生物技术制药

1、2018年生物技术制药名词解释（10个）.生物技术药物（biotechnology durg biotech dur :指采用DNAB组技术或 其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物，主要是重组蛋白和核算 类药物。. Monoclnal antibody:单克隆抗体，是体内或培养的一个识别单一抗原表位的 B细胞克隆所分泌的针对一种抗原决定簇的免疫球蛋白，简称单抗。. Fermentation engineer发酵工程，将微生物、生物化学和化学工程学的基本 原理有机结合，利用微生物的特定现状，通过现代工程技术在生物反应器中生产 工业原料与工业产品并提供服务的一种技术体系，又称微生物工程

2、。.感受态细胞（competent cell）:理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容 纳外源DNA勺生理状态。.全人抗体转基因动物：指将人类抗体基因通过转基因技术，将人类编码抗体的 基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达 到抗体全人源化的目的。.模拟酶：根据酶的作用原理，用各种方法人为制造的具有酶性质的催化剂。.Abzyme：抗体酶，又称催化抗体，是一类免疫系统产生的、具有催化活性的 抗体，具有抗体的高度选择性和酶的高度催化能力。.Affinity chromatography：亲和层析，利用固定化配基与目的的蛋白之间特异 的生物亲和作用进行吸附分离的技术。.

3、治疗性疫苗：在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异 性的免疫应答，达到治疗或防止疾病恶化的疫苗。.Adjuvant:佐剂，又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性，但同抗原一 起或预先注射到机体内能增强免疫原性（见抗原）或改变免疫反应类型。. Genetically engineered antibodies gAb,基因工程抗体，又称重组抗体、工 程抗体，指利用重组DN破蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加 工改造和重新装配，经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。.DNA连接酶：催化DN端段中两个相邻的3-OH末端和另一 DNAS的5-P末 端生成3 , 5-磷酸二

4、酯键，从而使DNAt段或单链断裂形成的缺口连接起来。.动物细胞工程制药：. Subunit Vaccine：亚单位疫苗，利用微生物的某种表面结构（抗原）制成能 诱发机体产生抗体的疫苗。.喷射式反应器（Projectional reactor , PR :利用高压蒸汽的喷射作用， 实现酶与底物的混合，进行高温短时催化反应的一种反应器。. Pegylation：蛋白质的PEG窗饰，即PEGft,是将活化的PEG过化学方法以 共价键偶联到蛋白质的技术。.贴壁细胞（adherent cells ;这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面， 细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，

5、繁殖。. Gene therapy基因治疗，将外源正常的或者有治疗有治疗作用的基因导入靶 细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的的治疗方法。.表达载体（Expression vectors1表达载体含强启动子，外源基因在启动子控 制下转录，并表达外源蛋白。.酶的固定化（enzyme immobilization ）：采用各种方法将酶与水不溶性的 载体结合，制备固定化酶的过程。问答题（7个）.基因工程制药过程中，获取目的基因常用的方法有哪些？化学合成法：需要知道目的基因的核甘酸序列或其编码产物的氨基酸残基序列PCFfe:可在体外特异性的扩增目的基因的片段，引入合适的酶切位点

6、和标签 结构等，但PC林外扩增常容易带入突变，在实现克隆后需要进行测序分析。cDNA文库法：包含着特定组织和细胞全部 mRNAS息.的cDNA隆集，便于 克 隆和大量扩增，可以从中筛选到所需目的基因，并用于表达，但不能研究基因组 的结构。基因组DNAt库法：某一特定生物体全部基因组 DNAff列的随机克隆群体的集 合，以DNAt段的形式贮存了所有基因组 DNAJ息，可以用于研究基因组结构功.动物细胞生物反应器的主要操作模式有哪些？分批式操作；补料-分批操作；半连续式操作；灌流式操作；连续式 操作.干扰素在使用过程中出现的问题提及选择 PE磁饰剂要考虑的因素。存在问题：半衰期较短，需要隔日注射的

7、问题，给患者用药带来了不便；副反应：发热、流感样症状、骨髓抑制、精神神经系统；长期使用易产生耐药性。选才? PEG修饰剂要考虑的因素PEG饰剂的相对分子质量（Mr）大小，不同的分子大小引起的药物分布不同。与干扰素发生偶合反应的活性和选择性，以及修饰后形成的化学键的稳定性。修饰位点的选择和工艺优化.物理吸附法和共价结合的概念，试比较两种酶固定方法的优缺点。物理吸附法定义：利用酶和载体间的非特异性物理吸附作用将酶固定在载体表面，这些作用包括范德华力、氢键、疏水作用、静电作用等。优点：条件温和，工艺简便、载体选择性范围大，对酶催化活性影响小缺点：酶与载体之间结合力弱，不适合的 PH温度、离子强度等条

8、件都易使酶从载体脱弱并污染催化反应物。共价结合法定义：酶以共价结合于载体表面的固定方法，即将酶分子上非活性部分功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。优点：结合比较牢固，有良好的稳定性及重复使用性。缺点：反应剧烈，固化酶活性损失较严重。.微生物发酵生产药物种类有哪些？抗生素类：青霉素氨基酸类：单个氨基酸制剂、复方氨基酸制剂核甘酸类：AMP ATP辅酶A维生素：VC、%2和12、W番体类激素：多糖类：透明质酸、右旋糖酊治疗酶及酶抑制剂：蛋白酶、脂肪酶.简述减毒疫苗、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗的异同点。减毒疫苗：是用减毒或无毒力的活病原微生物制成，除诱导机体产生体液免疫外， 还可产生细胞免疫

9、。接种次数少、反应小、成本低、免疫效果好。但其稳定性差, 有毒力返祖现象，污染环境，免疫缺陷者不适用，灭活疫苗：又称死疫苗，是选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，有理 化方法灭活制成的。死疫苗主要诱导特异抗体的产生，即基本上只会产生体液免 疫。常需多次接种，接种计量大，免疫效果有一定局限性，维持时间短。有较强 的免疫原性和安全性，稳定性好。基因工程亚单位疫苗：将外源性病原体特异抗原编码基因转入非致病性微生物内 表达的基因产物。效果好、成本低、易于保存、稳定性好、可操作性强，但有毒 力返祖现象，污染环境，免疫缺陷者不适用.简述 Chimeric Antigen Receptor T (CA

10、R-T 细胞免疫疗法的基本原理。CAR-T嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，利用病人自身的免疫细胞来消除癌细胞 的一种治疗方法。即，从病人外周血中分离淋巴细胞T细胞，通过基因载体将月中瘤抗原特异性CARS因转导入T细胞，生成CAR-T细胞，筛选能够特异性识别月中瘤 细胞的T细胞，并在体外进行增殖培养。当T细胞数量达到一定数值后，回输到 患者的体内，让其发挥特异的抗癌治癌功能。.简述基因工程制药的基本流程目的基因的获得；表达载体的选择；目的基因与载体的连接；重组 DNA 转入受体细胞；重组子的筛选与鉴定；工程菌株发酵表达重组蛋白； 重组 蛋白产品的纯化；重组蛋白制剂的生产。.简述原核细胞表达体系的特点

11、优点：宿主菌遗传背景清楚，商品化菌种齐全，方便购买;原核细胞操作简便、繁殖快和周期短；大规模生产成本低，产量较高；下游纯化工艺简单，易于控制，生产效率高。缺点：不能糖基化，无修饰。.培养动物细胞时需要关注哪些培养条件？培养温度：37 c 0.5,过高细胞退变甚至死亡，过低降低代谢和生产能力。PH 7.2-7.4 ,过高或过低对细胞生长不利，甚至会引起细胞死亡。通氧量：不同的细胞对氧和CO的比例要求不完全一样。防止污染：防止化学物质、微生物、生物活性物质污染，对细胞产生损伤。基本营养物质：无机盐、微量元素、碳源、氮源、维生素、小牛血清或胎牛血 清。渗透压：小鼠细胞：320mOsm/L大多数细胞：

12、290-320mOsm/L.简述蛋白质药物化学修饰的概念、意义、修饰后蛋白质性能改善的原因。概念：凡是通过基因引入或去除而使蛋白质一级结构发生改变的过程意义：蛋白质药物化学修饰能赋予蛋白质药物多种优良性能，扩大应用范围。如:循环半衰期延长；免疫原性降低或消失，毒副作用减少；物理、化学和生 物稳定性增强。原因：相对分子量T,肾小球滤过作用降解速度半衰期T；修饰剂屏蔽作用，不易受各种蛋白酶攻击，降解速度稳定性T,半衰期T；修饰剂能掩盖蛋白质表面的抗原决定簇， 使蛋白质不能与各种细胞表面受体， 不被机体的免疫系统识别，避免了相应抗体的产生，降低蛋白质的免疫原性； 修饰剂与蛋白质偶联后能 赋予其优良的

13、理化性质，因而改善蛋白质的生物分布 和溶解性能。.试述单克隆抗体技术的基本原理及基本过程。原理：基于动物细胞融合技术，实现骨髓瘤细胞和B细胞的融合，形成的杂交瘤 细胞既有骨髓瘤细胞的无线增值特性，又具有免疫B细胞的合成和分泌特异性抗 体的能力。基本过程：制备抗原、免疫动物、B细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞、筛 选杂交瘤细胞、筛选产生目标单抗的杂交瘤细胞（阳性细胞）、阳性细胞的克隆 化、单抗的纯化及鉴定、体外大规模培养或动物腹腔培养阳性细胞株产生单抗。.鸡卵黏蛋白的相对分子量大约为 28kD,pI在3.9-4.5 之间，在50% 丙酮和10汇氯乙酸溶液中均匀不发生沉淀，在80c条件下理化性质

14、 保持稳定。在10% PH3.5的三氯乙酸中鸡卵黏蛋白保持良好的溶解 度，而与其共存的主要杂志鸡卵清蛋白质绝大部分被沉淀出来。根据以上信息，设计出从鸡蛋清中分离纯化鸡卵黏蛋白质的工艺线路（纯度大于90%。试剂等未知信息可自行假设，要求工艺大致合理，重 点说明每一步设计的原理和目的。将鸡蛋清搅拌均匀，过滤，去除脐带和蛋壳加10犷氯乙酸，用NaOHf口 HCL调节PH=3.5,离心，取上清液。（鸡卵黏蛋 白在10% PH3.5的三氯乙酸中鸡卵黏蛋白保持良好的溶解度，而与其共存的主 要杂志鸡卵清蛋白质绝大部分被沉淀出来。）过滤，去除上清液中脂类物质及其他不溶物 ；加3倍体积的50殉酮，萃取静止，取上

15、清液。（鸡卵黏蛋白在50殉酮和10% 三氯乙酸溶液中均匀不发生沉淀，在 80c条件下理化性质保持稳定，应用萃取 的原理将鸡卵黏蛋白转移到丙酮中，进一步提纯）使用旋转蒸发仪，蒸干除去丙酮，收集鸡卵黏蛋白。（丙酮沸点低，易挥发，鸡卵黏蛋白在80c条件下理化性质保持稳定）.现代酶工程的研究内容酶的生产：选育优良菌株、构建基因工程菌株、优化发酵条件提高酶的产量。酶的分离纯化：是当前生物技术”后处理工艺”的核心酶和细胞的固定化：全面提高酶的工业价值酶的修饰及分子改造：提高酶的应用价值非水相催化：提高催化活性酶传感器：又称酶电极，由感受器（固定化酶）和换能器（离子选择性电极） 做组成的一种分析装置，可用于测定浓度。酶反应器：抗体酶、人工酶和模拟酶： 结合抗体的高度专一性和酶的高效催化能力