同济医院检验科ISO15189体系文件28乳酸脱氢酶同工酶测定

1、同济大学附属同济医院检验科生化组项目操作指导书TJYYJYKSH/XMZ128第2版标题：乳酸脱氢酶同工酶测定第章 第28节第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页1. 目的：保证乳酸脱氢酶同工酶检测结果准确、可靠2. 适用范围：乳酸脱氢酶同工酶在全自动电泳分析仪上的检测3. 项目名称：乳酸脱氢酶同工酶4. 检测方法：琼脂糖电泳测定法 原理：以琼脂糖胶作为介质，乳酸脱氢酶同工酶在电场中分离，再与呈色基质试剂作用使各同工酶区带显色，借吸光度计扫描确定其百分率。 6. 试剂： 6.1 检测试剂： 6.1.1 品牌：Helena 6.1.2 货号：3077 6.1.3 包装规格： 10片8

2、人份的琼脂片 底物盒：10瓶底物（干粉）+ 1瓶稀释剂 10张滤纸 80个样品杯6.1.4 试剂组成： 乳酸锂：937 mM；NAD：14mM6.2 辅助试剂：6.2.1 界面液：货号：3100；规格：250ml/瓶；6.2.2 清洗液：货号：1574；规格：200ml/瓶；组成：乙醇60100%，异丙醇5%， 硫酸盐5%，7. 仪器：Helena全自动电泳分析系统8. 操作：8.1 试剂的配制： 底物的配制：1瓶底物（干粉）加入700ul稀释剂8.2 REP的开机操作8.2.1 打开主电源开关，电脑自行启动，选择“7”，按回车键，进入Program Selection Menu菜单8.2.2

3、 打开REP的电源开关8.2.3 在Program Selection Menu菜单中选择“2REP”， 按回车键，屏幕显示：Loading，REP开始进入运行程序及自检，自检通过后显示电泳菜单界面8.2.4 在电泳仪右侧的检体板上的WASH槽加蒸馏水，RINSE槽加清洗液，所加的量为2/3槽，中间放一张滤纸8.3 加样：8.3.1 取100l样本放于样品杯中，避免产生气泡，并置于检体板上相应位置：A2-5，B17-208.3.2 打开电泳槽盖，加入一定量的界面液8.3.3 从试剂袋中取出琼脂片，拿掉琼脂片上的保护膜，按照圆孔在左长孔在右的方向放入电泳槽，琼脂片和温控板之间不可产生气泡，将多余

4、的界面液擦掉8.3.4 将碳棒（黑色）置于琼脂片两端的外侧，玻璃棒（白色）置于琼脂片两端的内侧，盖紧电泳槽盖8.4 电泳仪的操作；8.4.1 将溶解好的底物放在试剂槽的相应位置：黄色试剂槽8.4.2 在TESTS处用键盘上的PageUp、PageDown选择“LDH”，按F1键开始运行8.4.3 电泳参数为： Sample Application Time 2 sec Application Volume 1 ul Sample Absorption Time 1:00 mm:ss Needle Wash Cycles 5 Needle Blot Time 2 sec Electrophore

5、sis Time 5:00 mm:ss Electrophoresis Voltage 1000 volts Electrophoresis Temperatrue 10 Reagent Pour Time 1 sec Reagent Spread Cycles 4 Incubation Time 4:30 mm:ss Incubation Temperatrue 45 Dry Time 5:00 mm:ss Dry Temperatrue 50 Standby Temperatrue 268.4.4 电泳结束后，在TESTS用PageUp、PageDown选择WASH，清洗加样针，清洗结束后

6、，按F5键退出系统8.5 EDC光密度扫描仪的操作：8.5.1 打开扫描仪的电源8.5.2 在Program Selection Menu菜单中选择“3CEZSCAN”，按回车键，进入EZ-Scan主菜单8.5.3 电泳片按照圆孔在上长孔在下的方向置于扫描架上，用磁铁固定，关上门8.5.4 选择主菜单中的病人资料，按回车键8.5.5 选择工作单，按回车键，出现下拉菜单，选择“ldh”， 按回车键8.5.6 选择进入，按回车键，光标移到工作菜单内，根据提示输入病人资料，每次正确输入后，按回车键，继续下一个样本的输入，当所有样本的资料输入后，按Esc键回到主菜单8.5.7 选择清除扫描资料，出现对

7、话框，选择“是”， 按回车键8.5.8 选择主菜单中的扫描，按回车键8.5.9 选择工作单，按回车键，出现下拉菜单，选择“ldh”， 按回车键8.5.10 选择测试，按回车键，出现下拉菜单，选择“LDH-8”， 按回车键8.5.11 选择参数，按回车键，根据提示内容设定： 序号：1-8 调零：A自动 强制分带：N否 增益：A自动 编辑： Y是 定位：A自动 打印： N否 外输出：Y是 保存： Y是8.5.12 选择开始，按回车键，仪器开始自动扫描8.6 扫描图形的编辑： 具体操作详见全自动电泳仪的操作指导书（编号：TJYYJYKSH/YQZ03）9. 参考范围：LDH组分 占LDH百分比LDH

8、11833%LDH22844%LDH31830%LDH4616%LDH5213%10. 临床意义： 心肌梗塞：出现症状后1218小时血清LDH升高，约在第三天到达高峰，可达正常值的210倍，持续时间较长，718天才恢复正常，心肌中LDH1和LDH含量丰富，心肌梗塞时LDH1大于LDH，轻症患者LDH总活力虽正常，但同功酶可出现此种典型变化。肝胆疾病：大多数肝胆系统疾病常伴随LDH升高，但阳性率和增高不如转氨酶，但同功酶检查可出现LDH大于LDH，此时LDH总活力不一定增高。一般都认为LDH增高是肝细胞坏死的一个很好指标。癌肿：恶性肿瘤可由于肿瘤细胞坏死而引起血清LDH增高。和肿瘤直接接触的体液

9、如胸腹水，尿液中LDH一般常增高，如扩散到肝脏往往伴有LDH和LDH增高。白血病患者LDH增高，以LDH和LDH为主。恶性大细胞性贫血：此时LDH可极度增高，是所有病例中的最高值。同功酶检查LDH明显增加，LDH大于LDH。标本要求：血清、血浆（肝素、枸橼酸、EDTA抗凝）标本。血清必须在2h内分离，避免溶血的影响。20下血清可稳定至7天，由于LD-4和LD-5对冷敏感，不宜冷藏。12. 注意事项：12.1 底物干粉状时，储存在26冰箱，溶解后在4冰箱最多保存24小时。12.2 REP开机后，上部运行的Granty部分不能用手硬行推动，只有通过程序进入和运行后，按仪器前部的两个黑色按钮左右移动。12.3 避免使用过量的界面液，琼脂片和温控板之间不可产生气泡，电泳前一定要擦干琼脂片周围多余的界面液，电泳后，立即擦去电泳槽底的