液相色谱知识总结

1、液相色谱知识总结1液相色谱的工作原理高效液相色谱（high performance liquid chromatography）是色谱法的一个分支，分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 2仪器安装要求实验室应清洁无尘，无易燃，易爆和腐蚀性气体，排风良好并避免检测器受 对流空气干扰，室温在 15-30(示差折光检测器时，室温变化不超过2)， 室内温度应控制20%-85%范围内 3工作台应平稳周围无强烈机

2、械震动和电磁干扰。工作台尽量避免靠近窗户， 以免受阳光和对流风。工作台后方离墙最好留有半米的距离方便人员检查仪器后面板。 4:电源电压为22010V，频率为500.5Hz最好配备稳压器(2kw以上) 最好 实验室有专线，同一线路上不可有大的用电机械干扰 电源为三相电源，接地必须良好(此条非常重要)，泵，检测器，工作站，电 脑接在同一个合格的接线板上 (温分每台仪器带一专用接线板) 5高效液相色谱仪Lc98型仪器系统泵 进样阀 (定量环 )色谱柱柱温箱检测器 工作站6液路系统10u过滤器 四氟管 螺母 四氟压环泵头 比例阀 压力传感器 缓冲器进样阀 色谱柱 流通池 反压器7色谱分析必备的六个条件

3、流动相比例流速进样量柱型柱温波长8液相分析实验的步骤及要求配制流动相，过滤超声备用。配制标样，制备样品。开机预热，观察基线。注射标品，保存谱图。注射样品，保存谱图。标样校正。计算含量。9色谱柱的种类 正反相色谱柱 配位体交换色谱柱 尺寸排阻色谱柱 离子交换离子色谱柱 亲和色谱柱 手性色谱柱10检测器种类高效液相色谱的检测器很多，最常用的有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器等。11紫外检测器 紫外检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器，适用有紫外吸收物质的检测。在进 行高效液相色谱分析的样品中，约有80的样品可以使用这种检测器。根据朗伯比尔定律，样品浓度越大，产生的信号越大，这种检测器灵敏度高

4、，检测下限约为10-10 gml，而且线性范围广，对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱。 12示差折光检测器 示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来进行组分检测的。凡是具有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种 检测器。如果流动相选择适当，可以检测所有的样品组分。示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为10-7g/ml，不能做痕量分析。此外，由于洗脱液组成的变化会使折射率变化很大，因此，这种检测器也不适用于梯度洗脱。13荧光检测器在其他条件一定的情况下，荧光强度与物质的浓度成正比。许多有机化合物具有天然荧光活性，另外，有些化合物可以利用柱后反应法或柱前反应法加入荧光化试剂，使其转化为具有荧光活性的衍生物。在紫外光激发下，荧光活性物质产生荧光，由光电倍增管转变为电信号。荧光检测器是一种选择性检测器，它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定。这种检测器灵敏度非常高，检出限达10-1210-13g/ml，比紫外检测器高23个数量级，适合于