色谱分离条件的选择

1、2-3 色谱分离条件的选择分离度(Resolution, R) R是衡量色谱柱分离效果的指标，它表示相邻二组分在色谱中的分离情况。也称分辨度或分辨率。其定义为：用此式可直接从色谱流出曲线上求出分离度 R。 两峰间距离越大，即tR越大，或两峰越窄，R值就越大，即分离的越好。1 分离效果差，柱效低，选择性（ ）低； 完全分离，柱效高，峰窄，选择性（ ）低 ；完全分离，选择性（ ）增加，柱效低，峰宽；完全分离，柱效高，选择性（）好；色谱分离中的四种典型情况2高斯峰，底宽度4 ，即Y= 4 所以：当R1时：tR4，称4分离，此时二峰只有2重叠，98分离；当 R1.5时：tR6，称6分离，此时二峰基本完

2、全分离，重叠小于1。不对称峰：3R=1.5R=0.75R=1.0响应信号保留时间 t, min4色谱分离基本方程式:R与柱效、柱容量和柱选择性之间的关系：5柱效相 柱容量相 选择性相6最佳R值的确定R与n的关系：在L一定时，H小，R大。n影响峰宽度，增加n，峰变窄，柱效高；增大n：增大L、降低H，才能增大R。7R与的关系： 影响峰间距离，增大，两峰间距变大，分离的好。（见表2-3，P19） 当从1.1改变为1.2时，R提高一倍。8由分离度计算式可得：9例如：要求R=1时，1.25可见，把增加至1.5时，不改变柱子，分离度R就可以增加到1.5以上，达到完全分离。10计算： 1.15，R=1.5，

3、Hef=0.1cm，L=?11R与k的关系：k影响峰位k增加，tR大，出峰晚，但k不大于10。最佳k范围：1k10，可得到大的R。降低柱温能增加k值。12分离度的最佳化 在色谱分析中，希望在较短时间内获得较高的分离度。 究竟需要多大的分离度： 定性分析时：R=0.8（需测tR ） 定量分析时：R=1.0（测峰高时） R=1.25（测峰面积时） 13分离操作条件的选择1、色谱柱的选择固定相选择：选择原则： 当样品的沸点差别为主要矛盾时，选非极性固定液； 当样品的极性差别是主要矛盾时，选极性固定液。14最高使用温度 高于柱温，一般分析高沸点化合物时，要选择高温固定液。载体的选择 高沸点样品用比表面

4、小的载体，低固定液配比； 低沸点样品用比表面大的载体，高固定液配比；柱长选择： 填充柱：24m 毛细管柱：20100m152、柱温的选择 柱温对R影响甚大，是条件选择的关键。 选择的基本原则： 在使最难分离的组分有尽可能好的分离度的前提下，尽可能采取较低柱温，但以保留时间适宜，峰不拖尾为好。因为T柱温低，K大，R增加，减少固定液流失，柱寿命长；但是Cl增加，峰扩张。16柱温与样品沸点间的关系：高沸点混合物（300400），采取13固定液配比，柱温比沸点低100150；沸点300的样品，可用525固定液配比，柱温比沸点低50；宽沸点样品应采取程序升温 在程序升温过程中，低温时，沸点低的组分被分离

5、，高沸点组分则不被分离；高温时，则相反，所以样品按程序升温依次被分离。（参见P23，图2-8）17恒温：45oC程序升温：30180oC恒温：145oC温度低，分离效果较好，但分析时间长程序升温，分离效果好，且分析时间短温度高，分析时间短，但分离效果差程序升温与恒温对分离的影响比较183、载气的选择 低线速时，用N2（重载气，减少纵向扩散）；高线速时，用H2。 柱较长时，柱压大，用H2 ，因为H2粘度小，压力降低。 H2最佳线速度：1520cm/s N2最佳线速度：1012cm/s线速度u=L/tM194、其它条件选择气化室温度： 以样品沸点或稍高于沸点的温度，保证迅速完全气化，但不要超过样品沸点50，防止分解.检测室温度： 高于柱温30。 温度太低，流出物冷凝，污染检测器；温