医学免疫学实验课件：抗核抗体

1、抗核抗体 （antinuclear antibodiy, ANA）抗核抗体是以真核细胞的核成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称，属自身抗体中的一组抗体。有三十余种ANA，形成了抗核抗体谱。抗核抗体ANAs分为六大类，即抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗DNA组蛋白复合物抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其他细胞成分抗体。抗核抗体谱抗DNA抗体：抗双链DNA抗体、抗单链DNA抗体抗组蛋白抗体：抗组蛋白亚单位H1、H2A、H2B、H3、H4及其复合物抗体抗DNA组蛋白复合物抗体：狼疮细胞、抗DNP抗体和抗核小体抗体抗非组蛋白抗体抗ENA抗体：抗Sm、SSA、SSB、Scl70等抗染色体DNA蛋白

2、抗体：抗着丝点抗体抗核仁抗体：抗RNA多聚酶I/II/III等抗其他细胞成分抗体：抗AMA、高尔基体、中心体、纺锤体ANA检测方法间接免疫荧光法、ELISA、金标法等ANA检测首选方法：（IIF） 目前临床常规检测ANA，一直延用IIF法，作为总的ANA的筛选试验。因被检血清中存在不同性质的特异性的ANA，同检测底物靶抗原结合，而呈现形态各异的荧光染色模型。通过荧光染色模型分析，可初步判断相应抗体性质范围，从而指示进一步检测特异性抗体。IIF检测ANA染色模型均质型核颗粒型核仁型核膜型着丝点型胞浆型混合型IIF检测ANA染色模型抗核点（Sp100）抗体阳性（HEP2/猴肝） 抗线粒体抗体阳性

3、（HEP2/猴肝） 抗核包膜抗体间接免疫荧光阳性染色模型一种抗体可以出现不同的荧光染色模型，不同的抗体也可以出现同样的荧光染色模型。荧光染色模型具有一定的提示作用，但仅根据荧光染色模型特点来推断抗体的特异性是片面的。除了抗着丝点及一些具有特殊荧光染色模型抗体外，对ANA特异性的判断应根据特异性抗体检测方法（如ELISA、免疫印迹法等）来确定。关于ANA荧光染色模型ANA检测临床意义ANA阳性的疾病很多，最常见于弥漫性结缔组织病，某些非结缔组织病也可阳性（如慢性活动性肝炎、重症肌无力、慢性淋巴性甲状腺炎等），正常老年人也可出现低滴度的ANA阳性。ANA检测在临床上是一个极重要的筛选试验，ANA阳

4、性（高滴度）标志了自身免疫性疾病的可能性，ANA检测对风湿性疾病的诊断和鉴别具有重要意义。ANA的阳性率SLE 活动期95100% 干燥综合征 6080% 非活动期80100% 多发性皮肌炎4060% 药物性狼疮 95100% RA 3050%混合性结缔组织病 95100% 非结缔组织病 1020%硬皮病 7090% 正常人 510%FITCFITC细胞抗原特异性人抗体FITC标记的抗人抗体间接免疫荧光法的实验原理图IIF的操作步骤1、加样：将加样板放在泡沫板上，将25ul稀释后的血清样本加至加样板的每一反应区上，应避免产生气泡。加完所有待测样本后再开始温育。 2、温育：将生物载片有生物薄片的

5、一面朝下，盖在加样板的凹槽里，反应立即开始。应确保每一样本均与生物薄片接触且样本间互不接触。室温（18-25）温育30分钟。 IIF的操作步骤3、冲洗：用盛于烧杯内的PBS吐温缓冲液冲洗载片1秒钟，然后立即将生物载片浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中，浸泡至少5分钟。有条件可使用旋转摇床进行振荡。 4、加样：将20ulFITC标记的抗人IgG加至洁净加样板的反应区上，待加完所有的荧光二抗后开始温育。 IIF的操作步骤5、温育：从洗杯中取出一张生物载片，在1秒钟内用吸水纸擦去背面和边缘的水分后，立即盖在加样板的凹槽里。注意：为避免破坏基质，不要擦拭反应区的间隙部分。应确保生物薄片与液滴接触良好，然后继续下一张。室温（18-25）温育30分钟，从此时开始。应避免阳光直射载片。 6、冲洗：用盛于烧杯内的PBS吐温缓冲液冲洗载片1秒钟，然后立即将生物载片浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中，浸泡至少5分钟。有条件可使用旋转摇床进行振荡。可在每150mlPBS吐温缓冲液中加10滴伊文斯兰作为复染。 IIF的操作步骤7、封片：将盖玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加封片介质至盖玻片：每一反应区约10ul。从洗杯中取出一张生物载片，在1秒钟内用吸水纸擦去背面和边缘的水分后，（注意不要擦拭反应区的间隙部分！）将生物载片有生物薄片的一面朝下放在已准备好的盖玻片上，立即检查盖玻片是否已嵌入到载片的凹槽里。如有