免疫检测中的学习讨论课件

1、免疫检测过程中的学习讨论实验工作中的一些学习讨论一：Elisa实验注意事项1 试剂：从冰箱拿出后不应立即使用，因为Ag,Ab反应最适是37度。2 加样：加样枪加样位置不能太高 以免引起污染。3 孵育：时间要够 两步法最好不用一步法 板条最好不要擂起放。4 洗板：影响最大 充的水量要够 5 比色6质控 所有的步骤都应按SOP要求做TPTrust 测非特异性抗体 Tppa 测特异性抗体对于临床医生，必须给Trust Tppa 同时的结果。定量和定性结果检测不一致很正常 要填方法。艾滋病实验诊断方法 样品的保存 样品的保存用于抗原抗体检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2-8度，一

2、周以上应存放于-20度以下。艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品因及时送确诊实验室，筛查阴性的样品可根据具体需要决定保存时间。建议至少保存1-2个月。样品的运送筛查试剂筛查程序：初筛试验和复检试验筛查试验结果的报告筛查试验呈阳性反应样品的转送每一次试验必须使用室内质控品艾滋病检测实验室物品常用消毒方法废弃物缸5000mg/l次氯酸钠生物安全柜工作台面和仪器表面75%乙醇溢出物5000mg/l次氯酸钠污染的台面和器具2000mg/l次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧乙酸，器械可用2%戊二醛消毒什么是职业暴露职业暴露是指由于职业关系而暴露在危险因素中从而有可能损害健康或危及生命的一种情况医务人员职

3、业暴露是指医务人员在从事诊疗、护理活动过程中接触有毒有害物质或传染病病原体从而损伤健康或危及生命的一类职业暴露职业暴露分类感染性（80-90%为针刺伤暴露）放射性化学性职业暴露方式皮肤针刺伤或锐器切割伤黏膜或破损皮肤（如皲裂或皮肤炎症等）接触感染性材料皮肤虽然完整无破损但大面积或长时间（几分钟或更长）接触感染性材料可能暴露于HIV的意外情况与艾滋病的血液 精液 阴道分泌物 组织器官等接触即可发生感医务人员在医疗 护理过程的针刺 切割伤等性侵犯被艾滋病咬伤、针扎伤等增加感染危险性的暴露因素接触体液量大所损失伤口深造成伤口的器械上有明显的血迹器械曾插入静脉或动脉内（采血的针头）体液离开身体时间越短

4、，危险性越大接触的患者在事故后60天内死于AIDSHIV培养物、黏膜感染可能性大于皮肤病人处于窗口期安全处置锐利器具不要把用过的器具传递给别人在进行侵袭性操作时，一定要保证足够的光线，尽可能减少创口出血千万不要向用过的一次性注射器针头上盖针头套等等所以 当接触这些危险品时需戴手套 当有破损皮肤要带双层手套 脱去手套后立即洗手 进行手消毒处理 处理原则及时处理原则 报告原则保密原则知情同意原则 处理 局部处理 评估和确定 预防性用药 随访和咨询 登记和报告评估和确定艾滋病病毒职业暴露分三级根据病毒载量水平分轻 重度和暴露源不明三种 一旦决定用药 越快越好 CDC推出时间 1小时以内效果好 4小时

5、 效果降低 最迟不超过24小时 即使超过 也应该预防性用药一级暴露：暴露源：体液 血液或含有体液 血液的医疗器械、物品 类型：暴露源沾染了有损伤的皮肤或者黏膜，暴露量小且暴露时间较短。二级暴露：暴露源：体液 血液或含有体液 血液的医疗器械、物品 类型：A暴露源沾染了有损伤的皮肤或者黏膜，暴露量大且暴露时间较长。B暴露源刺伤或者割伤皮肤，但损伤程度较轻，为表皮擦伤或者针刺伤三级暴露暴露源：体液 血液或含有体液 血液的医疗器械、物品类型：暴露源刺伤或者割伤皮肤，但损伤程度较重，为深部伤口或割伤物有明显的血液事故的报告和检测 紧急处理同时立即向主管部门报告 24小时开始预防性治疗 同时抽血检测 意外

6、事故等登记表 详细记录事故发生的 时间地点及经过 暴露方式 损伤大的具体部位 程度 接触物种类 源病人状况 记录处理方法及处理经过平常工作中的问题室内质量控制: 由实验室工作人员遵照实验室制度的室内质量管理制度和相关标准操作规程，选择适当的实验方法和步骤，连续评价本实验室检测工作的可靠性程度的活动。作用:监测和控制本实验室检测工作的精密度，提高实验室常规工作中批内批间样本检测的一致性，以确定测定结果是否可靠可否发出报告的一项工作，以及排除质量环节的所有阶段中导致不满意的原因。质控结果失控后的处理重复检测，排除人为误差所致更换质控品，以查明质控品是否过期或变质更换质控品以后还不在控，可以进行仪器

7、维护后再测失控项目，可排除仪器问题引起的失控经过上述处理以后还失控，应停止相关失控检测项目（可使用替代检测方法），立即与试剂或仪器厂商沟通，寻求技术上的支持 输血笔记血清和血浆都可以用于交叉配血试验和抗体检测，最好是血清标本。必须使用不抗凝或EDTA抗凝的血标本，不得使用溶血、稀释的血标本输血前检验额每一个环节均可能出错，标本搞错最为常见保存血比新鲜血要好：因为TP在保存一天后会失活；疟原虫在2W后会失活。原则上输1个单位的红细胞，其Hb会上升5g/L。冷成淀要在24h输注，因为在24h后其八因子会失活5%Plt在22+-2度保存 不能在低温保存（聚集失活，凝血因子失活）血在室温放太久可能引起

8、细菌性污染性输血不良反应发烧不能输血盐水介质凝集试验 发生缗钱状凝集：是一种假凝集，红细胞像许多钱币堆积在一起，是血浆球蛋白异常（如高球蛋白血症、巨球蛋白血症等）所致.处理：加生理盐水适当稀释。血库工作中的常见问题一：RH定型中应注意的问题假阳性1 使用抗球蛋白方法时，受检细胞已被免疫球蛋白致敏2 受检细胞与抗血清孵育时间过长3 标本抗凝不当4 多凝集细胞5 器材或抗血清污染假阴性抗原抗体比例失调漏加或错加抗血清方法错误离心后重悬细胞扣时 用力过度美国肾脏病基金会（NKF）1)成人和儿童指南：在大多数情况下，用随机尿检查和检测蛋白尿的儿童和成人，通常没有必要用定时尿。首次晨尿为首选样本。2)成人专用指南;为筛选慢性肾病风险增加的成年人，应检测随机尿白蛋白或ACR（尿白蛋白与肌酐比值）3）糖尿病专用指南：病程.5年1型糖尿病患者，所有2型糖尿病患者每年应筛查慢性肾病 筛查应包括随机尿ACR建议作重复/确认检测对某些实验室结果在临床上是完全不可能