病原微生物试验室备案-艾滋病毒生物危害评价

1、艾滋病毒的生物危害评估一、危害程度分类（一）分类等级人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原 微生物。（二）不同实验操作生物安全实验室级别要求1、HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫 学检测应在符合II级生物安全实验室（BSL-2 ）要求的艾滋病检测实验 室中进行。2、HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其它需 要应用活病毒的研究工作，应在田级生物安全实验室（BSL-3 ）中进行。3、HIV核酸提取和检测均应在符合II级生物安全实验室（BSL-2 ） 要求的艾滋病检测实验室中进行。4、HIV病毒株应保存在符合m级生物安全实验室（BSL-

2、3 ）要求的 艾滋病实验室；HIV阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、 核酸提取物应保存在符合BSL-2要求的艾滋病实验室。二、HIV背景资料（一）、形态结构人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈球形。病毒外膜是磷脂 双分子层，来自宿主细胞，并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41。向内是由 蛋白p17形成的球形基质（Matrix ）,以及蛋白p24形成的半锥形衣壳 （Capsid ）,衣壳在电镜下呈高电子密度。衣壳内含有病毒的RNA基因 组、酶以及其他来自宿主细胞的成分。（二）、培养特性将病人自身外周或骨髓中淋巴细胞经PHA刺激4872小时作体外 培养（培养液中加IL2 ） 12周

3、后，病毒增殖可释放至细胞外，并使细 胞融合成多核巨细胞，最后细胞破溃死亡。亦可用传代淋巴细胞系如HT-H9、Molt-4 细胞作分离及传代。对黑猩猩或长臂猿予以HIV感染后，连续8个月在血液和淋巴液中 可持续分离到HIV。（三）、在外界环境的稳定性HIV对热敏感。56c 30分失去活性，但在室温保存7天，仍保持活 性。不加稳定剂病毒-70 C冰冻失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血 清中-70 C冰冻3个月仍保持活性。对消毒剂和去污剂亦敏感，0.2%次 氯酸钠0.1%漂白粉，70%乙醇，35%异丙醇、50%乙醴、0.3%H2O20.5% 来苏尔处理5能灭活病毒，1%NP-40和0.5%tri

4、ton-X-100 能灭活病毒而 保留抗原性。对紫外线、丫射线有较强抵抗力。（四）、传染源和传播途径HIV感染者是传染源，曾从血液、精液、阴道分泌液、眼泪、乳汁 等分离得HIV。传播途径有：.性传播：通过男性同性恋之间及异性间的性接触感染。单次暴 露的传染概率为0.67% 0生一次没有保护的性交，在男性同性恋中的传 染HIV 的概率约为0.5-3%。而在异性性接触中，男性传给女性的概率 是0.1-0.2% ,女性传给男性的概率是0.03-0.1%.血液传播：接受血液或血制品：主要是指接受污染有HIV的血 液或血制品，单次暴露的传染概率介于90-100%。通过输血、血液制品 或没有消毒好的注射器

5、传播，静脉嗜毒者共用不经消毒的注射器和针头 造成严重感染，据我国云南边境静脉嗜毒者感染率达60% o不慎被污染 HIV的器具如针头刺伤皮肤，或黏膜直接接触到含有HIV的体液，单次 暴露的传染概率为0.3%-0.5%。.母婴传播：包括经胎盘、产道和哺乳方式传播。母婴传播的几 率约为30% o（五）、宿主范围和致病机制1、宿主范围：艾滋病病毒进入人体后，首先遭到巨噬细胞的吞噬， 但艾滋病病毒很快改变了巨噬细胞内某些部位的酸性环境，创造了适合 其生存的条件，在潜伏感染阶段，HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中， 免疫会把H I V忽略不被免疫系统识别，自身免疫无法清除。人体感染HIV后，其潜伏期一般3

6、5年或更长至8年。2、致病机制：其机制尚未完全清楚。有可能是HIV进入人体后， 选择性的侵犯带有CD4分子的，主要有T4淋巴细胞、单核巨噬细胞、 树突状细胞等。造成T细胞,B细胞，自然杀伤细胞，单核细胞，巨噬细胞的 数量和功能均受到影响，使细胞介导免疫功能失去作用。三、实验室实验活动危险性及预防措施（一）、实验活动预防1、实验室针对HIV的所有活动均应在生物安全柜内进行。2、实验操作时应穿合适防护服（白大衣、隔离衣或一次性工作服）、 戴手套和口罩、穿实验室专用的工作鞋。如接触物的传染性大、应戴双 层手套；含有HIV的液体（样品或病毒培养液）有可能喷溅时，应戴防 护眼镜、穿防水（如塑料）围裙。3

7、、工作完毕，先脱去手套，再脱去防护服，用肥皂和流动水洗手。 穿过的污染的防护服应及时放入污物袋中，消毒后方可洗涤或废弃。4、操作过程中，如发现防护服被污染应立即更换，如手套破损， 应立即丢弃、洗手并换上新手套。不能用戴手套的手触摸暴露的皮肤、 口唇、眼睛、耳朵和头发等。5、禁止使用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验的所有液体。6、应尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防 刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并 应对用过的物品进行消毒。7、 应将用过的锐器直接放入耐穿、防渗漏的利器盒，用过的针头 应直接放入坚固的容器内，消毒后废弃8、禁止将使用后的一次性针

8、头重新套上针头套。禁止用手直接接 触使用过的针头、刀片等利器。（二）、职业暴露的评估及暴露后预防1、轻度暴露：指皮肤被实心针刺伤或表皮伤，或粘膜接触少量（几滴）感染性液体重度暴露：指皮肤被空心针刺伤、深部刺伤，被可见到有血液 的器械刺伤或器械曾放置于病人的动脉和静脉。粘膜接触大量感染性液 体（大量血液喷溅）。发生职业暴露以后，可以服用抗病毒药物，进行暴露后预防 （三）、实验室的清洁和消毒本实验室于每次实验活动开始前均准备有0.2%和5%的次氯酸溶液。工作完毕应对工作台面消毒，用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用 消毒液清洗后要干燥20min以上；操作过程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。如

9、有大量高浓 度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸钠溶液浸泡，然后 戴上手套擦净。（四）、污染物处理本实验室配备有密封防漏容器及高压蒸汽消毒锅。艾滋病实验室产生的所有废弃物，应置于专用的密封防漏容器中， 安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。（五）、实验室实验活动危害评估本实验室只针对HIV抗体检测的操作，该项实验活动可能存在潜在 危险。实验操作实施过程中在无控制措施情况下可能产生高危害度。但 经对危害发生的可能性分析，认为极少发生实验危害；但该危害能造成 高度严重后果。本实验室在采取一级及二级屏障的预防控制措施后其残 留风险可降至最低 四、工作人员素质本实验室共有技术人员5名，其中申请进入BSL-2实验室3名。5 名技术人员均为检验专业毕业并从事临床检验工作多年。2名曾经从事 细菌、真菌等微生物学实验，1名无微生物实验室活动经历。所有技术 人员均接受过病原微生物生物安全培训I,学习过生物安全手册并签署知 情同意书，经体检无慢性病及其他传染性疾病，健康状态良好。 五、评估结论1、本实验室对可能发生的感染可以有效控制。2、实验活动中采取一级及二级屏障预防，生物安全柜、洗眼器等设