不同浓度的软脂酸对INS1细胞功能及凋亡的影响

1、差异浓度的软脂酸对INS-1细胞成效及凋亡的影响郭亚菊，莫朝晖，陈科，谢晓云【摘要】目的不雅察差异浓度软脂酸在差异时间内对INS-1细胞成效及凋亡的影响。要领别离将0、0.1、0.2、0.3、0.4l/L软脂酸与胰岛INS-1细胞6h，24h，利用TT、流式细胞技能及RT-PR检测INS-1细胞胰岛细胞活力、凋亡率以及胰岛素基因表达，并检测细胞胰岛素排泄量。效果胰岛INS-1细胞在软脂酸中造就6h时，随着软脂酸浓度的增长，底子胰岛素排泄量增长(P0.05)，凋亡率无显着变革，而经软脂酸干预24h时，随着软脂酸浓度的增长，胰岛INS-1细胞底子胰岛素排泄量淘汰，凋亡率显着增长，胰岛素基因表达削弱

2、。结论恒久高脂损害INS-1细胞成效活性、促进细胞凋亡。【关键词】软脂酸;胰岛INS-1细胞凋亡;脂毒性胖胖是2型糖尿病紧张的伤害因素，两者均伴有显着的高胰岛素血症、胰岛素对抗和脂代谢非常。2型糖尿病中糖代谢紊乱的缘故原由之一那么为脂代谢非常，因此脂毒性越来越受到器重。如今有人提出脂代谢非常开始早于血糖的升高,大概为糖尿病的始动因素,故发起将糖尿病改为“糖脂脖，但也有人以为高血糖是产生脂毒性的先决条件,假设无高血糖,脂毒性也难以产生。为此，本研究不雅察软脂酸在差异浓度及在差异时间内对胰岛INS-1细胞成效及凋亡的影响。1质料与要领1.1质料与试剂胰岛INS-1细胞株(武汉细胞典藏中央);软脂酸

3、(siga公司)，胰岛素放免试剂盒(北京科美东雅生物技能公司)，RT-PR所需试剂(华美公司)，细胞造就基(Bibi含糖)，胎牛血清(四序青公司)。1.2实行要领取生长精良的INS-1细胞，接种于6孔板，造就至细胞交融60%70%后，比拟组(ntrl)加不含软脂酸的完全造就基2l，实行组别离参加含0.1l/L、0.2l/L、0.3l/L、0.4l/L软脂酸的完全造就基2l，每组设4个重复孔，37，5%2条件下孵育。1.3统计学处置惩罚全部数据均重复3次以上，以xs表现,效果应用SPSS10.0软件处置惩罚,各组均数经方差齐性查验后,组间比力用单因素方差阐发。2效果2.2差异浓度PA干预后TT检

4、测软脂酸干预6h时，0.1l/l低浓度实行组TT值与比拟组无差异P0.05，而较高浓度(0.2l/LPA，0.3l/LPA、0.4l/LPA)组TT值较比拟组显着低落(P0.05)，而较高浓度各组见无显着差异，而经干预24h，差异浓度软脂酸组均较比拟组D值显着低落(P0.05)，且随软脂酸浓度增长呈递减性。表2差异浓度PA干预后D值注：与比拟组比拟*P值0.05，组间两两比拟P0.05，有统计学意义2.3流式细胞检测软脂酸对INS-1细胞凋亡的影响与比拟组比拟，INS-1细胞在差异浓度的软脂酸中造就6h，细胞凋亡无显着变革，而造就24h时随着软脂酸浓度的增长，细胞凋亡率渐渐增长。表3差异浓度P

5、A在差异时间时INS-1细胞凋亡率(%)(xs)注：与比拟组比拟*P值0.05，各组间比拟P0.01，有统计学意义2.4软脂酸对INS-1细胞胰岛素基因表达的影响软脂酸干预胰岛INS-1细胞6h后，与比拟组比力，各浓度组胰岛素基因RNA表达无显着变革，而软脂酸干预24h后胰岛素基因RNA表达显着削弱。注：图中1、2、3、4、5别离代表软脂酸的浓度为0l/L、0.1l/L、0.2l/L、0.3l/L、0.4l/L，A代表PA干预6h组，B代表PA干预24h组图1软脂酸对INS-1细胞胰岛素RNA的影响3讨论本研究所用INS-1细胞来自于大鼠胰岛素瘤细胞株，能不变的排泄胰岛素，可以用于研究胰岛素细

6、胞的抱负细胞，为了进一步明白游离脂肪酸对INS-1细胞脂毒性的作用，本实行不雅察了差异浓度软脂酸在差异时间对胰岛INS-1细胞成效及凋亡的影响。效果表如今短时间(6h)内，游离脂肪酸能刺激胰岛INS-1细胞排泄胰岛素，且呈浓度依靠性，这大概与短时间内游离脂肪酸可刺激胰岛细胞产生胞吐作用有关;软脂酸干预6h时胰岛素基因表达无显着变革，进一步证实短期内游离脂肪酸刺激胰岛素排泄是通过细胞的胞吐作用实现的。同时流式细胞仪不雅察细胞凋亡率无显着变革，但TT表现细胞活力削弱，而游离脂肪酸作用24h时，INS-1细胞凋亡率显着增长，随着软脂酸浓度的增长，细胞凋亡率渐渐增长。同时胰岛素排泄量淘汰，但在本实行中

7、不雅察到0.4l/LPA时底子胰岛素排泄量增长，大概与软脂酸浓度增长，INS-1细胞凋亡较多，产生自溶，胰岛素开释入造就液中有关。且有研究表白1，表露于0.4l/L软脂酸12h时不雅察到了细胞的自溶征象，这一研究支持本实行的结论，磷酸-TR是按捺自溶活化的一个经典信号通路，在INS-1细胞颠末PA处置惩罚后，不雅察到P-TR渐渐淘汰;游离脂肪酸在细胞内被氧化后通常是无毒的9，然而长链的辅酶大概是酯类的衍生物如甘油三酯、溶血卵磷脂、神经鞘脂他们可以促进细胞的凋亡2;神经酰胺已经被提出大概是游离脂肪酸介导细胞凋亡的介质36;内质网应激和氧化应激是游离脂肪酸介导细胞凋亡的关键因素，已经提示与细胞的自溶有关7,9。对付PA作用于胰岛细胞24h时，INS-1细胞底子胰岛素排泄量淘汰，且从胰岛素基因RT-PR效果阐发，是由于软脂酸长时间作用于INS-1细胞，使胰岛素基因的转录和翻译淘汰所致，有研究报道游离脂肪酸短时间及长时间作用于INS-1细胞引起细胞成效改变完美是通过差异的机制及信号通路所致。对付PA作用于胰岛细胞24h时，INS-1细胞底子胰岛素排泄量淘汰，且从胰岛素基因RT-PR效果阐发，是由于软脂酸长时间作用于INS-1细胞，使胰岛素基因的转录和翻译淘汰所致，有研究报道游离脂