大鼠肝动脉插管并体外留置模型的改进

1、大鼠肝动脉插管并体外留置模型的改良【摘要】目的对体外留置肝靶向性给药途径的大鼠动脉插管模型进展改良，并讨论建立此模型的技术要点。方法在10倍手术显微镜下，采用特制内径0.5导管由硬膜外麻醉导管加工而成经胃十二指肠动脉剪口处插入肝动脉血管内，逆行到达肝固有动脉开口处后留置导管并固定。结果20只大鼠造模，成功者17只，成功率为85%。结论改良型大鼠肝动脉插管并体外留置模型较以往造模方法简单，并进步了模型成功率，技术易于推广，可应用于抗肝肿瘤、肝衰竭等靶向性给药的研究。【关键词】大鼠；肝动脉插管；体外留置；改良Tiprvethedelfhepatiartery(HA)atheteranddetain

2、theatheterinvitrinrats,andapprahtheskillkeysandvaluefestablishingthedel.ethdUndertheperatinirspe(10),aself-adeatheterith0.5ID,develpedbyperiduralanesthetiatheter,asintubatedinthepatiartery,thrughgastrdudenalartery,thentheatheterasretainedandfixedinrats.Result20ratsereusedtestablishthedel，inhih17rats

3、deleresuessful,theratias85%.nlusinTheiprveddelisuheasilyestablishedandahieveentratiishigherthanthers,hihaybeusedtstudyntargetingadinistratininuringliverturrhepatifailure.del;rats;HAatheterizatin;detaininginvitr;iprveent肝固有动脉插管的动物模型建立早有报道，但原有的方法易造成肝脏损伤、死亡率高，技术难以掌握。在实验研究中我们改良造模方法，掌握了技术要点，获得较为满意的效果，现将实

4、验方法报道如下。1材料与方法11材料112手术器械止血钳4把，有齿镊、持针器各1把，12.5显微镊1把，14显微剪1把，系线镊2把，小动脉夹数枚，缝合针数枚，0号、4号缝合丝线各数支，自制内径0.5动脉插管数根由硬膜外麻醉导管加工而成。113仪器Z20P510倍手术显微镜：苏州六六视觉科技股份；ES-1100型电子天平：长沙湘平科技开展。114药品戊巴比妥钠：国药集团化学试剂，批号：F20221117，25g/瓶，肝素钠注射液：江苏万帮生化医药股份，12500u/L支，青霉素钠注射液：山西太行药业股份，80万u/支。12方法拟参考Lindell肝动脉插管法1及赖力英等人的方法2进展改良，详细步

5、骤如下。121术前准备术前1天停顿喂食，自由饮水；将硬膜外麻醉导管置于60恒温水浴箱中，预热拉长为内径约0.5的导管，插口处剪成锲形，管内插入0.5动脉介入导管的金属导丝；于手术前30in经大鼠尾静脉注射50u/L肝素钠溶液2L进展手术前血液肝素钠化；以2%戊巴比妥钠45g/kg腹腔注射麻醉。122造模方法剑突以下的腹部剃毛后，络合碘消毒皮肤，手术按常规无菌手术规程操作。在腹部正中用手术刀切开皮肤切口2.53.0，用无齿镊提起腹肌沿腹白线剪开腹肌，用止血钳钳夹切口两侧的腹肌，暴露肝脏；于胃与肝交界处用棉签钝性别离肝脏乳头叶，在其下方肝门区找到肝门静脉、肝固有动脉和胆管三者并行的Glissn系统

6、，以最底下管径较粗的肝门静脉定位，中间外径较圆且有搏动的管道为肝固有动脉，下行分出胃十二指肠动脉及胃右动脉，右行为肝总动脉。去除血管外壁的结缔与脂肪组织，将各血管别离；胃十二指肠动脉与胃右动脉交界处用0号丝线结扎血管，近心端用丝线套起备用，小动脉夹夹闭肝总动脉，在血管己经结扎处前方剪开血管壁约1/31/2见图1，剪口前短暂松小动脉1次使胃右动脉血管充盈；将特制导管经胃、十二指肠动脉剪口入动脉血管,逆行到达肝固有动脉开口处，将导管内金属导丝退出,确认管腔通畅后，近心端用已经套起的丝线结扎并固定，松开动脉夹；从腹壁引出导管并固定，连续缝合腹壁肌层。皮肤切口以75%乙醇消毒后用丝线缝合，引出的导管潜

7、行于皮下至颈背部引出，用50u/L肝素钠生理盐水溶液封管，导管末端在乙醇灯下烧灼封口；术后大鼠臀部肌肉注射青霉素钠20000u/100g，1次/35d，防感染；隔天用生理盐水通管，并用50u/L肝素钠生理盐水溶液封管；每只大鼠单笼饲养。转贴于论文联盟.ll.2结果术中2只大鼠由于胃、十二指肠动脉剪口处血管断裂无法插管；术后20h1只因伤口渗血、便血而死亡；其余17只全部存活，成功率达85%，且术中出血量少，肝叶没有出现明显的损伤。术后0.51h完全清醒，术后8h可以行走，12h饮食、活动逐渐恢复正常，伤口4d完全愈合。术后留置管能顺利导入药物入肝，并能长期维持此功能见图2。3讨论31大鼠肝动脉

8、插管并体外留置模型研制的目的与意义目前在以肝脏为靶脏器的药效研究仍不理想，除了药物本身的药理作用原因外，肝靶向性差可能是重要的原因之一3。药物必须在其作用部位到达足够的浓度方能产生其特征性效应4。药物经周围静脉进入血液循环后，经过药代动力学的改变，到达肝脏的浓度已相当低，从而影响了临床疗效。而大剂量药物使用又可能造成对其他脏器的严重毒副作用，或医疗本钱的进步。经由导管置入肝固有动脉的开口，药物可以不经体循环，顺血流直接作用于肝脏，肝靶向性强。这项技术能有效的进步药效、减低用药剂量、降低治疗本钱以及减少药物的毒副作用。如，肝癌血供的90以上来自肝动脉，经肝动脉给药可有效进步肿瘤部分的药物浓度，从

9、而进步药效，减少抗肝肿瘤药物对其它脏器的毒副作用。所以肝动脉插管并体外留置大鼠模型在抗肝肿瘤、肝衰竭等研究药物对肝脏作用是有重要意义。32大鼠肝动脉插管并体外留置模型研制的现状在药物对肝脏靶脏器作用的研究中，Lindell肝动脉插管法常用于一次性的给药实验，在翻开动物腹腔导入药后又重新关闭，不能屡次性的重复给药。而在科研实验中，往往需要屡次乃至长期给药，这就需要肝动脉导管长期体外留置备用，而目前这方面的模型建立报道较少。参照现有的相关文献进展模型构建，发现有不少缺乏之处：肝固有动脉和胃、十二指肠动脉难以定位，寻找时，极容易造成肝包膜下瘀血及肝叶损伤；导管插入成功后，回流的血液极易在狭窄的管道内

10、凝固而阻塞管道；手术意外、动物死亡常见，失败率高。33大鼠肝动脉插管并体外留置模型的改良及体会在成功建立大鼠肝动脉插管并体外留置模型之后，总结经历认为此技术改良的关键有以下几点。大鼠的选择鼠龄太小或体质量太轻，其胃、十二指肠动脉管径相应会过小而致导管无法插入；鼠龄太大，血管与脂肪组织粘连过多难以别离，且血管老化失去弹性极易断裂；选择鼠龄在1630周，体质量在250350g的大鼠，实验效果比拟理想；手术前血液肝素钠化可以防止在导管插入成功后，回流的血液凝固阻塞管道，同时也可以起到充盈靶血管的作用，但要注意防止肝素用量过大而致伤口渗血、不愈合；麻醉剂及量的选择在参阅文献及预实验效果比拟后最终选择了

11、戊巴比妥钠，它具有起效快、可控性强、副作用小等优点5；鉴于实验大鼠个体差异性，以2%戊巴比妥钠45g/kg标准，先推总量的2/3，以全身软瘫、角膜反射消失为进展麻醉完成的基准，假设缺乏余下的以0.1L/次试推直至完成；血管别离Glissn系统中肝门静脉、肝固有动脉和胆管三者被共同的血管周围纤维囊所包裹，故术中血管别离操作须非常小心，尽量祛除血管外壁的结缔与脂肪组织将各血管别离，以便于血管结扎、剪切口；因为大鼠肝叶较脆，血运丰富，所以动作要轻柔，尽量防止机械损伤；动脉夹夹闭肝总动脉时间不宜过长，尽量将肝脏缺血再灌注损伤降低至最低程度；导管留置导管插入后松开动脉夹，可见管内血液回流，为导管插入成功的标志；导管潜行于皮下是其长期留置体外的关键，由于大鼠活泼好动，喜欢撕咬，一般手术置管后导管容易被撕裂、咬断，故注意严防感染，加强局布消毒，并防止凝血堵管，定期使用肝素钠通管。【参考文献】1LindellB,ArnSenKF,RthanU,eta1.Repatedarterialeblizatinfratliversbyde-grdableirspheresJ.EurSurgRes,1988,9:347-356.2赖力英,杨旭,贺志军,等.大鼠肝动脉插管给药途径的建立J.中国