血浆内氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管损伤性疾病中特异性变化的实

1、血浆内氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管损伤性疾病中特异性变化的实【摘要】目的研究不同种氧化低密度脂蛋白X-LDL在肺癌a和动脉硬化性血管损伤性疾病As病人血液中的特异性变化，讨论不同种氧化低密度脂蛋白与肿瘤及动脉硬化发病之间的互相关系。方法以临床确诊肺癌的16例患者为a组，12例患者为As组，选择安康大学生20名作为正常对照组。分别检测血浆内LP含量、SD活性及各组氧化脂质的峰线位置。结果a组、As组LP含量与正常组比拟差异有显著性，As组SD活性与正常组比拟差异有显著性；在薄层层析中a组、AS与正常组的过氧化低密度脂蛋白分布均有不同。结论a与As患者和正常人比拟其细胞氧化低密度脂蛋白代谢特征表现

2、为代谢率增强，过氧化低密度脂蛋白具有不同的特异性变化。【关键词】氧化低密度脂蛋白；肺癌；动脉硬化性血管损伤疾病Abstrat：bjetiveTstudythedistintivehangefdifferentperxidizedldensitylipprtEin(X-LDL)inthebldfarterislertidisease(As)andlunganer(a).TinvestigatetherrelatinfdifferentX-LDLinAsanda.ethdsbjetseredividedintthreegrups:patientsdiagnsedaslunganer(agrup);

3、patientsdiagnsedasarterislersis(Asgrup);20healthystudentsfuniversity(ntrlgrup).LdensitylipprtEIn(L-LDL)andhighdensitylipprtein(H-LDL)erelletedfrtheplasaithultraentrifugeethd.ThenentratinsfLPandSDinplasaereexained.AndthetplinepsitinsandtherughnentratinsfX-LDLereevaluated.Resultsparedtntrlgrup,theLPle

4、velsinAsgrupandagruperesignifiantlyinreased.TheSDlevelassignifiantlyhigherinAsgrupthaninntrlgrup.IntheRIA,thedistributinfagrupandAsgrupversusntrlgruperedifferent.paredtntrlgrup,signifiantstatistidiffereneserefundinbthfagrupandinAsgrup.ButthereasnstatistidifferenebeteenagrupandAsgrup.nlusinTheetablir

5、atesfX-LDLansignifiantlyinreaserebthinagrupandinAsgrupthaninntrlgrup,andthespeifihangesanbebserved.Keyrds：Perxidizedldensitylipprtein(X-LDL);Lunganer;Arterislertidisease多年来世界各国的科学家们在研究心血管疾病时对人体内胆固醇H载体血浆内低密度脂蛋白LDL的变化进展了大量详细的研究，并发现了氧化低密度脂蛋白X-LDL导致血管损伤，诱发动脉粥样硬化性疾病发生的事实。但是，对消耗性疾勃肿瘤发生开展过程中的低密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋

6、白的动态变化以及互相影响却研究甚少。在本课题的前期工作中发现氧化低密度脂蛋白在肿瘤病人和动脉硬化性血管损伤性病人血液中具有不同变化，为进一步研究不同X-LDL对人体血管内皮细胞的损伤机理，研究肿瘤患者血浆内X-LDL和动脉粥样硬化病人X-LDL构成的特异性变化，本实验以肺癌病人和包括糖尿病的血管损伤性病人为对象，对上述各种疾病发生开展过程中的低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋白以及超氧化物歧化酶的变化进展了研究。同时，我们还应用薄层层析技术对上述各种疾病的血浆内氧化脂质进展了分析。1材料与仪器1.1试剂-LP由日本协和株式会社提供，SD试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。1.2仪器薄层层析板美国Si

7、ga公司,超低温冰箱日本三洋SI-F124，高速离心机德国HeraeusSTRATSHAS15.94型，超速离心机瑞士entriknT-1055型，层析用自动局部搜集器HELIRA瑞士LKB公司。2方法2.1分组以临床上经过各种检查确定临床诊断的肺癌患者和包括糖尿病的血管损伤性疾病患者作为研究对象，正常对照选择了安康、体检证明肝功能、肾功能、胸部X线及血尿常规均正常的20名大学生自愿者。分组如下：肺癌组16例，男9例，女7例，年龄为4268岁，平均51岁；血管损伤组12例，男9例，女3例，平均年龄4772岁，平均56岁；正常组20例，男10例，女10例，年龄2124岁，平均年龄22岁。2.2标

8、本制备每人清晨空腹采血16l参加乙二胺四乙酸终端浓度为0.05l/L抗凝、抗氧化，以3500r/in离心提取血浆，在冰箱0条件下保存备用。用哈贝尔的重层超速离心别离法，以40000r/in离心26h别离血浆内低密度d=1.0631.18，以40000r/in离心28h别离血浆内高密度脂蛋白(d=1.181.21)。转贴于论文联盟.ll.2.3血浆内LP的测定八木别法测定各组血浆的低密度脂蛋白内过氧化脂蛋白含量。2.4血浆内SD活性测定用放射免疫法测定各组血浆内超氧化物歧化酶(SD)的活性。2.5标本中各种脂类的薄层层析2.5.1脂类提取取标本0.8l0.6l血浆+0.2l蒸馏水加甲醇2l，加三

9、氯甲烷1l混匀，加醋酸2滴混匀后再参加三氯甲烷1l，加蒸馏水1l混匀，高速离心2000rin，10in。汲取下层在真空泵内连续吸引枯燥812h。2.5.2展开液的制作及薄层层析分析展开液由石油乙醚75l+乙醚25l+乙酸1l组成。薄层层析板先用三氯甲烷洗1次，在自然条件下枯燥12h后，在层析板上取一边打5个格，用三氯甲烷100l溶解脂质在薄层上滴注，以能吸干为度。将层析板放入含有展开液的展开槽中展开，展开至层析板顶部23时停顿展开，层析板进展显影。2.5.3显影和摄影析板放入显影槽碘化510in后取出进展摄影。初步断定各组氧化脂质的峰线位置和大致浓度。2.6统计学处理应用SPSS11.5统计软

10、件，数据以s表示，结果处理使用配对t检验。3结果3.1血浆内LP测定如表1所示，正常对照组与血管损伤组比拟P0.01，与肺癌组比拟P0.05，均具有统计学意义。氧化低密度脂蛋白含量在肺癌组与血管病变组之间有测定数值的变化，但无统计学差异。表1血管损伤组和肺癌组血浆内LP测定值略3.2血浆内SD活性测定如表2所示，血管损伤组与正常对照组比拟有明显差异，具有统计学意义P0.05，说明在血管损伤性疾病发生时血浆内SD值有明显上升趋势。表2血管损伤组和肺癌组血浆内SD测定值略3.3薄层层析结果正常对照组血浆、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和极高密度脂蛋白的薄层层析板中几乎看不到任何氧化物质

11、，而肺癌组和血管损伤组的低密度脂蛋白与正常组有不同分布，可以初步推测在血管病变性疾病和肺癌发生过程中出现的氧化低密度脂蛋白可能来自不同的物质。4讨论过氧化低密度脂蛋白是低密度脂蛋白(LDL)被氧化修饰后的产物。当体内产生过多活性氧自由基时，LDL氧化修饰作用增强，极易转化为氧化低密度脂蛋白，它是动脉粥样硬化最重要的致病因素1，2。同时，自由基也是导致癌症发生的重要因素之一，它既可直接造成DNA链损伤致突变。也可通过脂质过氧化作用影响DNA，引起基因DNA变化，合成出无活力或功能缺陷的SD，随着SD活性降低，引起自由基进一步堆积，最终诱发癌症3。在本次实验中肺癌患者组SD活性出现增高，推测其原因

12、可能为代偿性。本实验肺癌患者与血管损伤组和正常人比拟，其细胞氧化低密度脂蛋白代谢特征表现为代谢率增强，即单位时间内细胞的氧化低密度脂蛋白结合、内吞和降解量均显著增加。提示过氧化低密度脂蛋白的增加可能是肿瘤致病或增强致病因素之一。脂质是肺的重要成分,肺组织具有合成与分解血脂及脂蛋白功能,肺泡型上皮细胞及肺毛细血管内皮细胞内和外表具有脂蛋白脂酶,提示肺脏具强大脂质代谢才能。肺癌时肿瘤细胞增生活泼并伴毛细血管的增多使肺的脂质代谢异常活泼。同时肿瘤组织的某些代谢产物和分泌的某些具有生物活性的物质可直接或间接地影响细胞膜上感受器功能活性,从而形成肺癌时所特有的血脂及脂蛋白氧化修饰4，5。薄层层析实验说明

13、，肺癌和血管损伤性疾病形成过程中过氧化低密度脂蛋白具有不同特异性变化，因此推测两种氧化低密度脂蛋白的产生来源可能不同，详细机制在进一步研究中。【参考文献】1尹学哲，上村継道，金沢武道過酸化LDLPlateletEndthelialellAdhesinleule-1PEA-1発現及影響中西医结合动脉硬化症血拴症一次预防曲直部壽夫，陣紹武監修、都島基夫，金恩源編集，1996：172.2Bnnefnt-RusseltD，TherndP，BeaudeuxJL，etal.HighdensitylipprtEin(HDL)andthexidativehypthesisfatherskersisJ.linialheistryandLabratryediine,1