药典微生物相关培训 非无菌药品微生物限度标准(通则1107) 解析

1、中国药典2015年版非无菌药品微生物限度标准(通则1107) 解析杨晓莉陕西省食品药品检验所2015年08月16日主要内容（一） USP、BP、JP等微生物限度标准的介绍和对比（二） 2015年版 “非无菌药品微生物限度标准（通则1107）”修订内容（三）2015年版“纯化水” 微生物限度检查（四）执行及制定药品微生物限度标准注意事项（一）、USP、BP、JP微生物限度标准的介绍、对比1.美国药典：Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照给药途径制订微生物限度标准 没有收载含药材原粉的口服原料药，也没用收

2、载草药（herbal） 表1可接受的非无菌药品的微生物限度标准与EP7.0、JPX VI标准一致 表2可接受的非无菌药用辅料微生物限度标准与EP7.0、JPX VI标准一致 按照膳食补充剂管理，分为含中药材和不含中药材两大类，其中“含中药材的”微生物标准分7类。美国药典： Microbiological Attributes ofNonsterile Nutrinal and Dietary Supplements需氧菌总数 霉菌酵母菌总数分类控制菌（cfu/g或cfu/mL) （cfu/g或cfu/mL)耐胆盐革兰阴性菌不得过103；1.干燥或粉末药材105103沙门菌/10g2.代煎煮药材

3、105104103103大肠埃希菌/10g3.粉末状植物提取物大肠埃希菌&沙门菌/10g4.含植物药材的膳食补充剂104104103103大肠埃希菌&沙门菌/10g5.酊剂/6.流浸膏7.合剂104102103101/USP表1 可接受的非无菌药品的微生物限度标准需氧菌总数 霉菌、酵母菌总数（cfu/g、 cfu/mL) （cfu/g、 cfu/mL)给药途径控制菌非液体口服制剂液体口服制剂直肠给药制剂103102103102101102大肠埃希菌不得检出(1g或1mL)大肠埃希菌不得检出(1g或1mL)/金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1g或1mL ）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂102

4、102101101金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1g或1mL）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1g或1mL）皮肤表面给药制剂鼻给药制剂102102102102102101101101101102金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1g或1mL ）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1g或1mL）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念球菌不得检出(1g或1mL）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出(1贴)耳给药制剂阴道给药制剂贴膏剂（限含粘贴面及其背面的1贴）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、耐胆盐革兰阴性杆菌不得检出(1g或1mL）吸入用给药制剂（雾状液体制剂的特殊要求）10210

5、1USP表2 非无菌药用辅料微生物质量可接受的标准需氧菌总数（cfu/g或cfu/mL)霉菌和酵母菌总数（cfu/g或cfu/mL)103102药用辅料2.欧洲药典8.0版Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照给药途径制定微生物限度标准 对不宜进行杀菌的药材原粉并被认可的设定特殊标准 表5.1.4-1中，除增加了：“EP对不易进行抗微生物处理的药材原粉（动物、植物或矿物）并得到相关机构认可其TAMC限度可超过103cfu/g或cfu/mL的口服给药制剂的特别规定。”外，其他与USP36版、 JPX VI

6、相同。 收载了中药材（饮片）的微生物限度标准3类。EP8.0版5.1.8 草药口服制剂的微生物限度A.用沸水浸泡和煎煮的含有草药成分的含或不含有辅料的草药制品（例如，添加或未添加芳香剂的草药茶）需氧菌总数TAMC（2.6.12）限度：107CFU/g最大可接受计数结果 50000000CFU/g霉菌和酵母菌总数TYMC 限度：105CFU/g（2.6.12）最大可接受计数结果 500000CFU/g大肠埃希菌（2.6.31）限度：103CFU/g不得检出（25g）沙门菌（2.6.31）EP8.0版5.1.8 草药口服制剂的微生物限度B.含有草药和/或其提取物，含或不含辅料，采用适宜的加工工艺或

7、预处理技术，使微生物含量低于本表中限值的草药制品。需氧菌总数TAMC（2.6.12）限度：104CFU/g或CFU/mL最大可接受计数结果 50000CFU/g或CFU/mL霉菌和酵母菌总数TYMC 限度：102CFU/g或CFU/mL（2.6.12）最大可接受计数结果 500CFU/g或CFU/mL耐胆盐革兰阴性菌（2.6.31）限度：102CFU/g或CFU/mL不得检出大肠埃希菌（2.6.31）沙门菌（2.6.31）不得检出（25g或25mL）EP8.0版5.1.8 草药口服制剂的微生物限度C.含有草药和/或其提取物，含或不含辅料，经过加工工艺或预处理后，经证明不能有效降低微生物含量低于

8、表B中规定的草药制品。需氧菌总数TAMC（2.6.12）限度：105CFU/g或CFU/mL最大可接受计数结果 50000CFU/g或CFU/mL限度：104CFU/g或CFU/ml最大可接受计数结果 50000CFU/g或CFU/mL霉菌和酵母菌总数TYMC（2.6.12）耐胆盐革兰阴性菌 限度：104CFU/g或CFU/mL（2.6.31）大肠埃希菌（2.6.31）不得检出不得检出（25g或25mL）沙门菌（2.6.31）3.JPV 12Microbiological Attributes of NonsterilePharmaceutical Product 按照给药途径制定微生物限度标

9、准 药用辅料限度标准。 两个限度标准与USP36、EP7.0标准一致 收载了中药材（饮片）的微生物限度标准（herbal）3.JPV 12表1 药用原料的微生物限度微生物限度标准（CFU/g或CFU/mL)1000100需氧菌总数（TAMC）霉菌和酵母菌总数（TYMC）3.JPV 12表2 非无菌制剂的微生物限度需氧菌总数 霉菌、酵母菌（CFU/g或 总数（CFU/g或给药途径控制菌CFU/ml)CFU/ml)吸入剂（液体）吸入剂（粉末）鼻用制剂2020金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌100100100505050大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；

10、白色念球菌阴道给药制剂耳用或局部给药制剂（包括用于表皮的局部给药制剂）100*50*金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌直肠给药制剂10001000100100未规定口服给药制剂（固体）大肠埃希氏菌口服给药制剂（液体）10050大肠埃希氏菌备注：“*”表皮局部给药制剂，限度标准以“CFU/贴”标示。3.JPV 12表3 草药及其制剂的微生物限度1类（CFU/g或 CFU/ml)2类（CFU/g或 CFU/ml)微生物类别需氧菌总数107104*105103103霉菌和酵母菌总数肠道细菌和其他革兰阴性细菌大肠埃希菌沙门菌/10g102不得检出不得检出不得检出金黄色葡萄球菌*备注：1、“*”表示限值未作规

11、定；2、第1类包括不需要通过沸水浴提取或者在使用前需要加入沸水的原料药及辅料；第2类包括不需提取可直接使用的原料药及辅料（包括原料粉末）。（二）中国药典2015年版 “非无菌药品微生物限度标准（通则1107）”修订内容1、修订思路2、2015版限度标准的制订原则及总体结构3、2015版限度标准的各项具体规定1、修订思路修订思路（2）（1）将中国药典2010版一、二、三部微生物限度标准项目进行对比、整合 。参考EP7.0、USP35、JP标准，修订中国药典的微生物限度标准。 采用一部的限度标准项目作为合并后限度标准的基础。 采用清晰直观的表格形式，按给药途径、分液体、固体性状、列出各类药品的限度

12、标准。（1）中国药典2010版一、二、三部微生物限度标准的对比、合并对比：中国药典2010附录“药品微生物限度”项目表“3.5阴道、尿道给药制剂”需检梭菌3.3用于表皮或黏膜完整的含药材原粉2.3含豆豉、神曲等发酵原粉的制剂的局部给药制剂一部3.2用于表皮或黏膜不完整的含药材多于二、三部的内容2.2含药材原粉的制剂原粉的局部给药制剂一、二、三部微生物限度标准重叠、相同部分（1）中国药典2010版一、二、三部微生物限度标准对比、合并合并：为了涵盖中国药典一、二、三部所有的限度标准规定，起草时采用一部的限度标准作为合并后限度标准的基础。一部标准合并的标准二部标准三部标准（2）与欧洲药典8.0、美国

13、药典36版和日本药局方比较，修订中国药典的微生物限度标准。 修订菌数标准表述方式：指数形式10n，最大可接受限度值遵守2倍规则：-101CFU：最大可接受限度为20；-102CFU：最大可接受限度为200；-依此类推。（日局方X V无相应内容） 修订检查项目：-“需氧菌总数（TAMC）”替代“细菌数”-“耐胆盐革兰阴性菌”替代“大肠菌群”2、2015版限度标准的制定特点及总体结构 总体结构：前言+ 按给药途径分类标准+ 后语2、2015版限度标准的制定特点及总体结构 增订检查制剂类型：基于药品的给药途径及对患者的潜在危害划分风险等级来制定标准。-齿龈、皮肤制剂、呼吸道制剂；-增加原辅料、中药提

14、取物、中药饮片的控制。 兼顾国产药品的特点，保留中国药典对中药制剂分类特点：-是否含药材原粉，是否含豆豉、神曲；-是否接触完整皮肤黏膜。 贴剂：-国外：贴剂规格统一，以“贴”为单位控制限度。-国内：贴膏剂(分贴剂、橡胶膏剂、凝胶膏剂)规格各异，以“10cm2”为单位控制限度。2015版限度标准的总体结构按给药途径分类给出标准：1.制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定微生物限度标准2.3.4.用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂1.口服给药制剂（固体、液体）2.口腔黏膜给药制剂、

15、齿龈给药制剂、鼻用制剂3.耳用、皮肤给药制剂4.呼吸道吸入给药制剂5.阴道、尿道给药制剂非无菌含药材原粉的中药制剂5.6.6.直肠给药制剂（固体、液体）7.其他局部给药制剂非无菌的药用原料及辅料中药提取物及中药饮片有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准1.固体口服给药制剂（含/不含豆豉、神曲等发酵原粉）2.液体口服给药制剂（含/不含豆豉、神曲等发酵原粉）3.固体局部给药制剂（用于表皮或粘膜完整/不完整）7.4.固体局部给药制剂（用于表皮或粘膜完整/不完整）3.2015版各项标准具体规定1. 制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料，应符合无菌检查法规定。2.用于手术、烧伤或严重

16、创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。例如：制剂通则中：【无菌】：注射剂、眼用制剂*、植入剂、冲洗剂【无菌】或【微生物限度】：散剂、凝胶剂、软膏剂*、搽剂、洗剂、涂膜剂、鼻用制剂、气雾剂、喷雾剂。品种正文项下：【无菌】受热不稳定、制剂不能进行最终灭菌的无菌工艺产品。如：抗生素原料药、抗生素粉针剂等。3.2015版各项标准具体规定例如：0105 眼用制剂 定义：眼用制剂系指直接用于眼部发挥治疗作用的。 分类：眼用制剂可分为眼用液体制剂（滴眼剂、洗眼剂、眼内注射溶液等）、眼用半固体制剂（眼膏剂、眼用乳膏剂、眼用凝胶剂）、眼用固体制剂（眼膜剂、眼丸剂、眼内插入剂等）。眼用制剂也可以固态形式包装，另

17、备溶剂，在临用前配成溶液或混悬液。 检查项： 【无菌】除另有规定外，照无菌检查法（通则 1101）检查，应符合规定。3.2015版各项标准具体规定例如：0109 软膏剂 乳膏剂 定义：软膏剂 系指原料药物与油脂性基质混合物制成的均匀半固体制剂。乳膏剂 系指原料药物溶解或分散于乳状液基质中形成的均匀半固体制剂。 检查项：【粒度】、【装量】、【无菌】、【微生物限度】 【无菌】用于烧伤（除轻度烧伤或浅外）或严重创伤的软膏剂与乳膏剂，照无菌检查法（通则 1101）检查，应符合规定。 【微生物限度】除另有规定外，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则 1105）和控制菌（通则 1106）及非无菌

18、药品微生物限度标准（通则 1107）检查，应符合规定。3.2015版各项标准具体规定3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还不得检出沙门菌（10g或10ml）。3.2015版各项标准具体规定4.非无菌含药材原粉的中药制剂3.2015版各项标准具体规定5.非无菌的药用原料及辅料6.中药提取物及中药饮片中药研粉口服用贵细饮片、直接服用口服及泡服饮片3.2015版各项标准具体规定7.有兼用途径的制剂8.霉变、长螨者应符合各给药途径的标准。以 不 合 格 论。（三）2015年版 纯化水微生物限度检查纯化水检测方法比

19、较 中国药典2010年版（Ch.P 2010) 是将营养琼脂(nutrientagar medium，NA)培养基和玫瑰红钠琼脂(rose bengalagar medium，RA)培养基上的培养结果进行合并计数作为最终的报告值。纯化水检测方法比较国外药典（EP 7.0 版、USP35 版）是采用一种培养基上的培养结果进行计数。在培养体系的选择上，欧洲药典与美国药典也存在差异。欧洲药典明确规定了一种培养基为R2A 琼脂培养基，而美国药典首先对所采用的方法不做强制性规定，即便是在推荐的方法中也不明确规定某一种培养基。纯化水检测方法存在问题 现行ChP 营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的培养结果

20、合并计数的方式会带来以下几方面的问题: ( 1) 操作烦琐 实验人员检测1 水样需平行制备2 滤膜，分别贴至NA平板和A 平板，30 35 和23 28 分别培养。与EP7. 0 和USP35 只需制备1 张滤膜，贴至1 块平板相比，增加了工作量和检测费用。 ( 2) 计数结果不准确 由于最终结果是以2 种培养基上的菌落数合并计数进行结果报告，在这个过程中可能会有2 种计数结果的不准确。一是容易将A 平板上生长的细菌与NA 平板上的细菌重复计数造成最终计数结果偏高，也可能由于实验人员误将A 平板上生长的真菌当成细菌弃去不进行合并造成数据偏低。 ( 3) 国际交流不便 由于ChP 制药用水微生物

21、检查方法采用的是药品微生物限度检查法的培养基体系和培养条件，与国外药典采用一种培养基进行测定有很大的差异，不利于企业的对外交流。三国药典制药用水计数方法比较标准纯化水100cfu/mL，注射用水10cfu/100mL制药用水微生物限度检查新方法的研究，李珏，洪利娅，王知坚等；药物分析杂志2014，34( 2)：376-379制药用水检测方法比较USP 在附录1231制药用水中对制药用水制备过程中微生物的控制、数据的监测以及微生物计数方法给出的是推荐的计数方法，对用户最终采用的检验方法并不做强制性的规定，建议用户应结合自身水系统的稳态适时进行验证，根据验证结果确定适合该水系统的方法。USP不明确

22、，国内制药企业数量众多，对标准的理解能力和执行能力参差不齐，执行难。EP方法优越性较ChP2010如何？最大差异：培养基处方、时间检测方法：平皿法&薄膜过滤法制药用水微生物检验方法修订标准提高研究工作第一阶段参与单位：中国食品药品监督检验研究院、黑龙江省食品药品检验检测所、深圳市药品检验所第二阶段参与单位：浙江省食品药品检验研究院、陕西省食品药品检验所、天津市食品药品检验所制药用水检测方法课题研究课题方案：比较三个药典检测系统检测结果。多个省份，不同类型企业，19家纯水系统。5个实验室，5000余数据。 方法：A：TSA，3035，48 120hr，薄膜过滤法B：TSA，3035，48 120

23、hr，平皿法E：R2A，3035，48 120hr，薄膜过滤法G：R2A，3035，48 120hr，平皿法I ：中国药典2010年版结论：R2A灵敏度高，检出率高。薄膜过滤法制药用水检测方法修订 纯化水微生物限度检查方法【微生物限度】 取本品不少于1 ml，经薄膜过滤法处理，采用2A 琼脂培养基，30 35 培养不少于5天，依法检查（通则1105），1ml供试品中需氧菌总数不得过100 cfu。2A 琼脂培养基处方及制备酵母浸出粉蛋白胨0.5g0.5g0.5g0.5g.0.5g0.3g0.024g0.3g15g酪蛋白水解物葡萄糖可溶性淀粉磷酸氢二钾无水硫酸镁丙酮酸钠琼脂纯化水1000ml 纯

24、化水微生物限度检查方法（续）除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使加热后在25的pH值为7.20.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。2A 琼脂培养基适用性检查试验照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。R2A适用性检查试验：测试菌株：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌接种量：不大于100cfu培养条件：3035培养不超过3天实际检测：培养不少于5天，长时间培养，培养基水分散失较多执行中可能遇到的问题 拟修订方法的实验操作细

25、节实验过程中发现，部分水样在R2A培养基上培养至72h、96h，菌体个头仍很小，难准确计数，如不在伞棚灯下观察，极易漏检。这种情况甚至会出现在培养的第5天，需延长培养时间至第7天才可准确计数。（四）、执行及制定药品微生物限度标准意事项（四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项1、执行范围：-生产、贮存、销售过程中的药品-药用原料、辅料-中药提取物、中药饮片-新药标准-进口药品标准复核-药品质量考察及仲裁- （四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项2、执行标准中注意事项：2.1 药典标准出处-品种正文项下（微生物限度）要求，-附录制剂通则下（微生物限度）要求，-附录微生物限度检查法中标准规

26、定。（四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项2、执行标准中注意事项：2.2 无菌要求-正文或制剂通则要求无菌及标示无菌的制剂；-用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂；-创伤程度难以判断的局部给药制剂，有安全性风险。（四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项2.3 有兼用途径的制剂应兼顾双方标准并按照严 格的标准 执行。2.4 沙门菌检查：-检查对象：口服制剂-特点1：含脏器提取物（不区分是否为中药制剂）；-特点2 ：含药材原粉（之前为含动物药材原粉，不再界定是否为动物药材）-表1规定化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动物来源成分及矿物质还不得检出沙门菌（10g或10ml）。（四

27、）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项2、执行标准中注意事项：2.5 限度标准之外的控制要求:-标准未能涵盖所有制剂，对某些制剂可能不全面-弥补标准空白：根据原辅料及制剂的性质、生产工艺特点及使用途径，对其他可能具有潜质危害的微生物增加控制项。（四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项3、制定产品的微生物限度标准时应注意的事项3.1制定新药的微生物限度标准时-102 cfu 100 cfu，最大可接受限度为200；基于数据分析和风险评估制定标准。-原辅料、给药途径及对患者的潜在危害综合考虑到控制菌标准；产品特性：是否适合微生物生长？是否有抑制微生物生长的能力？用药对象：新生儿、婴儿、体弱者、病患伤残（四）、执行及制定药品微生物限度标准注意事项3、制定产品的微生物限度标准时应注意的事项3.2 特殊给药途径产品的标准限度-严格控制潜在致病菌，从安全性角度考虑是否需无菌控制。3.3 原辅料、中药提取物及中药饮片-参考制剂的要求及生产工艺特点设置控制菌检查要求。（四）、执行及制定药品微生物限度标准示例例1、加强染菌量的控制维生素A醋酸酯粉（制剂中间体）-丹麦产惠氏制药有限公司【微生物限度】细菌数+霉菌及酵母菌总数 应20cfu/g例2、加强控制菌检查短杆菌肽（原料药） -匈牙利产中美上海施贵宝【微生物限度】细菌数应100cfu/g大肠埃希菌、