乙肝五项检测

1、乙肝五项检测（ELISA法）一、检测目的：乙型肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测。二测定分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法。HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs（HbsAg）包被反应板，加入待测标本， 同时加入多克隆抗-HBs-HRP（HBsAg-HRP）,当标本中存在HBsAg（ HBsAb）时，该 HBsAg（ HBsAb）与包被抗-HBsAg（ HBsAb）结合并与抗-HBsAg-HRP （HbsAb-HRP）结合形成抗-HBsAg（ HBsAb）-抗-HBsAg-HRP（ HBsAb-HRP） 复合物，加入TMB底物产生显色反应

2、，反之则无显色反应。HBeAg原理采用抗-HBe包被反应板加入待测标本同时加入抗一HBe-HRP， 如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗一HBe-HRP结合形成复合物，加 入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗一HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBc含量高，则

3、抗一HBc-HRP 与HBcAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。三、操作步骤:1、将试剂从冷藏室中取出，30分钟后平衡至室温方可开启使用。2、用蒸馏水将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。3、将微孔条固定于支架上，按序编号。4、按具体使用试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显色。9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值。I结果判断：样品OD值/阴性对照平均OD 2.1，判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。五、注意事项：1、冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡30分钟后方可使用。2、使用试剂前摇匀，并弃

4、去1-2滴后垂直滴加。3、结果判定必须在反应终止后10分钟内完成。4、不同批号的试剂不可混用。5、待测标本不可用NaN防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。六、生物安全防护：1、在检测前，所有标本均应视为阳性”标本即生物危险品。2、如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3、操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。4、HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100C10分钟、高 压蒸汽灭菌121C15分钟或干热160C2小时均可灭活HBV5-10g/L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔

5、马林37C72小时，0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义：乙肝病毒血清标志物的临床意义(即常说的乙肝五项或称两对半)序号HBsAg表面抗原 抗-HBs HBsAb表面抗体HBeAg 抗原 抗-HBe HBeAb E抗体抗-HBc HBcAg核心抗体临床意义出现率9种常见模式过去和现在未感染过HBV。1-30% + (1)既往感染未能测出抗-HBs ; (2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出 现；无症状HBsAg携带着。5-10%- - - + + (1既往感染过HBV;(2)急性HBV感染恢复期；(3)少数标本仍有传染性。HBV感染已过；抗HBs出现前的窗口期2-10%

6、- + - - - (1 )注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；假阳性1-6%- + - + +急性HBV感后康复。0.5-5%+ - - - + (1 )急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。10-15%- + - - +既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。5-15%+ - - + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者；传染性弱。即俗称的“小三阳”。5-10%+ - + - +急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。即俗称的大三 阳”。30-40%16种少见模式+ (1)急性HBV感染早期，急性HBV感染潜伏期；(2)慢性HBV携带

7、者， 传染性弱。+ - - + - (1 )慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向恢复。+ - + -急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。+ - + + + (1 )急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。+ + - - - (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感染。+ + - - + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV 二次感染。+ + - + -亚临床型或非典型性感染。+ + - + +亚临床型或非典型性感染。+ + + - +亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物，新的不同亚型 感染。- - + - - (1)非典型性急性

8、感染；(2)见于抗-HBc出现之前的 感染早期，HBsAg 滴度低而呈阴性，或呈假阳性。- - + - +非典型性急性感染。- - + + +急性HBV感染中期。- + - + - HBV感染后已恢复。- + + -非典型性或亚临床型HBV感染。- + + - +非典型性或亚临床型HBV感染。- - - + -急性HBV感染趋向恢复。7种罕见模式+ + + + +一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）；血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）。- + + + - + + + +- - + + -+ - + + -+ + + -+ + + + -乙肝五项检测（胶体金法）一、检测目的乙型

9、肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测。二测定HBsAg、HBsAb、HBeAg均采用双抗体（原）夹心法原理。HBeAb、HBcAb采用竞争法原理。三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下:在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书.使用前将试剂板和血清/血浆标本 恢复至室温(2030%)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在l小时内应尽快地使用。将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清/血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果

10、。在 20分钟后读取的结果无效.由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项 日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不 同的.请注意区别。HBsAg、HBsAb、HbeAg阳性(+):两条红色条带出现。一条于测试区(丁)内，另一条位于质控区(C)。阳性 结果表明：标本中含有待测物质。阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结 果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试

11、剂盒重新测试。如果问题仍 然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可 显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有 非常弱的色带也应该判为阳性结果。2 HBeAb、HBcAb强阳性(+):仅质控区(c)出现一条红色条带.在测试区(T)内无红色条带出现。 阳性结果表明：标本中含有待测物质。弱阳性(+):质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带 出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性(一):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(

12、c)。阴 性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品， 并与当地供应商联系。五、注意事项l请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定 无效。乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清/血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的 存在，不能确定血样中病毒的含量。由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检 测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。六、生物安全防护在检测前，所有标本均应视为阳性”标本即生物危险品

13、。如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100C10分钟、高压 蒸汽灭菌121C15分钟或f热160C2小时均可灭活HBV5 10g/ L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔马林37C72小时，O 5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV ,现在已恢复， 而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，

14、即 接种免疫成功的指标。HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝 细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预 测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性 的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70%90%。HBeAb阳性:多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制， 病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出 HBeAb ;在HBsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAb和HhcAb，也能确诊为乙型肝炎近期感染。HBcAb

15、IgG阳性:高滴度表示正在感染，低滴度则是既往感染过HBV的指标， 具有流行病学的意义。HBcAbIgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示 检验对象血液有较强传染性。同时，HBcAbIgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。乙肝表面抗原检测（胶体金法）一、检测目的乙型肝炎病毒标志物HBsAg检测。二测定HBsAg采用双抗体（原）夹心法原理。三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下:在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书.使用前将试剂板和血清/血浆标本 恢复至室温(2030%)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在l小时内应尽快地使用。将试

16、剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清/血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在 20分钟后读取的结果无效.、结果判定HBsAg (1)阳性(+):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质 控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结 果表明：标本中检测不出待测物质。(3)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测

17、试。如果问题仍 然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：在进行HBsAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现 象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该 判为阳性结果。五、注意事项请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。胶体金法乙肝表面抗原检测试剂板（血清/血浆）只是定性的筛选乙肝病毒血清标 志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检 测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。六、生物安全防护在检测前，所有标本均应视

18、为阳性”标本即生物危险品。如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100C10分钟、高压 蒸汽灭菌121C15分钟或f热160C2小时均可灭活HBV5 10g/ L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔马林37C72小时，O 5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg 也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。沙眼衣原体igG抗体检测（胶体金法）一、检测

19、目的：用于检测试验血清中的沙眼衣原体抗体IgG。用沙眼衣原体抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中沙眼 衣原体抗体IgG。三、样本要求:1、血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2C 8C条件保存不超过一周。2、高脂血症血清不能使用。1、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟;1、滴入洗涤液一滴于反应板中央孔中，待液体将膜完全湿润;2、加入待测血清1505 （若用样品吸管则加4滴）于反应板孔中，待液体充分吸入;3、滴加三滴金标液于反应板孔中，待液体充分吸入；4、渗入三滴洗涤液于反应板孔中，待液体充分吸入。阳性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端出现红色圆斑，为沙眼衣原体抗体IgG阴性：反应

20、板孔中C端出现红色圆斑，T端不出现红色圆斑，为沙眼衣原体抗体IgG失效：反应板孔中C端不出现红色圆斑，或C端、T端均不出现红色圆斑，为试剂盒失效。六：检验方法的局限性：1、本试剂试验仅用于检测沙眼衣原体抗体IgG而非直接检测沙眼衣原体抗原，因而阳性结果并不能确诊是沙眼衣原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。2、抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。部份沙眼衣原体感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。此时，可能显示阴性结果。3、本试剂不能确定沙眼衣原体抗体IgG的确切含量。七、注意事项:1、必须使用新鲜血清或2-8C放置3天内的血清测定。少数标本（高脂

21、血、高胆红素、溶血）背景轻微偏深，一般不影响结果判断。2、加有抗凝剂、促凝剂的标本渗滤速度缓慢，底色太红，影响结果判读，建议不 使用。3、加液体的各步操作之间不得有时间间隔洞一步骤中所加液体应迅速一次加入后等其渗入。4、超过规定时间出现的结果无效。5、质控点的强弱并不代表试剂质量的优劣。6、不同产品、同产品不同批次之间的金标液、洗涤液严禁混用。7、解脲支原体抗体、人型支原体抗体、淋球菌抗体、类风湿因子对试剂盒检测结 果基本无影响。八、临床意义:沙眼衣原体感染病人血清中可检出特异性抗体。lgM出现较早，持续约1个 月，其阳性提示近期感染沙眼衣原体，可作为早期诊断的指标；lgG出现较晚， 持续时间

22、较长，可用于回顾性诊断和流行病学调查。阳性：见于沙眼、成人包涵 体结膜炎、男性尿道炎、女性宫颈炎和输卵管炎、性病淋巴肉芽肿等。梅毒血清学筛查hi一、乳胶层析法1、检测目的：梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性性传播性疾病。当病原体侵入人体后，可刺激人体的免疫系统产生抗梅毒螺旋体的特异性抗体，采用胶体金免疫检测技术，能够快速检测到人血清血浆）中的梅毒螺旋体抗体，为临床提供诊断和预防。适用于性病、 高危人群、无偿献血员现场的初筛。2、检验原理：本品采用胶体金免疫检潮技术和层析原理，定性检测血清（或血浆）样本中的梅毒螺 旋体抗体。3、样本要求：1）、静脉的血清、血浆样本必须在无菌条件下，并避免样品溶血。

23、2 ）、血清和血浆样品（EDTA抗凝）收集后7天内检测.样品须放在28C保存.如 果大于7天则须冷冻保存。4、检验方法：在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂盒和待测样本恢复至室温（825C）1）、从原包装中取出试剂。在1小时内应尽快的使用。）、将试剂置于干净平坦的台面上，在加样孔（S）内使用微量加样器加入100 u l 样本。） 202分钟观察并记录试验结果。5、结果判断：1）、阳性：试剂盒在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的紫红色条带降约可见.建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。2 ）、阴性：试剂盒只在对照区位置出现一条紫红色条带。3 ）、失效：不出现紫红

24、色条带或仅在检测区出现一条紫红色条带。表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高。在此情况下，应再次 仔细阅读说明书。并将待测样本稀释后甩新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在。应立即停止使用此批号产品。并与当地供应商联系。注意：测试区（1）内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象。但是.在规定的观察时 间内不论瞄带颜色深浅。即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。6、注意事项：1）、本试剂盒仅用于体外诊断试验。仅用于人血清（浆）.其它体液和样品可能得 不到准确的结果。2 ）、样本的加样建议使用微量加样器准确加入。3）、试验环境应保持一定湿度（60%以下），避风。避免在过高温度下

25、进行试验。4）、试剂从包装中取出后。应尽快进行试验，避免放置于空气中过长时间，导致受 潮。5）、试剂盒可在室温下保存.谨防受潮。低温下保存的试剂应平衡至室温方可使 用。6 ）、对于那些含有感染源和怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安全保证程序。下列为有关注意事项：（1）带手套处理样本和试剂。（2）不要用嘴吸样。不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜。用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒。(5)按当地的有关条例来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。(6)试剂盒各成份在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定不能使用过效 期的试剂盒。7)、检测线颜色的深浅的程度与样品中抗体的

26、滴度没有一定的必然联系。22分钟 后判读.结果无效。8 )、任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗体存在，所以阴性结果 任何时候不能排除台有梅毒螺旋体暴露和感染的可能。本品检测阳性样本.需用其 它方法作进一步的确认。三、临床意义：梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病(STD)，病原体为苍白密螺旋体 (TP)，俗称梅毒螺旋体1。由于梅毒只感染人类，因而人是梅毒的唯一传染源；梅 毒螺旋体对人体的黏膜及皮肤具有亲和力，故可通过黏膜或有破损的皮肤进入人 体，经淋巴系统及血液循环，播散至全身，几乎可以累及全身各器官和组织。人体 感染梅毒后4 6月就能在体内检测到特异性抗体。近年来，梅毒在我国的

27、发病率 呈逐年增加的趋势1，选择敏感性及特异性高的诊断方法，对该病的防治具有重 要意义。促甲状腺素检测(电化学发光法).、检测用途用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的促甲状腺激素(thyrotropin,TSH )含量。二检测原a采用双抗体夹心法原理，反应分三个步骤进行。第1步：50 l标本、生物素化的抗TSH单克隆抗体和钉(Ru)标记的抗TSH单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。三、样品的收集和保存血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂、钠、铵；EDTA-K3 ；枸橼酸钠或