二维高效液相色谱法分析小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量

1、二维高效液相色谱法分析小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量【关键词】多维高效液相色谱；,离线；,麻黄碱；,伪麻黄碱；,甲基麻黄碱摘要：目的讨论小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量分析方法。方法根据中药成分的复杂性和多样性，通过研制离线的二维高效液相色谱系统，解决成分复杂的中药样品的别离和痕量组分的定量问题。一维柱为Agilent公司的AsahipakDP50(4.0125)，5粒径，二维柱为八方公司的AihrBndAQ18(4.6250)，5粒径；缓冲溶液为20l的KH2P4，用H3P4和三乙胺调pH值为2.7；一维及二维的流动相均为缓冲溶液/乙腈97/3，V/V，流速为0.8l/in；柱

2、温为30；DAD检测器的检测波长为210n。结果麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱在进样量分别为0.363.6g，0.343.5g，0.323.3g范围内进样量与峰面积线性关系良好，平均回收率分别为97.4%，98.6%及100.2%。结论中药样品的别离明显改善，并且这个系统可用于中药的直接进样分析。关键词：多维高效液相色谱；离线；麻黄碱；伪麻黄碱；甲基麻黄碱Abstrat:bjetiveTestabishaethadfrdeterinatinfephedrinealkalidsinxiaerqingrezhikeralLiquid.ethds2D-HPLsysteasused.lunsftdien

3、sinsereAsahipakDP-50lun(4.0125,5)andAihrBnd-AQ18lun(4.6250，5)respetively.SeparatinfbthdiensinsereperfrediththebilephasefAetnitrile-002lL-1KH2P4(pHasadjustedt2.7ithphsphriaidandtriethylaine)(3：97,vluerati).Flrateassetat0.8l/in,lunteperatureassetat30anddetetinavelengthas210nResultsThelinearrangefrephe

4、drine、pseudephedrineandethylephedrineere0.363.6g,0.343.5g,0.323.3grespetively.Theaveragereveriesfephedrine,pseudephedrineandethylephedrineere97.4%，98.6%and100.2%respetively.nlusinTheseparatinfpharaeutialhasbeensubstantiallyiprved,andthetehnlgyissuitabletanalystraditinalhineseediineithdiretinjetin.Ke

5、yrds：D-HPL;ff-line;Ephedrinealkalids;Pseudephedrine;ethylephedrine多维高效液相色谱法ultidiensinalHPL，D-HPL利用两个或更多的色谱柱对复杂样品中的待分析组分进展别离，在柱之间利用切换阀将经过初次别离的全部或局部组分选择性地转入另一根或多根不同类型的色谱柱中进一步别离16。与常规的单柱别离相比，该技术具有更高的选择性、更大的峰容量和更好的分辨率。该技术操作简单，弥补了常规单柱色谱的缺乏，是一种具有开展潜力的别离分析方法。麻黄碱类药物，麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱具有相似的构造，其中麻黄碱和伪麻黄碱属于同分异构体，

6、是中药麻黄的主要有效成分。麻黄类药物在临床上广泛用于治疗伤风、哮喘和过敏等症。许多含麻黄的中成药、中西复方制剂中都含有麻黄碱类药物710。目前有关麻黄碱类生物碱的报道已有很多，但由于中药样品中所含物质成分复杂，药物含量极低，直接进样分析困难。采用二维色谱技术可以实现中药样品直接进样分析，过程简单，结果准确。1器材Agilent1100系列高效液相色谱仪由脱气机，双元泵，自动进样器，柱温箱及二极管阵列检测器和化学工作站组成。其中柱温箱具有六通切换阀、可进展柱切换。对照品：麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱均购自中国药品生物制品检定所；样品为郑州市协和制药厂消费的小儿清热止咳口服液；实验用水为娃哈哈纯洁

7、水，用0.45的微孔过滤膜过滤；KH2P4，H3P4，三乙胺为分析纯；甲醇和乙腈为色谱纯。2方法与结果2.1对照品与样品制备准确称取适量麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱对照品，置50l容量瓶中加纯水至刻度，摇匀，配制成浓度分别为450，436，412g/L的标准溶液。取10l小儿清热止咳口服液，置50l容量瓶中加纯水至刻度，摇匀，经0.45的微孔过滤膜过滤。所有样品保存于4冰箱中备用。2.2色谱条件色谱柱为一维柱为Agilent公司的AsahipakDP50(4.0125)，5粒径，二维柱为八方公司的AihrBndAQ18(4.6250)，5粒径；缓冲溶液为20l的KH2P4，用H3P4和三乙胺调

8、pH值为2.7；一维及二维的流动相均为缓冲溶液/乙腈97/3，V/V，流速为0.8l/in；柱温为30；DAD检测器的检测波长为210n。先将样品在第一维色谱柱中进展预别离，然后利用六通阀进展柱切换，将第1维别离后感兴趣的组分切换至第二根色谱柱，第1维柱中不感兴趣的组分被洗脱走，然后在第二维色谱柱中将感兴趣的组分进展进一步别离。2.3样品测定及色谱图按上述色谱条件对小儿清热止咳口服液样品及标准品进展2DHPL分析，其二维的色谱图见图1。与标样混合物的色谱图比拟，可知峰13分别对应麻黄碱、伪麻黄碱及甲基麻黄碱。同时用二极管阵列检测器在线扫描各个峰的紫外光谱，发现各个峰对应的紫外吸收峰符合麻黄类生

9、物碱的紫外吸收特征。a标样的二维色谱图b小儿清热止咳口服液的二维色谱图1.麻黄碱2.伪麻黄碱3.甲基麻黄碱图1标样及小儿清热止咳口服液的二维色谱图略2.4麻黄类生物碱的工作曲线分别取上述标准溶液0.5，1，3，4，5l配制成一系列质量浓度的标准混合溶液，用峰面积Y对质量浓度X，g/L作回归分析得到3种麻黄类生物碱的回归方程、相关系数、线性范围及最低检出限S/N=3列于表1中。从表1可知，麻黄类生物碱的线性相关性较好。2.5小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的测定按上述色谱条件对将所配制的小儿清热止咳口服液样品作HPL分析，测得麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱的含量分别为：470.01，145.33，

10、41.46g/L。2.6精细度实验在上述色谱条件下，用同一麻黄类生物碱的混合标准溶液进样分析，共进样5次，进样40l/次，测定它们的峰面积，并求得峰面积的相对标准偏向RSD如表2所示。表1麻黄类生物碱标准品的标准曲线略表2样品5次测定的标准偏向略2.7回收率实验采用加样回收实验。在含量的样品中，分别准确参加3种不同质量浓度的麻黄碱标准溶液，同样按样品分析方法进展测定，测得样品回收率见表3。从表3看出，样品回收率较高。表3回收率测定结果略3小结本实验采用2DHPL法测定了小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量。由于中药样品中所含物质成分复杂，药物含量极低,直接进样分析困难。采用我们自己研制的离线

11、的多维高效液相色谱技术，可以实现中药样品的直接进样分析,过程简单,结果准确。参考文献：1汪正范，杨树民，吴侔天，等.色谱联用技术.北京：化学工业出版社，2001：243.2刘照胜，李永民，蒋生祥，等.多维高效液相色谱别离形式组合色谱.1997，15(6):490.3王建玲，吕全建.多维色谱在分析测试方面的应用J.郑州牧业工程高等专科学校学报，1999，(2):53.4刘照胜，侯经国，蒋生祥，等.拟多维高效液相色谱及其应用于苯甲酸衍生物的别离J.分析化学，1996，24(10):1138.5周志航，胡志昂.多维色谱法及其应用J.现代化工，1991，(3):47.6张文珠，张虹，蒋生祥，等.HPL柱切换技术在临床药物分析中的应用J.分析测试技术与仪器，2002，8(1).7李红霞，丁明玉，吕琨，等.高效液相色谱法测定麻黄及其制剂中的麻黄碱类生物碱和川芎嗪J.色谱，2001，192：