高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量

1、高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量【摘要】目的建立淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为zrbaxsb-18(2504.6,5)；流动相为乙腈-水(2575,v/v),流速1.0l/in；检测波长270n。结果淫羊藿苷的进样量与其峰面积积分值在0.099840.59904g范围内有良好的线性关系(r0.9998),平均加样回收率为97.77%,rsd1.77%(n6)。结论本法简便可行,准确可靠,可用于淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定。【关键词】淫羊藿苷；淫黄胶囊；高效液相色谱法abstrat：bjetivetestablishanhplethdfrdeteri

2、natinfthententfiariininyinhuangapsules.ethdsthehplassayasperfrednazrbaxsb-18lun(2504.6,5)iththebilephasefaetnitrile-aquus(2575,v/v)ataflratef1.0l/in,andthedetetiveavelengthas270n.resultsagdlinearityfiariinasbtainedintherangef0.099840.59904g(r0.9998).theaveragereveryas97.77%andrsdas1.77%(n6).nlusinth

3、eethdissiple,feasible,aurateandreliable.itanbeappliedtthedeterinatinfiariininyinhuangapsules.keyrds：iariin；yinhuangapsules；hpl淫黄胶囊是由淫羊藿、黄芪组成的中药复方制剂,具有补气健肾之功,主要用于治疗肾病综合征。该制剂中主要药味淫羊藿主要含有黄酮类、多糖,其中黄酮类成分淫羊藿苷为淫羊藿的主要特征性有效成分。为了有效控制该制剂的质量,本实验建立了以高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷含量的方法。1仪器与试药agilent1100高效液相色谱系统(自动脱气机、vd检测器,美国产

4、)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号0737-200111,供含量测定用)；淫黄胶囊(本院中药药剂实验室研制,批号20220509、20220523、20220606)。乙腈为色谱纯(美国tedia公司)；水为注射用水；其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：zrbaxsb-18(2504.6,5)；流动相：乙腈-水(2575,v/v)；流速：1.0l/in；检测波长：270n。理论塔板数按淫羊藿苷计算不低于2500。2.2检测波长确实定取淫羊藿苷对照品适量,用50%乙醇溶解、稀释成浓度约为1g/l的溶液,以50%乙醇为空白,在400200n波长范围内扫描,结果淫

5、羊藿苷在270n波长处有最大吸收。2.3标准曲线的制备精细称取淫羊藿苷对照品10.40g,置50l量瓶中,加50%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为208.0g/l的对照品储藏液。分别从中精细汲取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6l置于25l量瓶中,加50%乙醇稀释至刻度,摇匀,得系列浓度的对照品溶液。分别精细汲取各浓度对照品溶液20l,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以淫羊藿苷进样量为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,进展线性回归,得回归方程为：y5.9532107.944x,r0.9998。结果说明,淫羊藿苷进样量在0.099840.59904g范围内与其峰面积积分值

6、有良好的线性关系。2.4供试品溶液的制备取淫黄胶囊10粒内容物,研细,取细粉约0.2g,精细称定,置具塞锥形瓶中,精细参加50%乙醇20l,称定重量,超声处理(功率200,频率59khz)45in,放置,冷至室温,称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精细量取续滤液4l置水浴上蒸干,加水10l溶解,以乙酸乙酯萃取3次,每次10l,合并乙酸乙酯萃取液,减压回收溶剂至干,残渣加50%乙醇溶解并定容至25l量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。2.5阴性干扰试验按处方制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别汲取淫羊藿苷对照品溶液(14.976g/l)、供试品溶

7、液、阴性对照溶液各20l,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图(见图1)。结果说明,在淫羊藿苷色谱峰位置处阴性无干扰。2.6精细度试验精细汲取淫羊藿苷对照品溶液(14.976g/l)20l,注入液相色谱仪,重复进样5次。结果峰面积积分值rsd1.03%,说明精细度良好。2.7稳定性试验取同一份供试品溶液(批号20220509),分别于0、2、4、6、8h时进样20l,按上述色谱条件测定,峰面积积分值rsd1.39%。结果说明,供试品溶液中淫羊藿苷至少在8h内稳定性良好。2.8重复性试验取同一批淫黄胶囊(批号20220509)5份,分别按“2.4项下方法制备供试品溶液,进样20l,按上

8、述色谱条件测定,计算淫羊藿苷含量,结果rsd2.92%。2.9加样回收率试验取已测定含量的淫黄胶囊(批号20220509)内容物,研细,称取6份,各约0.1g,精细称定,分别精细参加淫羊藿苷对照品储藏液(208.0g/l)5l,按“2.4项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果略2.10样品测定取淫黄胶囊样品3批,按“2.4项下方法制备供试品溶液,进样20l,按上述色谱条件测定,采用外标法计算淫羊藿苷含量,结果见表2。结合?中华人民共和国药典?标准规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量不低于0.5%1,暂定本品每1g含淫羊藿苷不低于8g。表2淫羊藿苷含量测定结果略3讨论在供试品溶液制备中,曾分别比拟了不同提取方式(回流法提娶超声法提取)及其不同提取时间(15、30、45、60in)对淫黄胶囊样品中淫羊藿苷的提取效率,结果两种方式提取的效果根本一致。文中所选用的超声法提取操作简便,超声45in可将样品所含的淫羊藿苷提取完全。因该超声提取法同时提取出较多杂质,本试验根据淫羊藿苷的溶解性质2,再将提取液以乙酸乙酯提娶纯化,结果能使供试品溶液中杂质大大减少,在保证被测成分提取完全的同时,减少了样品对色谱柱的污染。对于流动相,将?中华人民共和国药典?1中淫羊藿药材含量测定项中的流动相调整为乙腈-水(2575,v/v),即可得到满意的色谱别离效果。本试验所建