微生物检验作业指导书

1、文件贞他第1页共6页文件名称微生物检验作业指导书文件版本A0文件编号发行日期2016-11微生物检验作业指导书本程序适用于：编辑： 审核： 批准：1.目的文件贞他第2页共6页文件名称微生物检验作业指导书文件版本A0文件编号发行日期2016-11规范化妆品菌落总数、霉菌 醉母菌检验方法。2.适用范围适用于我司的微生物检验。3.引用标准化妆品安全技术规范2015年版中的微生物检验方法总则、菌落总数检验方法、霉 菌和酵母菌检验方法。.仪器及所用器皿1高压蒸汽灭菌锅。2 电子称。3酒精灯。4移液枪。5恒温培养箱。6带玻璃珠的三角瓶。7灭菌试管。8灭菌平皿：直径9cmi9移液枪头。0灭菌称量勺。其中4.

2、 6至4. 10项，均需用121c高压蒸汽灭菌20min。.试剂的制备生理盐水的制备氯化钠8.5g,纯化水1000ml,溶解后分装到加玻璃珠的锥形瓶内（或试管内）。每瓶90ml （试管9ml） ,121c （0.1-0.15 mpa ）高压灭菌20min。冷却后，在瓶外按顺 序注明与样品一致的编号。卵磷脂.吐温80-营养琼脂培养基的制备称取卵磷脂，吐温80-营养琼脂固体粉末51g,加入去离子水1000ml,搅拌加热煮沸 至完全溶解后分装三角瓶，121C （0.1-0.15 mp3高压灭菌20min,冷却至45 C -50 C 待用。孟加拉红培养基的制备文件名称文件编号微生物检验作业指导书第3页

3、共6页文件版本A0发行日期2016-11文件页码称取孟加拉红培养基固体粉末 31.6g,加入去离子水1000ml,搅拌加热煮沸至完全 溶解后分装三角瓶，121 C (0.1-0.15 mpa )高压灭菌20min,冷却至45C-50 c待用。 5.4灭菌液体石蜡的制备用三角瓶分装化学纯液体石蜡,121 C (0.1-0.15 mpa )高压灭菌20min。灭菌吐温80的制备用三角瓶分装化学纯吐温 80, 121 C (0.1-0.15 mpa )高压灭菌20min。灭菌移液枪头将移液枪头置于带孔盒内，用牛皮包扎并用棉签并用121c (0.1-0.15 mp3高压灭菌20min。灭菌平皿用牛皮包

4、扎平皿,并用121c (0.1-0.15 mpa )高压灭菌20min,棉纯固定。.供检样品的制备制备原则处理样品时应严守无菌操作要求，需在无菌室或超净工作台进行操作，所用试 液需无菌，所用器皿(如三角瓶、吸管、试管、称量勺、平皿等)也均需灭菌 ，以免污 染样品，导致影响试验结果。要使样品充分混合均匀，样品加到稀释液中后，要充分振荡混匀，以免由于染菌 的不均匀分布而影响检出结果。尽量使样品完全溶解，在不影响微生物生长的条件下可适当加温、加某些对微生物生长不产生影响的助溶剂(如灭菌液体石蜡、灭菌吐温80)使样品溶解在稀释液中，其中的微生物分散到供检试液中。不同类型样品的检样制备方法液体样品?水溶

5、性的液体产品，用移液枪吸取 1ml液体于灭菌后的平皿中。? 油性7体(如精油、提取液等原料)：取样品10ml,先加5ml灭菌液体石蜡 混匀，再加10ml灭菌吐温80在40C-44 c水浴中振荡混合10min,最后加入75ml灭菌 生理盐水，在40C-44 c水浴中乳化，制成1:10的悬液。膏、霜、乳化剂半固体及固体状样品文件贞他第4页共6页文件名称微生物检验作业指导书文件版本A0文件编号发行日期2016-11? 亲水性的样品：取10g加到90ml灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，静置15min 用其上精液做1:10的稀释液。? 疏水性的样品：称取10g放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡研磨成

6、 粘稠状，再加10ml灭菌吐温80,研磨待溶解后加70ml灭菌生理盐水在40C-44 c水浴 中充分混合，制成1:10稀释液。.菌落总数测定操作前的准备工作微生物室消毒：检验前打开紫外线灯或者臭氧发生器对微生物检验室进行消毒 30min,关闭臭氧发生器或紫外线灯后1h方可入内。将编写好检验序号的待检样品进行登记后，经紫外线灯或臭氧消毒表面后方可 从传递窗，传送入微检室。操作人员进入微检室需穿上经紫外线灯消毒洁净服，戴好口罩、手套 ，用75% 酒精消毒手部。检验步骤消毒样品瓶盖（过三次火焰消毒），若为液体样品在开盖前将瓶内样品振荡混匀。打开盖子后将样品瓶口过三次火焰消毒。再称取10g样品加入90

7、ml生理盐水的三角瓶中制成1:10稀释液，并做好与样品一致的编号。不同类型产品稀释方法见6.2.1及 6.2.2 。用灭菌吸管吸取上述7.2.1中1:10检检液1ml,注入到对应稀释液编号一致的 灭菌平皿内，每个样品两个平皿。（若含菌量较高的样品可制1:10、1:1000的稀释液， 方法如：取1ml1:10检验液注入到含9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液 面）并充分混匀，制成1:100稀释检液。更换一支吸管，再从1:100稀释检7中取1ml 注入到含9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面）并充分混匀，制成1:1000 稀释检液。）将冷却至45C-50 c的卵磷脂，吐温80-培

8、养基注入7.2.2平皿内。每皿约15ml, 随即转动平皿，使平皿内的检样与培养基混匀。另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白实验。待培养基完全冷却至凝固后，翻转平皿，倒置放入36C 1 C恒温培养箱内培 养48小时。文件贞他第5页共6页文件名称微生物检验作业指导书文件版本A0文件编号发行日期2016-11菌落计数方法若菌落总数较少，可采用肉眼观察方式，若菌落总数较多，可用菌落计数器 计数。.霉菌及酵母菌总数的测定操作前准备工作见7.1检验步骤消毒样品瓶盖（过三次火焰消毒），若为液体样品在开盖前将瓶内样品振荡混匀。打开盖子后将样品瓶口过三次火焰消毒。再称取10g样品加入90ml生理盐水的三角瓶中

9、制成1:10稀释液，并做好与样品一致的编号。不同类型产品稀释方法见6.2.1及 6.2.2 。用灭菌吸管吸取上述7.2.1中1:10检检液1ml,注入到对应稀释液编号一致的 灭菌平皿内，每个样品两个平皿。（若含菌量较高的样品可制1:10、1:1000的稀释液， 方法如：取1ml1:10检验液注入到含9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液 面）并充分混匀，制成1:100稀释检液。更换一支吸管，再从1:100稀释检7中取1ml 注入到含9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面）并充分混匀，制成1:1000 稀释检液。）将冷却至45C-50c的孟加拉红培养基倾注入 8.2.2中装稀释检液的平皿内。 每皿约15ml,随即转动平皿，使平皿内的检样与培养基混匀。另倾注一个不加样品的灭 菌空平皿，作空白实验。待培养基完全冷却至凝固后，翻转平皿，倒置放入28。叵温培养