应用D打印技术制作组织工程支架：修复骨缺损的研究回顾

1、应用3D打印技术制作组织工程支架：修复骨缺损的研究回顾 中国组织工程研究 第21卷 第10期 20170408出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research April 8, 2017 Vol.21, No.10 www. CRTER.org 金 灿，陈振琦(上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔正畸科，上海市口腔医学重点实验室，上海市 200011) 综述 DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.10.022 ORCID: 0000-0002-4945-9643(金灿) 文章快速阅读： 文题释义： 3D打印：属于

2、快速成形技术的一种，它是一种数字模型文件为基础，运用粉末状金属或塑料等可粘合材料，通过逐层堆叠累积的方式来构造物体的技术(即“积层造形法”)。过去其常在模具制造、工业设计等领域被用于制造模型，现正逐渐用于一些产品的直接制造。特别是一些高价值应用(比如髋关节或牙齿，或一些飞机零部件)已经有使用这种技术打印而成的零部件，意味着“3D打印”这项技术的普及。 生物反应器：指以活细胞或酶为生物催化剂进行细胞增殖或生化反应提供适宜环境的设备，它是生物反应过程中的关键设备。生物反应器的结构、操作方式和操作条件的选定对生物化工产品的质量、收率(转化率)和能耗有密切关系。生物反应器的设计、放大是生化反应工程的中

3、心内容，也是生物化学工程的重要组成部分。 摘要 背景：在骨修复中，组织工程可以作为一种新的方法取代自体骨移植。其中支架是组织工程技术的重要元素，而3D打印技术可以在其制作过程中实现精确的调控，因此有关3D打印技术在支架制作中的应用受到越来越多的关注。 目的：对现有关于3D打印支架应用于骨缺损修复的体外或体内研究进行回顾，以期为未来的科研及临床提供新的依据。 方法：由第一作者从PubMed数据库中，以“tissue engineering; bone;three-dimensional printing;scaffold”为关键词检索2003年1月至2016年3月间发表的文献，筛选出与3D打印组

4、织工程支架相关的文献。 结果与结论：目前已有大量关于3D打印组织工程支架的研究，支架的材料选择和表面修饰逐渐成为研究热点。如今支架材料适当的孔隙率已成为设计中必不可少的元素，越来越精细的加工手法也提升了支架的各项性能，而在材料的选择上也越来越多的偏向于复合材料而不是单一的同种材料，这些措施不仅提高了机械性能，还促进了细胞附着和生长繁殖，最后对于支架的各种促成骨表面处理，更是在细胞分子水平上促进了机体与植入材料间的互相作用。体内外的研究结果均显示复合材料且表面涂布骨诱导涂层均可以不同程度地提高支架性能和促进成骨。 关键词： 生物材料；骨生物材料；骨；3D打印；支架 主题词： 生物相容性材料；牙槽

5、突；支架；组织工程 基金资助： 上海市科学技术委员会科研计划项目(124119b0103) Tissue-engineered scaffold preparation using three-dimensional printing technology: a retrospective study on bone repair Jin Can, Chen Zhen-qi (Department of Orthodontics, Shanghai Ninth Peoples Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,

6、 Shanghai Key Laboratory of Stomatology, Shanghai 200011, China) Abstract BACKGROUND: The tissue-engineered scaffold, as a substitute of autogenous bone graft, plays an important role in bone repair. In the meanwhile, three-dimensional (3D) printing technology has obtained more attention because of

7、its accurate adjustment. ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 金灿，女，1992年生，江 苏省人，汉族，上海交通大学在读硕士，主要从事唇腭裂方向的正畸研究。 通讯作者：陈振琦，教授，上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔正畸科，上海市口腔医学重点实验室，上海市 200011 中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2017)10-01611-06 稿件接受：2016-12-13 Jin Can, Studying for masters degree, Department of Orthod

8、ontics, Shanghai Ninth Peoples Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai Key Laboratory of Stomatology, Shanghai 200011, China Corresponding author: Chen Zhen-qi, Professor, Department of Orthodontics, Shanghai Ninth Peoples Hospital, Shanghai Jiao Tong University School o

9、f Medicine, Shanghai Key Laboratory of Stomatology, Shanghai 200011, China 1611 OBJECTIVE: To review the in vitro or in vivo studies on the 3D-printed scaffolds applied in bone repair, thus providing basis for clinical research. METHODS: The first author searched the PubMed database using the Englis

10、h keywords of “tissue engineering, bone, three-dimensional printing, scaffold” for pertinent articles addressing 3D-printed tissue-engineered scaffolds. RESULTS AND CONCLUSION: There are plenty of studies on 3D-printed tissue-engineered scaffolds, and recent research focuses on the material selectio

11、n and surface modification. The appropriate porosity is vital, and with the development of manufacturing technology, each property of the scaffold is improved, and composite materials prevail gradually. All above improvements enhance the mechanical property and promote cell adhesion and proliferatio

12、n. Furthermore, the surface modification promotes the implant-bone interaction. In vivo and in vitro research both indicate that composite materials with the surface coating of bone induction can improve the scaffold performance and osteogenesis. Subject headings: Biocompatible Materials; Braces; Al

13、veolar Process; Tissue Engineering Funding: the Scientific Research Program of the Shanghai Science and Technology Committee, No. 124119b0103 Cite this article: Jin C, Chen ZQ. Tissue-engineered scaffold preparation using three-dimensional printing technology: a retrospective study on bone repair. Z

14、hongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2017;21(10):1611-1616. 0 引言 Introduction 牙槽突裂作为一种临床常见的骨组织缺损，经统计约75%的唇腭裂患者伴有牙槽突裂，作为上颌骨的一部分，牙槽突裂的完整性与患者牙列功能行使和面部美观密切相关，其表现为牙槽突骨质缺损、牙弓完整性丧失、牙列拥挤、口鼻瘘以及由于鼻翼基底部缺乏骨组织支持而出现的鼻翼塌陷、面部不对称等症状。而唇腭裂是一种表现多样且极为常见的先天性畸形，在中国其发病率高达0.18%，在各种先天畸形中位居第三，这种畸形对唇腭裂患者的生理心理均不同程度地存在不利影响，因此寻找一种适宜的牙

15、槽突裂修复方式显得非常必要。 目前临床最常用的治疗方法为自体骨移植，为牙槽突裂手术修复的金标准，取骨部位通常为髂骨、颏部、肋骨等 5-6 3 4 2 1 支架的方法，例如气体发泡、溶剂浇筑、熔化铸造和冻干法等，很难控制支架孔隙之间的连接、孔隙尺寸和总体孔隙率，而3D打印技术在一定程度上克服了这一系列问题 11-13 。3D打印技术是应用层层相叠的打印技术来制 作三维材料，通过电脑辅助设计和电脑辅助制作来实现快速成型打印，从而构建复杂组织结构。 目前已有研究采用3D打印技术成功制备膝关节半月板、血管、肝脏等三维模型 14 ，充分体现了3D打印技术 在实现人体组织器官再生方面的潜力。3D打印原理类

16、似于激光成型技术，分层加工、叠加成形，打印过程类似于CT或者MRI扫描的逆过程，将一层层剖面图重建从而构成三维结构。3D打印的支架因其在三维方向上的可调控性，对孔隙率及孔隙大小的严格设定，为细胞生长及组织重建提供了类似于细胞外基质的三维生长环境 15 。同时 。然而越来越多的临床工作者发现，自3D打印的个性化设计，可以使其达到多层次的结构要求，高度模拟不同部位天然骨的结构特点。而随着研究的逐层深入，3D打印的设计及制作也随之不断发展，文章就其在组织工程修复骨缺损中的应用作一些回顾，以期对临床提供新的思路。 体骨移植具有植骨区吸收且供区骨量不足的缺点，同时存在供区受创、疼痛、感染、感觉异常、功能

17、受损等不足。“组织工程”的概念自20世纪80年代首次被提出后，因其摒弃传统外科“以创伤修复创伤”的理念，转而开启“支架+干细胞+生长因子”的新型治疗模式而得到了大量关注。而3D打印作为一种新兴技术，可以根据缺损的形态做出高度匹配的支架，而由于牙槽突在口内的功能环境复杂，应力多元化，材料性能良好且尽可能契合原本裂隙的植入体是最适宜的，并且3D打印还可以精确到在微米级上控制孔隙的大小及微结构等。 组织工程是一种组织再生技术，可以有效避免上述对供区的创伤，制作出替代自体骨的生物材料，显著减少患者的痛苦和总体费用，为临床上修复牙槽突裂提供了新的途径。 组织工程有三大要素：种子细胞，支架材料，生长因子

18、8-9 7 7 1 资料和方法 Data and methods 1.1 资料来源 第一作者应用计算机检索2003年1月至2016年3月PubMed数据库(http:/www.ncbi.nlm.nih. gov/pubmed/)，英文检索词为“tissue engineering、 bone、 three-dimensional printing、 scaffold”，共检索到40篇相关文献。 1.2 纳入标准 文章需为通过3D打印技术制作组织工程支架相关领域的成果报道或未来应用探索；涉及同一领域的选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。 1.3 排除标准 重复性研究；实验设计不合理的文献。 1

19、.4 数据的提取 计算机初检得到40篇文献，阅读标题和摘要初筛，排除重复报道的病例及内容与综述所述不相关的文献,纳入符合标准的文献33篇。文献检索流程图见图1。 P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 。支架材料作为组织工程技术的三大要素之一， 其最理想的要求包括：卓越的骨传导性；可调控的生物降解性能；高度连通的多孔结构；传递细胞或者治疗药物的能力；合适的机械性能和塑形的能力 1612 10 。传统制备 将种子细胞从组织中分离出来，体外扩增后与支架混合形成细胞-材料复合物，将复合物植入机体，随着材料逐渐被降解吸收，细胞体内增殖，最终形成相应的

20、组织或者器官，这样的技术被称为组织工程技术。在整个技术中，支架形成了三维结构用以支持细胞的生长，也通过孔隙为细胞提供营养以及排泄代谢废物，最终植入体内也需要适宜的支架形态处理，以利于植入物更好地发挥各项性能，故支架的材质、制作工艺以及形态的设计是组织工程研究的重点所在。文章将从孔隙的设计、制作工艺的不同、材料的复合方式以及表面促生长因子涂层的应用4个方面来阐述近几年来对于支架的研究进展以及未来的展望。 2.1 孔隙设计 支架中必要的孔隙给种子细胞的沉积提供了更大的表面积，并且可以为新生组织的长入提供引导，相互连通的通道还可以促进营养物质的传递和代谢物的排泄。早在2004年，Seitz等 16

21、便利用改良的羟基磷灰石粉末材料，通过3D打印技术制作出了多孔生物陶瓷支架，该支架可以具备直径45 m的通道且通道间壁厚仅为330 m，机械强度可达到22 MPa。然而单一的孔隙并不能发挥出最大的作用，通道直径大小和通道排列方式的不同对于成骨的影响尚无定论。 Simon等 17 为了研究这方面，在2008年用同样的材 料通过3D打印制作陶瓷多孔支架。实验设计分为2组:组一：直径500 m的通道与支架长轴平行，以及组二：直径800 m的通道且每层通道互相垂直，MicroCT分析 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH www.CRTER.org 长入孔隙

22、的新骨生成量，结果表明组一在初期(8周)新骨长入孔隙的容积百分比显著大于组二，但是在16周时，组二新骨长入孔隙的容积百分比有所提升，相反的组一则减少了28%-45%，故最终结果表明组二的孔隙设计在16周的时候表现出较好的成骨特性。 2011年Khoda等 18 利用3D打印可控性强的特点， 制作出了孔隙大小和孔隙率根据组织需求呈现不同梯度的支架，来满足同一组织中可能需要不同机械性能和生物性能的要求，这种支架具有更优秀的结构完整性，提高了氧扩散的能力，可以顺利引导组织再生，最重要的是形成了一个恒定的孔隙规格、相互联系的复合孔隙通道系统，从而更准确地规划了细胞沉积和生长路径。 同年 Fedorov

23、ich等 19 运用水凝胶材料，研究得出 3D打印的多孔水凝胶支架对干细胞的成血管和成骨有促进作用，以及干细胞在低氧环境下新陈代谢和成骨分化的作用增强，说明孔隙的引进也显著提高了水凝胶支架的传导性能和成骨祖细胞的功能发挥。 2.2 制作工艺 经过多年的实践探索，组织工程支架，包括3D打印技术制作的支架与传统制作手法和工艺比较有了一定的发展。传统的制作流程为：粉末在高分子粘结剂的作用下分层沉积，制作出生胚后清除多余的粉末，在1 250 的高温下烧结，高分子粘接剂被分解，从而支架成形。 胶原-羟磷灰石复合支架是一种常见的复合支架，这种复合支架的常规制作方法是通过冷冻组分中的水分散体，而后冷冻干燥法

24、干燥形成泡沫状基质，然而因其不良好的营养和氧流通以及代谢物的排出不便，不适合细胞群落的生长。 2008年Sachlos等 20 利用液态二氧化碳，通过3D打 印技术和临界点干燥法，在无细胞毒性和不改变羟磷灰石以及胶原成分基本结构基础的前提下，制造出了更适宜细胞附着及生长的支架形态。而传统工艺中，基于粉末材料的3D打印技术作为常规技术被广泛应用，但随后因不易清除成型的支架结构上面所有的松散粉末，而游离粉末对支架的性能有一定影响，因而无粉技术应运而生。 2013年Butscher 21 设计出可以俘获松散粉末的带 窗笼状结构，研究包括2种形态的装臵：沙漏状和柱状，实验按照装臵与支架主体的关系不同分

25、为可移动组和与支架主体结合组，结果表明可移动组能够更好的实现无粉操作，显著提高了支架的各种性能。 除了对制作工艺宏观的调控，微观上对支架材料内部性状的改变也可以促进支架作用的发挥。软骨损伤会导致关节退行性变，2012年Fedorovich等 22 应用3D纤 维沉积技术制作负载细胞的多相带孔水凝胶支架，通过改变纤维的位臵和角度来做出不同孔隙率和弹性模量 1613 23 为了获得可比较的体外结 果，应用生物反应器给3D打印支架提供了一个可控的流体环境，提高了细胞的存活率。实验表明，无生物反应器的静态培养环境下细胞数量明显减少。有趣的是，生物反应器制造的动态培养环境不仅可以减缓细胞数量的减少，还可

26、以显著提高细胞分化能力。 2.3 复合材料 单一材料制作的支架已经无法满足组织工程结构的各种性能要求，复合材料必定是今后研究的重点。在2013年Korpela等 24 意识到3D打印熔融沉积 成型法可以使用热塑性高分子聚合物来制作支架，但是其材料的应用范围还没有完全被明确，于是针对两种复合支架进行了实验：聚已内酯/生物玻璃(PCL/BAG)和丙交酯/己内酯(PLC)共聚物，结果表明细胞在2种支架上均有显著生存和发育能力，但是成纤维细胞在后者的沉积能力显著高于前者。而由于直接3D打印技术对于材料的选择有限制，Lee等 25 利用间接3D打印技术，在通过明胶制作所需形状的模型，利用聚乙酸内酯和壳聚

27、糖的复合材料，最终形成复合型支架(图2)。结果表明该类支架性能较单一材料支架有显著提升，且生物活性磷灰石因其具有骨诱导特性而作为涂层材料，加速了细胞的增殖和转移。 图2 3D打印技术制作的复合型支架24 图注：图A为3D打印明胶模型图；B为模型扫描电镜图(标尺= 1 mm) ；C为模型扫描电镜图(标尺= 200 m) 除了主要组分材料的复合以外，在辅料的配比上的 研究也可以优化支架的各项性能。在2014年，Inzana 26 通过低温3D打印技术制作磷酸三钙支架，在磷酸粘结剂溶液为8.75%的配比且加入吐温80的条件下3D打印，使细胞相容性和机械强度最大化。实验为了获得更好的性能，胶原被融入粘

28、结剂中来形成胶原-磷酸钙成分，并分别通过生理温度和吐温80处理，减少粘度和表面张力。结果表明补充1.0%-2.0%的胶原可以最大化地提高弹性形能和细胞存活率。 复合材料不仅指两种材料的复合，3种或者更多的材料的复合也可以使材料性能更加多元化。2015年Goncalves 27 研究出一种三相支架，成分包括：纳米晶 体羟磷灰石、碳纳米管和高分子聚乙酸内酯。碳纳米管含量从0到10%，混于50%的聚己内酯基质中，羟基磷灰石作为平衡成分，结果表明含有2%的碳纳米管的实 1614 www.CRTER .org 验组拥有最好的综合性能包括机械性能和导电性，且具有良好的细胞附着和传播性能，预示这种新的合成材

29、料良好的应用前景。 2.4 表面涂层处理 复合材料的应用很大程度上提高了支架的各项性能，而随着研究的深入，支架表面涂层也逐渐成了研究的重点。 人骨中常见的微量元素有硅、锌、锶、镁等，这些微量元素具有促进成骨和成血管的功能。比如硅元素参与骨的钙化作用，在钙化初始阶段起作用，食物中的硅能增加钙化的速度，尤其当钙摄入量低时效果更为明显；锶可调节MSCs(骨髓间充质干细胞)向成骨细胞分化，并促进骨基质蛋白的合成和沉淀；锌和镁均为人体维持正常生理功能所必需的微量元素。 早在2013年Fielding等 28 就研究得出，在-磷酸 三钙表面涂层氧化硅和氧化锌，结果表明涂层促进了成骨和成血管的作用，而且新血

30、管形成量是单纯磷酸三钙支架组的3倍。Tarafder等 29 一直致力于3D打印磷 酸三钙支架的性能研究，在2013年的前期研究中表明微波烧结技术可以有效增强磷酸三钙多孔支架的机械性能，又因为磷酸三钙支架中阿仑膦酸钠的释放代表了磷酸三钙的降解，他们于2014年研究得出在磷酸三钙支架表面加上聚乙酸内酯涂层 30 ，对控制和维持阿 仑膦酸钠释放有作用。研究表明磷酸三钙+阿仑膦酸钠+ 聚己内酯支架组最大化地促进新骨生成，跟单纯磷酸三钙组和聚己内酯涂层的磷酸三钙组相比，所有包含阿仑膦酸钠组分的支架组均显示较高的新骨生成和较少的破骨细胞反应，这说明体内阿仑膦酸钠从聚己内酯涂层的磷酸三钙支架上释放可以诱导

31、早期成骨增加。在此基础上，Tarafder等于2015年研究出 31 在3D 打印且微波烧结而制作的(磷酸三钙)支架表面增加氧化锶和氧化镁涂层，并对大鼠股骨远中端的缺损进行修复，跟单纯磷酸三钙支架相比较，含氧化锶和氧化镁涂层的支架可以更快地诱导矿化骨钙蛋白和一型胶原的生成，结果显示涂层组可以通过加速成骨和成血管来早期修复骨缺损。 除了微量元素，一些蛋白也对成骨有促进作用，已知骨形成蛋白家族成员约有43种，而骨形态发生蛋白2是其中成骨活性最强的一种。 Shim 32 于2014年研究出一个重组人骨形态发生蛋 白2慢传递系统，分别利用胶原和明胶包裹重组人骨形态发生蛋白2，前者长效传递，时间长达28

32、 d，后者短效传递，时间为7 d左右。对于人骨髓间充质干细胞来说，5 mg/L的重组人骨形态发生蛋白2剂量是无细胞毒性的，体内试验表明在4周和8周时长效释放模式的聚己内酯/PLGA/胶原/重组人骨形态发生蛋白2复合支架显示了良好的修复性能且无组织炎性反应，而短效组则在4周左右的时候发生了大量巨噬细胞反应。 P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 33 将微量元素与骨形成蛋白结合，在多孔聚酯支架表面涂布三种磷酸钙涂层：镁替代-磷酸三钙(-TCMP)、碳酸化羟基磷灰石(SBM)和双相磷酸钙(BCP)，且分别负载有不同剂量的重组人骨形态发生蛋白2，

33、3组支架都可以有效维持重组人骨形态发生蛋白2的长效释放，组织学结果显示在支架表层骨生长迅速，表明在有涂层的支架组可以观察到良好的骨整合和骨诱导，鉴于重组人骨形态发生蛋白2对新骨生成的促进作用，结果进一步说明支架涂层和重组人骨形态发生蛋白2具有协同作用。 2.5 其它 目前关于3D打印组织工程骨支架的研究重点不仅体现在支架和细胞的相互反应方面，同时涉及其与宿主之间的相互关联。为了研究细胞外基质对生物反应的影响，Kumar等 34 在2016年发表的研究中，制造出模仿 天然细胞外基质的成分应用于3D打印烧结的羟基磷灰石支架，细胞外基质利用冻融循环法进行脱细胞处理，结果表明在脱细胞基质中的支架表面，

34、蛋白、肌动蛋白和黏着斑蛋白有显著的高表达，表明基质脱细胞处理后的支架可以提供一个可以促进细胞-细胞以及细胞-支架反应的有利环境，所以对于支架外基质的处理也为3D打印支架更好地修复骨缺损提供新思路。 3 讨论 Discussion 针对骨的组织工程研究尤其多见，包括长骨的大段骨缺损 35 、承载重要器官的颅骨的缺损 36 、还有行使功能时 环境复杂的牙槽突的缺损37 。骨组织作为主要承重结构， 在人体结构中扮演着无可替代的作用。支架作为组织工程骨中起支撑作用的组分，需要良好的机械性能和形态结构，而由于组织工程骨起到临时修复功能，之后自体骨的生长会逐渐替代组织工程骨，故支架的可吸收性、吸收速度及支

35、架材料对机体的促成骨作用也是设计中需考虑的重要因素。 现如今支架材料适当的孔隙率已成为设计中必不可少的元素，越来越精细的加工手法也提升了支架的各项性能，而在材料的选择上也越来越多的偏向于复合材料而不是单一的同种材料，这些措施不仅提高了机械性能，还促进了细胞附着和生长繁殖，最后对于支架的各种促成骨表面处理，更是在细胞分子水平上促进了机体与植入材料间的互相作用。 综上所述，目前对于应用3D打印技术并经过各项改良的组织工程支架的研究取得了良好的成果，尽管仍需要大量的研究支持最终的临床应用，其在牙槽突裂植骨术中仍然有着良好的应用前景。 未来对于组织工程支架的研究重点需放在材料吸收速率与新骨生成速度匹配

36、程度和减少炎症反应方面，并且牙槽突作为承担牙齿咀嚼力的部分，特别是在口内应力复杂的条件下，其特殊性对于支架材料的性能又有 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH www.CRTER.org 着不同的要求，还需要进一步的研究与探索。相信在不久的将来，3D打印辅助组织工程技术可以成熟地应用于牙槽突裂修复术中，更好地帮助完全性唇腭裂患者获得理想的功能和美观。 致谢：衷心感谢上海市科学技术委员会科研计划项目(124119b0103)资助，项目负责人：陈振琦教授。 利益冲突：第一作者、通讯作者构思设计本综述，第一作者完成对文献的检索、综述的撰写，通讯作者对综述

37、进行修改和审校。 利益冲突：所有作者共同认可文章无相关利益冲突。 伦理问题：文章的撰写与编辑修改后文章遵守了系统综述和荟萃分析报告规范(PRISMA指南)。 文章查重：文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测系统进行3次查重。 文章外审：文章经国内小同行外审专家双盲外审，符合本刊发稿宗旨。 作者声明：第一作者对于研究和撰写的论文中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁，可接受核查。 文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。 开放获取声明：这是一篇开放获取文章，文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相

38、关协议。根据知识共享许可协议“署名-非商业性使用-相同方式共享3.0”条款，在合理引用的情况下，允许他人以非商业性目的基于原文内容编辑、调整和扩展，同时允许任何用户阅读、下载、拷贝、传递、打印、检索、超级链接该文献，并为之建立索引，用作软件的输入数据或其它任何合法用途。 4 参考文献 References 1 Cho-Lee GY, Garca-Dez EM, Nunes RA,et al.Review of secondary alveolar cleft repair.AnnMaxillofac Surg.2013; 3 (1):46-50. 2 Bergland O, Semb G, A

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