榄香烯联合生物大分子合成抑制剂对HcaF肝癌的作用

1、榄香烯团结生物大分子合成按捺剂对Hca-F肝癌的作用作者:郭连英，陈骏，沈洁，邢嵘1，施广霞，钱振超【摘要】目的本实行接纳榄香烯与生物大分子合成按捺剂团结处置惩罚小鼠肝癌细胞Ha-F，不雅察肿瘤细胞增殖、凋亡和形态学的变革，探究按捺/滋扰肿瘤细胞的DNA、RNA或卵白质合成对榄香烯抗瘤作用的影响，以期为断定榄香烯作用的大概靶点提供线索与根据。要领将Ha-F肝癌细胞用榄香烯50g/l、吡柔比星THP10l/l、单独和复合处置惩罚，设单独瘤细胞不处置惩罚为阴性比拟。Ha-F细胞浓度均为1106/l，每个不雅察时间点均设3支复管，用台盼蓝拒染法盘算细胞存活率，在透射电镜下不雅察榄香烯与THP团结处置

2、惩罚对肿瘤细胞超微布局的影响，用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。效果榄香烯团结吡柔比星处置惩罚Ha-F比单独利用两种药物的抑瘤率都高。结论本实行所用生物大分子合成按捺剂不克不及阻断榄香烯的抗瘤作用，提示榄香烯抗肿瘤作用对新的卵白质表达依靠性较低。团结榄香烯处置惩罚后瘤细胞形态学的变革，提示榄香烯大概作用于肿瘤细胞膜或细胞中的某些卵白质如酶等而直接杀伤肿瘤靶细胞，使对榄香烯抗瘤作用靶点的熟悉又进了一步。本实行效果表白榄香烯和THP适用可使抗癌作用加强，这对榄香烯团结其他药物治疗肿瘤大概有必然参考意义。【关键词】榄香烯；按捺剂；肝细胞癌Theeffetfeleenebinedithinhibit

3、rsfarleularsynthesisfrhepatianer【Abstrat】bjetiveInthisexperientfHa-Fells(aurinehepatiellarina)eretreateditheleenebinedithinhibitrsfarleularsynthesis，thEirprliferatin，survival，ellyle，apptsisandrphlgyerebserved.TlarifytheinfluenesfinhibitinfDNA，RNAandprteinntheantitureffetsfeleeneandtfindthepssibletar

4、getsitefeleene.ethdsTheHa-Fellseresingledringledtreateditheleene50g/l，alnerbinedithTHP10l/l，theHa-Fells(ithuttreatent)ereusedtbethenegativepare.TheendnsistenefHa-Fellsis1106/l，threetublesineverytiepint.Talulatetheprprtinfsurvivalithtrypanblue，andbservetheipatntheultrastruturefHa-Fellstreateditheleen

5、eandTHPintransissineletrnirspe，andexainetheapptsisandellylesinflyteter.ResultsTheinhibitinratefprliferatinfHa-FtreateditheleeneandTHPashigherthanthatfHa-Ftreateditheleenenly.nlusinTheseresultsshedthattheantitureffetsfeleeneuldntablishedbybinedtreatentrpretreatentiththeinhibitrsfDNA，RNA，prteinsynthes

6、is，hihsuggestthattheantitureffetsfeleeneaybeindependentntheirsynthesis.binedusagefeleeneithTHPtanertherapyisadvisable.【Keyrds】eleene；inhibitr；hepatellulararina榄香烯(eleene)是从中药温莪术经断定为我国特有新种定名为温郁金，uruaenyujin挥发油中提取的抗癌有用身分，它是一种仅含碳氢(15H24)，分子量只有204的小分子、脂溶性的倍半萜类化合物，此类物质有抗癌活性属我国首报1。动物实行与临床应用均表白榄香烯的抗癌作用确切，并

7、且不良反响很低。我们已往的研究表白榄香烯处置惩罚除可按捺肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡外，还能加强肿瘤细胞的免疫原性，榄香烯处置惩罚能加强肿瘤细胞膜HSP70的表达，用表达谱基因芯片技能的研究表白榄香烯处置惩罚引起基因表达谱的变革。已往对榄香烯抗癌作用机制的研究仅限于榄香烯对肿瘤细胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影响，关于它的作用靶点及其信号传导通路迄今研究很少。本实行在上述研究的底子上，接纳榄香烯与生物大分子合成按捺剂团结处置惩罚小鼠肝癌细胞Ha-F，不雅察肿瘤细胞增殖、凋亡和形态学的变革，探究按捺或滋扰肿瘤细胞的DNA、RNA或卵白质合成对榄香烯抗瘤作用的影响，以期为断定榄香烯作用的大概靶点提供

8、线索与根据。1质料与要领11动物Balb/系小鼠，引自中国医学科学院北京药物研究所，由本室自行生殖提供。12瘤株小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道转移亚系Ha-F2，由本校病理学教研室凌茂英传授赠予，本室通例传代、保种。1.3重要药品和试剂1%榄香烯注射液(eleene，大连市医药科学研究所)。吡柔比星(Pirarubiin，THP，深圳万乐药业消费)。RPI1640造就基GIB，USA。1.4Ha-F细胞悬液的制备将传代保种的Ha-F腹水型肝癌细胞通例接种于小鼠腹腔，0.2l/只，网络第78天的腹水肿瘤细胞生长最茂盛时期，殒命细胞和红细胞含量较少，HS液排除红细胞，PBS洗3次，计活细胞数，用含

9、20%小牛血清RPI1640造就液调细胞数至所需浓度。1.5Ha-F肝癌细胞的处置惩罚将Ha-F肝癌细胞用榄香烯50g/l、吡柔比星10l/l按本室通例要领单独或复合处置惩罚，设单独瘤细胞不处置惩罚比拟。Ha-F细胞浓度均为1106/l，每个不雅察时间点均设3支复管，参加相应的药品，以台盼蓝拒染法于差异时间计数活细胞数，盘算存活率。1.6单纯榄香烯处置惩罚和榄香烯团结THP处置惩罚对Ha-F增殖的影响用TT法测其D值。1.7榄香烯团结THP处置惩罚对瘤细胞超微布局的影响3Ha-F细胞用榄香烯、THP单一或复合处置惩罚，细胞浓度和处置惩罚要领同前，处置惩罚时间为1h，收细胞，用PBS洗3次，以2

10、.5%戊二醛结实，通例包埋制片，铀铅双染色，透射电镜下不雅察摄片。1.8细胞凋亡的检测和细胞周期的测定细胞网络同前，用PBS洗3次，参加PI染色液染色30in避光、室温。上机检测，ellquest软件低速获龋用dfit2.0软件阐发。2实行效果2.1榄香烯团结THP处置惩罚对Ha-F存活的影响单纯用榄香烯处置惩罚，Ha-F的存活率就显着低落，在30in1h的时间内，细胞殒命率随着药物浓度增长而增长表1，单用THP处置惩罚，也可导致Ha-F细胞殒命、蓝染，其细胞殒命率也随着药物浓度增长而增长，榄香烯团结THP处置惩罚，肿瘤细胞殒命率可达100%。表1榄香烯单独或团结THP处置惩罚对Ha-F细胞存

11、活的影2.2榄香烯和THP团结处置惩罚对Ha-F细胞周期与凋亡的影响实行效果表白榄香烯与THP团结处置惩罚对Ha-F细胞周期变革的影响及凋亡细胞百分率变革与单用THP比拟也无显着区别，榄香烯处置惩罚与不处置惩罚Ha-F比拟组细胞各时相百分率及凋亡细胞百分率变革无显着区别见表2和图1。表2榄香烯团结THP处置惩罚对Ha-F细胞周期与凋亡的影响2.3榄香烯团结THP处置惩罚对Ha-F细胞形态学的影响见图2。图2可示：当榄香烯与THP团结处置惩罚的肿瘤细胞形态产生了显着的变革，细胞核染色质浓缩，核缩小，细胞肿胀破碎，细胞完备性受到显着粉碎，而单纯用THP处置惩罚的30in内大多数没有显着改变，受损细胞形态学变革不典范，偶可见到凋亡、坏死的细