司提供；其余试剂均为分析纯。1.4主要试剂的配制K-H液配方(gL-1)4:Nal6.92，Kl0.35，al20.28，gS47H20.29，KH2P40.16,NaH32.1,Gluse2.0,pH7.4。2方法2.1大鼠离体心肌缺血再灌注损伤模型制备5将大鼠击枕致昏，翻开胸腔，迅速取出心脏置于预冷(4)的K-H缓冲液中，轻轻挤压心脏，排空心脏内残留的血液，然后迅速将心脏固定于Langendrff

4、离体心脏灌流装置中。心脏用饱含95%2和5%2的K-H缓冲液370.5,pH7.4恒压逆行灌流(压力高度为80水柱)。心脏均在平稳30in后停灌30in，然后再灌注30in造成缺血再灌注损伤模型。大鼠随机分成6组:正常对照组ntrl，持续灌流90in；缺血再灌注组(I/R)；PLF高剂量组PLFH，含黄酮810-3gL-1；PLF中剂量组PLF，含黄酮410-3gL-1；PLF低剂量组PLFL，含黄酮210-3gL-1；维拉帕米组Ver，浓度0.2510-3gL-1)。以上各组在停灌前10in时分别参加不同浓度的含药灌注液，并持续整个再灌注过程。除ntrl组外,其他各组离体心脏均停灌30in，

5、再灌注30in。2.2心肌生化指标的测定搜集再灌注后30in时冠脉流出液，按试剂盒说明书测定冠脉流出液中AST，K，LDH的活性。灌流末取各组大鼠左室全层心肌，4冰浴下制备成10%的匀浆，低温离心后取上清液，-80冻存。按照试剂盒说明测定脂质过氧化产物DA含量、SD活性、Na+-K+-ATP酶活性及a2+-ATP酶活性。2.3统计学处理数据以s表示，组间显著性差异用t检验进展。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1对心肌组织中DA含量及SD活力的影响3.2对心肌ATP酶活性的影响3.3对心肌缺血再灌注损伤时心肌酶活性的影响4讨论心肌缺血-再灌注损伤发活力制目前公认为毒性氧自由基学说和钙离子超负荷学

6、说。氧自由基过量生成和或细胞内抗氧化防御系统受损导致氧自由基及其相关代谢产物过量聚集，从而对机体造成损伤，即氧化性应激损伤6，7。大量的氧自由基使心肌细胞膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化8,并因此生成脂质过氧化物DA等而破坏细胞膜引起细胞损伤。SD能去除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损害。PLF可以显著进步缺血再灌注心肌细胞中SD的活力，增强内源性氧自由基去除系统的功能，阻止DA含量增加,从而减轻了缺血再灌注对细胞膜的损害。细胞内钙超载导致细胞破坏是细胞死亡的共同通路。Na+/a2+交换是导致钙超载的主要途径，缺血期间缺血心肌细胞内酸中毒,通过H+/Na+交换，使心肌细胞内Na+增加，持续缺血

7、抑制Na+-K+-ATP酶活性，使心肌细胞内Na+进一步增加，后者激活细胞膜上Na+/a2+交换蛋白，加之a2+通道活性化及特异性膜离子通透性增强，因此在心肌再灌注时，随着Na+移向细胞外，大量的a2+进入细胞内；同时a2+的排出受到抑制，使心肌细胞内钙超载，引起过度收缩，致使细胞膜和闰盘撕裂，酶、肌红蛋白等物质外漏，造成心肌缺血再灌注损伤8。且Sjaastad等9研究发现，心肌梗死后存活心肌细胞更容易出现钙超载,因此更容易受缺血再灌注损伤。PLFH、PLF组的Na+-K+-ATP酶和a2+-ATP酶均比I/R组有非常明显升高，有助于a2+转运至胞外和胞内a2+库，减轻细胞内钙超载，防止钙离子本身及其续发效应如参与自由基产生等所致的细胞损伤。这可能是PLF减少心肌缺血再灌注损伤的机制之一。缺血再灌注损伤使心肌细胞膜受损，心肌出现变性、坏死，心肌细胞内AST、K、LDH等外逸。PLFH、PLF组可