无尘室规范专业资料

1、第 PAGE18 页 共 NUMPAGES18 页无尘室规范专业资料泗阳云禾无尘室泗阳云禾无尘室制程制程规范规范目录一、组织培养 2 2二、增殖培养 3 3三、 各级培养基制作 4 4四、 人职员作责任分配表 6 6五、 无尘室工作人员调休措施 9 9六、 无尘室工作人员奖逞措施 10七、薪资说明 10八、 补充说明 11制程和规范一、组织培养：1. 查高产能栽培库菌谱表，分析p 得以确定无任何遗传性病史，采集5 棵金针菇； 2. 金针菇菇伞均匀圆厚、菇杆挺直、菇身纤维直密、菇脚不干缩； 3. 使用 10_解剖刀将菇帽顶表面切除，使用刀尖取出菇杆和伞肉之间子实体，移入 PDA 培养皿中做菌丝转

2、换培养； 4. 每瓶金针菇组织分离2个细胞培养皿，采集5组共10个组织培养； 5. 放置恒温培养箱中，温控 20湿度自然； 6. 培养 12 天后进入各项检测：液态摇瓶培养（纯度分析p ），目视强度比较，结抗现象交叉比对，显微镜检； 7. 5 天后精选出 2 组织培养细胞培养皿，分别编号为 A 组及 B 组； 8. 将 AB 两组液态培养液，增殖于木屑三角瓶中进行着床试验； 9. 20 天后菌丝熟成在接入栽培瓶培养基中进入出菇试验； 10.26 天后成菇采收时将 AB 两组作产质比对，选出优异表现组别再进行另一次组织培养； 11.整个步骤耗时约 6570 天；菌种名 组别母 代日期代数移转日期

3、代数菌种名组别母 代日期代数移转日期级数T022 A A0802 1 10811 2 2T022 A A0802 1 10811 2 2菌种名组别母 代日期代数移转日期级数T022 A A0802 1 10827 3 3菌种名组别母 代日期代数移转日期级数T022 A A0802 1 10921 4 4菌种名组别母 代日期代数移转日期级数T022 A A0802 1 16 5 5T022 B B0802 1 10811 2 2T022 B B0 0 802 1 10811 2 2T022 B B0802 1 10827 3 3T022 B B0802 1 10921 4 4T022 B B08

4、02 1 16 5 5PDA一级A/B 各2 2 取1 1木屑三角瓶二级A/B 各3 3 取2 2木屑原种三级A/B 各 22 取 20菌种瓶四级A A 或 或 0 B 40 篮栽培瓶五级6 24576 瓶/ / 库二、增殖培养：1. 将精选 2 组组织培养皿分别移转到细胞培养皿中； 2. 放置恒温培养箱中，温控 20湿度自然； 3. 各代种菌谱表编码以下所表示：三、各级培养基制作：1. 一级种 PDA 制作方法：1000cc 水（1 千克）、300g 土豆去皮去芽、25g 葡萄糖、25g 琼脂粉； 制作工序： 细胞培养皿空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120四小时，冷却备用； 土豆切丁1公

5、分大小煮25分钟，使用1200cc水煮成1000cc；（土豆吸收及水蒸发量为 200g） 经纱布过滤后取汁，加入葡萄糖 25g、琼脂 25g，煮沸关火。 注入培养皿中 15 （厚度约为 3 ），立放灭菌 120 度 25分钟，取出冷却（3 天后使用）； 保留环境在恒温培养箱中温度 20，使用期限 15 天； 接种（增殖培养或组织培养）后，足三天后采取立放方法培养,第五天筛选第一次，第 8 天筛选第二次，将走菌速度过快或过慢淘汰，菌面未形成三圈者淘汰； 走菌条件：恒温 20,不得放置低温保留； 2. 二级种木屑三角瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、三角瓶 6 个； 制作工序： 300m

6、l 空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120四小时，冷却备用；（或使用透气硅胶栓，可免去空热杀菌） 木屑使用网筛过选，去除细粉及过粗颗粒及杂质； 装填后含瓶重 320g 含水率 63、，木屑百分比 78、米糠百分比 15、大豆皮 2、麸皮 5。 装填后打孔，在使用清水洗净四面，塞棉花后包牛皮纸或使用透气硅胶栓封瓶口； 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置无尘操作台冷却后接种； 接种后放置养菌室进行驯化培养阶段，温控 19。3. 三级种玻璃原种瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、玻璃瓶 44 瓶；（A 种为主 B 种备用）制作工序： 500ml 空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120四小时，

7、冷却备用；（或使用透气硅胶栓，可免去空热杀菌） 木屑使用网筛过选，去除细粉及过粗颗粒及杂质； 装填后含瓶重 630g 含水率 63、木屑百分比 78、米糠百分比 15、大豆皮 2、麸皮 5； 装填后打孔，再使用清水洗净四面，塞棉花后包牛皮纸或使用透气硅胶栓封瓶口； 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置菌种冷却室冷却后接种； 接种后放置菌种养菌室进行驯化培养阶段，温控 18； 4. 四级种菌种瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、塑料瓶 640 个40 篮；（每隔 3 天多做 B 种 40 篮以作备用）制作工序：（可和三级种配方一同制作使用） 1100ml 空瓶洗净后倒放备用； 木屑使用网筛过选

8、，去除细粉及过粗颗粒及杂质； 装填后含瓶重 830g 含水率 63、木屑百分比 78、米糠百分比 15、大豆皮 2、麸皮 5； 装填后打孔加菌种专用盖，再使用清水洗净四面； 使用橡皮筋将瓶盖下沿套住； 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置菌种冷却室冷却后接种； 接种后放置菌种养菌室进行培养阶段，瓶间温度 18； 培养期间注意事项：接种后第 10 天初选一次，如发觉异常时查看菌谱，不良率达 1时（6 瓶）立即回报处里； 培养第 18 天进入双接阶段，查看走菌速度及菌面是否积存水珠，如有异常立即回报；四、人职员作责任分配表：（接菌班、环控班、菌种班）1. 接菌班；（2 人） 08：00 以前完成接菌全部

9、程序，一人将前一日处里好菌种移入接菌室，另一人同时火焰消毒接菌机，08：00 接出第一篮栽培瓶，12：00 前接菌室完成清理工作； 接菌期间每台接菌机使用2篮菌种时，根本清理接菌机一次，导槽及压克力板及活动口拆卸后使用 75 度酒精布擦洗，再将挖刀擦拭，组装完成后使用火焰枪过火消毒； 下午 13：00 或餐后 2 人同时依程序进入无尘室进行处里菌种工作； 挑选菌种指标：每次使用量为 40 篮菌种，假如处里时发觉异样或杂菌超出 6 瓶时,立即停止处里,立即会报主管人员，查出问题发生根再提报厂长进行紧急补救方法。 因菌种以 A 种为关键繁殖种，每日接种数量为 40 篮，联作三天时第四天会加作 B

10、种 40 篮作为紧急备用； 如正常生产无异常时，紧急备用 B 种菌种需移入栽培房做生长之用； 处里菌种工作完成，立即清理现场及交付日报表格后下班； 所使用菌种是上个循环菌种班时自己所接菌种，一个循环结束后将轮至环控班工作； 制作工序： 菌种养菌室取菌种 40 篮批； 每瓶开盖泡入甲酚皂（来苏尔）50：1 稀释液中取出，倒盖篮内堆放； 在 FFU 工作台下由一人挖除上层菌皮，交付给另一人使用 75度酒精布擦拭瓶口（不得碰触到菌面）再用酒精灯烧菌面，倒放在杀菌过铁板篮内（铁板使用甲酚皂 50：1 稀释液泼洒，造成水封瓶口）堆放至隔天使用； 将早晨接完铁板篮及下午剩下空篮盖移出至做菌场指定位置存放；

11、2. 环控班；（2 人） 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； 将已洗好无尘服取出至晾衣区挂起； 量测预冷室中待接菌瓶中温度是否达成 18，如达成标准立即通知接菌班人员进行常规工作； 量测菌种预冷室中待接菌瓶中温度是否达成 18，如达成标准立即通知菌种班人员进行常规工作； 量测菌母养菌室、原种养菌室、试验室、菌母处里室温度是否正常，填表交付主管人员； 统计每个压差计值，填表交付主管人员； 使用风速计量测每一个FFU进风口风量，填表交付主管人员； 使用圆形培养皿进行一楼各车间空间落尘测试 30 秒，每间对角各测一点，编号后交付主管进行培养； 使用二氧化氯、必洁仕、7

12、5 度酒精布三种药剂轮番使用，每个轮组交接前必需擦拭无尘区每个房间墙、天、地板一次； 擦拭时不得和一楼工作相冲突，接菌期间不得在正上方区域走动或清洁，菌种处里时不得在正上方区域走动或清洁； 每日工作除必需量测、统计、无尘服晾干收纳等工作项目外，在轮班前自行调整清洁区域和下班时间； 一个循环结束后将轮至菌种班工作； 3. 菌种班；（2 人） 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； 依据二级、三级、四级次序进行接种工作； 二级、三级、四级接种时在无尘操作台进行； 将各级种分类依序放置定位，并编号统计于菌谱表； 负责各级种自己所接种初检及复检工作，并交付表格随时反应很态现

13、象； 接种完成自行清理工作区域，每日工作完成后下班； 一个循环结束后将轮至接菌班工作； 4. 搬菌班；（2 人） 08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； 将前一天换洗无尘服移入洗衣机清洗； 取样量测四个角落台车瓶内温度是否达标温度 18； 如温度达标时关闭下层冷风机； 接种工作完成后一次性移出台车，经第四炉转出； 清理预冷室及缓冲区，开紫外线灯并消毒后下班； 下午出炉时以进炉次序依序推出，摆放方法依据依据做菌时第一台车至最终一台车依要求位置摆放，接菌时迭放传送带次序也依据摆放次序依序接菌； 出炉注意事项：第一炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，当第二炉结束后达开门条

14、件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第一炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第三炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第二炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第四炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第三炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第四炉炉内温度稍降时，推出第四炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 出炉完成后使用地拖沾二氧化氯稀释液，将预冷室及缓冲室地板脱湿，使用甲酚皂 50：1 稀释液消毒； 菌种预冷程序和栽培瓶出炉及消毒程序相同； 搬运、清洁、消毒

15、等工作完成时开启预冷室、缓冲室、菌种预冷室紫外线灯，以后下班离开； 打开炉门前必需注意缓冲室压差计是否正压值达标； 5. 预备班；（2 人） 负责二级种、三级种装瓶工作、四级种加工工作； 天气炎热时（做菌场内温度达 25以上）二级种、三级种、四级种装填完成后立即搬入 20 度以下库房中保留，等候第一炉门关闭前放入灭菌； 在要求存放位置取菌种专用铁板篮进行清洗，放置灭菌炉杀菌备用； 由栽培空瓶中挑选透明度高、无破损、瓶口完整空瓶提前清洗菌种瓶倒盖以作隔日使用； 挑选菌种专用瓶盖，无变形、无损坏、内置透气无纺布洁净无菌丝或杂物； 依据无尘室主管提出数量：制作 PDA 细胞培养皿及圆形培养皿，供无尘

16、室使用； 二级种瓶、三级种瓶塞棉花并干热杀菌备用 五、无尘室工作人员调休措施：（接菌班、环控班、菌种班） 无尘室内部工作属责任制，在接菌班及菌种班操作人员不可避免请假要求时，无尘室主管由环控组调动，在调动期间接菌班及菌种班应在要求时间内工作完成后，齐力完成环控班当日计划工作； 调休时无尘室主管必需统计每人工作调度情况，用以追踪菌谱可能发生变量； 当无法调度时再由预备班以不影响关键制瓶工作前提下，进行调度； 预备班如有休假时，由无尘室主管递补工作； 搬菌班如有休假时，由无尘室主管向厂长提报申请外援； 无尘室人员在本职员作完成后必需支持其它部门调度工作；六、无尘室工作人员奖惩措施： 无尘室内部工作

17、属责任制，接菌班、环控班、菌种班、搬菌班，以追踪经手一个周期 35 级菌良率为计算标准； 栽培瓶五级菌良率达 99时，该班各得岗位奖金 500 元； 栽培瓶五级菌良率达 98时，该班各得岗位奖金 300 元； 栽培瓶五级菌良率达 97时，该班各得岗位奖金 200 元； 栽培瓶五级菌良率达 96时，该班取消岗位奖金； 栽培瓶五级菌良率达 95时，该班扣除岗位奖金 200 元； 栽培瓶五级菌良率达 94时，该班扣除岗位奖金 300 元； 栽培瓶五级菌良率达 93时，该班扣除岗位奖金 500 元； 栽培瓶五级菌良率达 92时，该班调离无菌室部门； 私自省略工序、造假填表或更改工作规范者，该班调离无菌

18、室部门其它各班取消全部津贴； 无尘车间主管（组长）在合理标准下含有对各班班员任命及调职权力； 无尘车间主管（组长）奖、惩和各班每七天期相同金额处里； 为了监控及保护菌成功率，无尘车间主管有权监督养菌车间前置区环境维护，必需时可和养菌车间主管研究改善，经厂长认可实施； 七、薪资说明： 维持基础薪资； 支持其它部门工作时加班费； 当经过技能评测达标时，熟悉操作接菌机时加发 100 元； 当经过技能评测达标时，熟悉菌种优劣判定时加发 100 元； 依据岗位奖金奖惩发放标准； 良率不达各级标按时，扣除岗位奖金方法，企业只保留基础薪资外由其它工资收入中扣除（含部门外加班费）；八、 补充说明： 连续 2 个