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文档简介

1、实验二 细菌革兰氏染色法及细菌形态和特殊结构特征1一、目的要求 掌握革兰氏染色的技术，了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类学上的意义。掌握芽孢、荚膜和鞭毛染色技术，了解芽孢、荚膜和鞭毛染色的原理。二、基本原理 革兰氏染色法是一种鉴别性的染色方法，基本步骤为；先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脱色，最后用复染剂（如番红）复染。结果细胞保留初染剂篮紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞为复染剂的颜色（红色），则为革兰氏阴性菌。其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。 细菌的革兰氏染色受菌龄、培养基pH值和染色技术等因素的影响，并非固定不变。2 芽孢具有厚而

2、致密的壁，透性差，含水量低，折光性强，不易着色。在加热条件下加入着色力强的染料，让芽孢、菌体与染料作用较长时间，使芽孢染上颜色，再使菌体的颜色脱去；然后再用另一种与前者颜色不同的对比度强的染料对菌体复染，使芽孢和菌体分别呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，以便观察。 荚膜是一层覆盖在某些细菌细胞壁表面的粘性物质，主要成分是多糖类。荚膜与染料的亲合力较差，不易着色。荚膜的通透性好，某些染料可透过荚膜而使菌体着色。因此，常采用负染色法将菌体和背景着色而荚膜不着色，因而荚膜在菌体周围呈一透明无色圈。 细菌鞭毛非常纤细，直径10-20nm，只能在电子显微镜下才能观察到。但采用特殊的染色法在光学

3、显微镜下也能见到。其原理是：在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂沉积在鞭毛上，将鞭毛加粗，然后再进行染色，便能在油镜下看见鞭毛的形状和着生方式。 3三、器具材料 1.器材：显微镜、擦镜纸、二甲苯、香柏油、接种环、酒 精灯、火柴、吸水纸、载破片、盖玻片。 2.染色液及试剂: 结晶紫染色液、路戈氏碘液、 95%的酒 精、番红染 色液、蒸馏水。 碱性复红染色液、5%孔雀绿染色液。 3.菌种；培养18小时至20小时的枯草芽孢杆菌、苏云金杆 菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种。 培养24小时至36小时的枯草杆菌或苏云金杆菌、 巨大芽孢杆菌。4四、操作方法干燥涂片火焰固定结晶紫染色立即水洗碘液媒染95%酒精脱色番红复染干燥镜检.视频革兰氏染色2.flv水洗水洗革兰氏染色的步骤阳性菌阴性菌水洗5Schaeffer与FuLton氏染色法加孔雀绿染料加热制片复染脱色干燥镜检水洗染色B 近中央 C 末端 A 中央6观察荚膜和鞭毛标本片周生一端生一束荚膜7五、作业与思考题 1. 绘制细菌形态图并说明染色结果。 2. 革兰氏染色成败的关键在哪？为什么？

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