食物中亚硝酸盐的测定

1、食物中亚硝酸盐的测定目前国内外测定亚硝酸盐的标准方法仍为重氮偶合比色法，即在 稀磷酸介质中，NO2-与对氨基苯酰氨（或对氨基苯磺酸）反应生成重氨 盐，再与N.（卜萘基）一乙二胺（或旺一萘氨）偶联生成红色染料，用 光度法进行测定，进而求出N0 2-的量。该法虽然有较高的灵敏度和选 择性，但是所需试剂和显色反应稳定性较差，试剂本身都是毒性大的 致癌物质，同时cu2+、Fe3+等对测定都有干扰，给测定带来不便。所 以人们一直试图对此进行改进，或建立新的方法体系来测定亚硝酸盐 的含量。近年来，国内外己报道的测定N0 2-的方法很多，有分光光度法、 发光分析法、催化动力学法、电化学分析法、色谱分析法等，

2、本文对 这些方法做分类介绍。其中国标法有：分光光度法分光光度法是N0 2-分析中应用最广泛的方法。光度分析能保持长 盛不衰的原因很多，主要概括为5个方面：相对于其它痕量分析方 法而言，光度法的精密度和准确度比较高，所以在标样定值及标准方 法中被广泛采用；光度法比较成熟，可以测定的元素（包括离子） 很多，比较灵活；光度法有一定的灵敏度和选择性，比较简单、快 速；光度法不需要大型的仪器设备，不需要过多的投资，特别适合 我国的国情；光度法历史悠久，普及广泛，有一支庞大的技术队伍 和雄厚的技术力量。N0 2-在紫外区有较强的特征吸收，因而可以直接 用紫外光度法测定N02-，也有用碱性品红紫外光度法测定

3、N0 2-的报道。， 但灵敏度较低（ =1 . 2x104），干扰严重。但紫外光度法和化学计量 学方法联用，在很大程度上解决了谱图重叠、干扰严重等问题，实现 了多组分不分离同时测定。可见光分光光度法测定N0-；大多基于N0 2- 在较低温度下的重氮.偶合反应和亚硝化反应，在水样及食品分析中 有重要的应用（表1-1）。但这些方法大多要使用有毒有害试剂，不仅 危及操作者的身心健康，也会造成二次污染，因而有一定局限性。訾 言勤等采用Uv-Vis、FT。IR、NMR及电化学等方法对含伯胺结构的碱 性染料与N0 2-反应机理进行了系统研究，对于完善和应用该类染料以 及建立测定N0 2-的UV-vis方法

4、和电化学方法具有重要的指导意义。一 般的光度分析都需要一定的处理转化时间，很难应用于现场应急分析 和快速分析，近年来相继有亚硝酸根的现场快速半定量分析的报道。 自从1987年Motes等报道亚硝酸根的催化动力学测定方法以来，以检 测活化剂为主的动力学光度法颇多，已有综述l引，在R此不赘述。也 有采用其他显色体系、流动注射光度法、萃取光度法、固相萃取光度 法、固相光度法测定N0 2-的报道.值得一提的是，Yord印ov等首次提 出以电子顺磁共振谱法测定食品及水样中N02-和N03-，方法快速、准确。表1基于重氮一偶合反应和亚硝化反应测定NO,-实例样品显色体系酸度1/niTJi线性益屉文献水样N

5、O.对硝基章跖己酸丙酮530.2.7&-24 邮0mlB水样正交实验对硝基苯碰酸H酸强酸性520,7,50,02 5-ng/ml食品N02-磺跋嗟哩-NEDD酸性546,4.61O.054-0.Sl6pg/mL水样波长叠加D.2mol/L HC1560.2940-20邮5抵11639,3,23水样NO2PNA-MOX*CTMA B稀KI洌，4.72陌第ml水样NOz-RKIGO稀HC1526a0.02-0.4 g/mlB水样NOj-AR稀HC1525*23,00,025-0,5 岫1114H酸:l，8氨基萘酚一 3，6-磺酸；NEDD :盐酸萘乙二胺；VBB :维多利亚蓝B；PNA :对硝基苯

6、胺：MOX : 2 一甲基一 8 一羟基喹琳；Rh3GO :罗丹明 3GO ； AR :吖啶红。色谱分析法色谱分析法具有良好的分离能力和较高的灵敏度，比较适合于分 离分析成分比较复杂样品。而环境水样中一般含有F-，Cl-，Br-，N02-，N0，S032。，S04) , P043。等阴离子，自1975年离子色谱(IC)问世 以来，IC就逐渐取代了其他阴离子测定方法，成为阴离子测定的首 选方法，但一般需要配备价格昂贵的高泵。Havel等运用人工神经网 络(ANN)预测亚硝酸根等阴离子的保留行为，于泓等详细总结了各种 类型的非抑制型电导检测离子交换色谱(IEC)中的淋洗液，这对于用 这些方法测定水

7、样中 F-，C1-，Br-，N02-，N03-，S032。，S04)，P043- 等阴离子的流动相选取及预处理过程具有重要的参考意义。表1-5列 出了部分IC法(包括IPC)测定N0 2-的应用实例。有关离子色谱法在食 品样品中无机阴离子分析的进展可参阅文献H11。毛细管电泳(CE)是 20世纪80年代初期迅速发展起来的一种新型分离分析技术，具有分 离效率高、分析速度快、样品及试剂用量少等优点，利用CE分析水 样中的N0 2的文献及食品中N0 2-的文献都有报道，另外，也有采用衍 生化气相色谱(GC)法测定水样中的N02-静电离子色谱(EIC)和毛细管 电色谱(CEC)测定亚硝酸根的报道，限于

8、篇幅，在此不一一例举。表2离子色谱法测定N0 2-实例桦品色谱条件检测器文献水祥IC, DionerAS4A-SCP 柱后 Cc ( IV ) 生化斐光松测45盘品ICj YSAE8022A-9* 4mmcl/L NajCOj+lnunol/L NaHOOj电寻检测m水样RP-IPC, ODSCJr 甲醇-水 C20： 80), l.Offll/mm紫外-210mn研水样IC, Iianer Icm-Pac AS16, NaOH 梯度洗脱，I.Oml/mitix 室温电导检测4SIG离子色谱7 RF-1PC：反相离子肘色谱法,工业及其他检测方法有：1.发光分析法发光分析法(包括荧光法，化学发光

9、法和生物发光法)具有选择性 好，灵敏度高，抗干扰能力强等优点。特别是化学发光法和生物发光 法，由于不需要外来光源，有效地避免了瑞利散射和拉曼散射等噪音， 因而光电倍增管在高压下工作时具有比荧光更高的信噪比，且仪器简 单易得，分析速度快。该方法的优点是灵敏度高、选择性强、试样用 量少，且不受检测液本身颜色和浑浊的干扰，也不受样品稀释度的影 响；但许多物质不能直接发)极为敏感，因而应用不及紫外。可见分 光光度法。文献检索表明，近年来利用发光分析测定N0 2-的研究很活 跃，表1-2列出了部分利用发光分析测定N0 2-的实例，而生物发光法 测定NO2-未见诸报道。表3发光分析法测定N02 实例样品发

10、光体系Zex/leCnin)酸度城性范围/灵敏度文献食品N02-KBrOi-Rh6G催化荧光法42CV550稀磷酸6l30pg/L118水样二霸基斐】号二横酸527/58S稀磷酸0.27-7.3 邮19水样N6-FTT熨光法4 觑S18pH 7,6。E0D皿20水样二乙酸苯胺荧光法364,4820.0121水捧Ce IV)学发光法OJmol/LHsSOj0r1-40,0pino/L22水样HiOb鲁米诺-NOz海t学发光法弱酸性20-1000 pmol/L233食品化学发光阵列(KL00|Jg/L网Rh6G :罗丹明6G ； IB-CD : p 一环糊精；f. 1陌：异硫氤酸荧光 素；RhB

11、:罗丹明B。2.催化动力学法在所有的动力学分析法测定N0 2-的体系中，以漠酸盐作氧化剂的体系研究最多。表1-3列出了部分利用动力学分析法测定N02-的实例。表4亚硝酸根的动力学分析方法指示反应测定范围检测限应用文献BrO+HY 眼檀04pg/l0 ml乳粉25JBtU.+Jl雀石绿26BrOj-胭脂虻。.58,0|1/2如【K 8句时叽水27BtO3+甲基原2. 5x lOEOxI俨响此水纳0rO+PGR0.003L000jig/ml水网BrOf+亚甲蓝0颂隔/L水3。BrOj 靛红2SO ng/ml1.36 nml水31过避暖钠卜荔枝红0J225 n/ml水32指示物多为染料类有机物。检测

12、方法主要为光度法、荧光法，也 有用电化学方法检测的。常用的指示物根据结构可分：三苯甲烷碱 性染料。醌亚胺娄染料。三苯甲烷酸性染料。其它类试剂主要有 偶氮类试剂。除KBr0 3氧化有机试的指示反应外，其它类的指示反应 研究较少。常见的有H2O2作氧化剂的体系，K104作氧化剂的体系等。 从表l 一 3可以看出，虽然动力学分析研究较早，但用于N0 2-的测定是 在80年代才发展起来的。近年来，文献报道越来越多，发展迅速。这 些方法几乎都是根据N0 2-对某些氧化还原反应的催化作用进行的。电化学分析法与光度法相比较，电化学法有自身的特点：仪器简单，操作简便， 分析速度快.近年来，采用极谱法测定N0

13、2-；已经有不少报道，但由 于其还原电位太低，直接测定有一定的困难，故大多为间接法，主要 有3类：利用N0 2-与变价金属离子形成配合物，催化变价金属离子 电还原产生的极谱催化波来直接测定N0 2-；利用N0 2-与某些有机物 形成电活性的亚硝基化合物来间接测定N0 2-；利用N0 2-与某些有机 物形成重氮化合物或偶氮化合物来间接测定N0 2-，且随着化学修饰电 极(CME)的出现更是拓宽了电化学法的分析对象，其选择性、重现性 也优于普通电极。表1-4列出了部分极谱法测定N0 2-实例。表5极谱法测定N0 2-样品极谱体系】)酸度峰电位2)城性苑围文献,水样N0-碰肢重氤盐-N, M二甲基戢技pH 10.00.0006-0.07mg/L331水样NOj磺胺重氤盐-XO二阶导数pH 1。,1-0,650.32心 mg/L341水样NOz MV亚硝化2.5次微分ImnLT HC1OJS2-20 pg/L35人样NCV-KB1C3璃冠红稀 H2SO4#一350.6-14.0 ng/ml国水洋NOj-NHSCN-HjSO稀H疝6-0.470J-50pnoL/L【37水样NOj-HA-OXpH 9.0-0.630.0M,5 阐