一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1、一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 M Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量 1L配制方法1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约 70 ml7.6约 60 ml8.0约 42ml将溶液定容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却全室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变 化差异很大，温度每升高lC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5 M Tris-HCl(pH8.8)组份浓度 1.5

2、MTris-HCl配制量 1 L配制方法1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。用浓HCl调节pH值至8.8。将溶液定容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却全室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变 化差异很大，温度每升高lC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。1 0 xTE Buffer (pH7.4, 7.6， 8.0)组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4, 7.6, 8

3、.0)100 ml500 mM EDTA(pH8.0)20 ml向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。室温保存。3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度3 M醋酸钠配制量 100 ml配制方法 1.称量40.8 g NaOAc3H2O置于100200 ml烧杯中，加入约40 ml 的去离子水搅拌溶解。加入冰醋酸调节pH值至5.2。加去离子水将溶液定容至100 ml。高温高压灭菌后，室温保存。PBS Buffer组份浓度 137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，

4、置于l L烧杯中。NaCl8 gKCl0.2 gNa2HPO41.42 g叩040.27 g向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铉配制量 100 ml配制方法1.称量77.1 g醋酸铉置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离 子水搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至100 ml。使用0.22 pm滤膜过滤除菌。密封瓶，室温保

5、存。注意：醋酸铉受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可 用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免 使用。同时也应避免使用结品苯酚，结品苯酚必须，160C对其进 行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯 键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对 DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行 分子生物学实验。操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手 套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的 皮肤部位应用大量水清洗，并用

6、肥皂和水洗涤，忌用乙醇。苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使 用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平 衡操作方法如下：夜化苯酚应贮存于-20C此时的苯酚呈结品状态。从冰柜中取出 的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68r水浴中使苯 酚充分融解。加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原 剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其 呈黄色，有助于方便识别有机相。加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌l5min, 静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤加入等体积的0

7、.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌 l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤稍微残留部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。将苯酚置于棕色玻璃瓶中4笆避光保存。苯酚/氯仿屏戊醇配制方法l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇 (25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离， 而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混 合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4。保存。10%(W/V)SDS组份浓度 10%(W/V)SDS配制量 100

8、ml配制方法1.称量10 g高纯度的SDS置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水，68C加热溶解。滴加浓HCl调节pH值至7.2。将溶液定容至100 ml后，室温保存。2 N NaOH组份浓度2 N NaOH配制量 100 ml配制方法1.量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程 中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。2.5 N HCl组份浓度 2.5 N HCl配制量 100 ml配制方法1.在

9、78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。室温保存。5 M NaCl组份浓度5 M NaCl配制量 1 L配制方法1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后 搅拌溶解。2加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。高温高压灭菌后，40保存。20%(W/V)Glucose(葡萄糖)组份浓度 20%(W/V)Glucose配制量 100 ml配制方法1.称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离 子水后。搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至l 00 ml。高温高压灭菌后，40保存。Sol

10、ution l (质粒提取用)组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose配制量 1 L配制方法1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。1 M Tris-HCl(pH8.0)25 m0.5 M EDTA(pH8.0)20 m20% Glucose(1.11 M)45 mdH2O910 m高温高压灭菌后，4。保存。使用前每 50 ml 的 Solution l 中加入 2 ml 的 RNase A(20 mg/ml)。Solution II (质粒提取用)组份浓度 200 mM NaOH，1%(W/V)SDS配制量 500 ml配制方法1.量

11、取下列溶液，置于500 ml烧杯中。10%SDS50 ml2NNa0H50 ml加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。Sol ution m (质粒提取用)组份浓度 3 M KOAc， 5 M Ethano ic acid (乙酸)配制量 500 ml配制方法1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc147gEthano ic acid57.5ml2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至500 ml。高温高压灭菌后，4C保存。0.5 M EDTA (pH8.0)组份浓度 0.5 M

12、EDTA配制量 1 L配制方法 1.称取186.1g Na2EDTA2H2 O,置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。用 NaOH 调节 pH 值至 8.0(约 20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4加去离子水将溶液定容至1 L。适量分成小份后，高温高压灭菌。室温保存。1 M DTT组份浓度 1 M DTT配制量 20 ml配制方法1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 pm滤膜过滤 除菌。适量分成小份后，-20Cf保存。10 mM ATP组份浓度 10

13、mM ATP配制量 20 mL配制方法1.称取121 mg Na2ATP-3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。适量分成小份后，-20Cf保存。二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)组份浓度 30%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Acrylamide290 gBIS(双丙烯酰胺)10 g向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至l L，用0.45呻滤膜滤去杂质。于棕色瓶中4Cf存。注

14、意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性， 配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有 少量的未聚合成份。40%(W/V)Acrylamide组份浓度 40%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Acrylamide380 gBIS20 g向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 pm滤膜滤去杂质。于棕色瓶中4。保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性， 配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可

15、能含有 少量的未聚合成份。10%(W/V) AP (过硫酸铵)组份浓度 10%(W/V)AP配制量 10 ml配制方法1.称取1g AP。加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。贮存于4C。注意：10%过硫酸铉溶液在4。0保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作 用。5xTris-Glyclne Buffer(SDS电泳缓冲液)组份浓度 0.125 M Tris，1.25 M Glyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Tris15.1 gGlyclne94 gSDS5.0 g加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。加去离子水将溶液

16、定容至1 L后，室温保存。2xSDS Loading Buffer组份浓度100 mMTris-HCl(pH6.8)100 mM。-巯基乙醇(2-ME)4%(W/V)SDS0.2%(W/V)漠酚兰(BPB)20%(V/V)甘油配制量 5 ml配制方法1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。0.25 M Tris-HCl(pH6.8)0.25 ml。-巯基乙醇0.5 mlSDS0.2 g甘油1 ml1%漠酚兰0.1 ml，加去离子水溶解后定容至5 ml。小份(500 m/份)分装后，于室温保存。4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右5xSDSLoading

17、Buffer组份浓度250 mMTris-HCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)2-ME配制量 5 ml配制方法1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。1 M Tris-HCl(pH6.8)1.25 mlSDS0.5 gBPB25 mg甘油2.5 ml加去离子水溶解后定容至5 ml。小份(500 m/份)分装后，于室温保存。使用前将25皿的2-ME加到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。考马斯亮蓝R-250染色液组份浓度0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250，25%(V/V)异丙醇，1

18、0%(V/V)冰醋酸配制量 1 L配制方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%(V/V) Ethano ic acid，30%(V/V)乙醇配制量 1 L配制方法1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。Ethano ic acid100 ml乙醇300 mldH2O600 ml2.充分混合后使用。凝胶固定液(SDS银氨染色用)组份浓度 50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid配制量 100 ml配制方法1.量取下列试剂，加入100200 ml的试剂瓶