免疫实验课：实验七 ABO血型鉴定

1、实验七 ABO血型鉴定ABO血型系统ABO血型由红细胞抗原和血清抗体共同决定，依据红细胞膜上是否存在A、B抗原，血清中是否存在抗A、抗B抗体， ABO血型系统可分为A、B、AB、O四种血型。如下表。ABO血型分类血型红细胞表面抗原血清中抗体AA抗BBB抗AABA、BO抗A、抗B【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型鉴定的原理、操作方法和结果判断。【原理】用已知的gM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质反应中，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。【器材】1.小试管、记号笔、试管架2.载玻片3.离心机4.显微镜【

2、试剂】标准抗A、抗B血清（单克隆抗体）【标本】 抗凝静脉血或末梢血。玻片法：（1）标记玻片，标明抗A、抗B。（2）加标准抗血清。（3）加受检者全血。（4）不断轻轻转动玻片，是标准抗血清与受检者红细胞充分混匀。（5）观察结果：肉眼观察有无凝集（或溶血）。结果判断 正定型 反定型标准血清+受检者红细胞 受检者 受检者血清+分型红细胞 抗A 抗B 血型判断 A型红细胞 B型红细胞 O AB 备注：（凝集）； （不凝集）报告方式：正定型（玻片法）X型【注意事项】1.器材 所有器材必须清洁干燥、防止溶血。2.试剂 必须符合质量要求。3.标本 新鲜、无菌。4.标记 均应严格标记。5.加标准抗血清 （1）标

3、准血清从冰箱取出待其平衡至室温后再用，用毕尽快放回冰箱。（2）先加血清，再加红细胞悬液。（3）更换抗血清批号或对实验结果怀疑时应设阳性、阴性对照。 6.红细胞悬液 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当，使反应不明显 ，易判为阴性反应。7.离心 离心时间和速度要准确。8.观察凝集 （1）玻片法定型时，转动玻片动作要轻，注意防止悬液干涸。（2）玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。9.报告结果 标记、操作、判断结果、结果记录与报告应严格核对，避免笔误。Rh血型鉴定Rh血型系统Rh血型系统是红细胞血型中最复杂的一个系统，其重要性仅次于ABO血型系统。目前为止已发

4、现40余种Rh抗原，与人类最密切的有D、E、C、c、e五种，其中D抗原最先发现，且抗原性最强。临床上将含D抗原的红细胞称为Rh阳性，反之，不含D抗原的红细胞称为Rh阴性。【目的】掌握酶介质法Rh血型鉴定的原理和操作方法。 【原理】Rh抗体属IgG型不完全抗体，不能再盐水中与相应红细胞发生凝集。酶（木瓜酶或菠萝酶）可破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，从而减少红细胞间排斥力，使红细胞之间距离缩小；同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构，使某些抗原得以暴露，促使Rh血型系统的抗原与相应的不完全抗体gG抗体反应，从而使红细胞发生肉眼可见的凝集反应。注意本实验所用试剂与教科书上有所不同，为IgM型单

5、克隆抗体，因此玻片法操作步骤与上述ABO血型鉴定方法一样。以下主要练习试管法鉴定步骤。【注意事项】1.器材 干燥洁净，以防溶血。2.试剂 妥善保存，防止污染。若出现浑浊则不能使用。3.标本 新鲜、无污染。4.若玻片法呈阴性，应用试管法复查一次。交叉配血盐水介质配血法【目的】掌握盐水介质法交叉配血试验的基本原理和方法。【原理】天然gM类血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞（主侧）以及受血者红细胞与供血者血清（次侧）之间有无凝集现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的情况。【器材】1.小试管、试管架、记号笔2.吸管、吸耳球3.尖滴

6、管、胶吸头4.离心机5.显微镜【试剂】生理盐水【标本】受血者和供血者静脉血制备5%红细胞生理盐水悬液的方法：抗凝血离心或红细胞自然沉降后去使馆下层的红细胞2滴与小试管中，加生理盐水2ml，用吸管将红细胞与生理盐水充分混匀，避免剧烈震荡导致红细胞破碎溶血。2500r/min离心3min后弃去上清，重复洗涤3次。自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。【操作】1.准备受血者标本（1）分离血清，标记为PS。（2）制备受血者5%红细胞悬液，标记为PC。2.准备供血者标本（1）分离血清，标记为DS。（2）制备供血者5%红细胞悬液，标记为DC。3.交叉配血 （1）标记

7、试管 小试管2支，分别标明主、次。（2）加血清和红细胞悬液 在主侧配血管中分别加入PS和DC各1滴，再次侧配血管中分别加入DS和PC各1滴，混匀。（3）1000r/min离心1min。观察结果：肉眼观察有无凝集（或溶血）反应，再用低倍镜观察，判定阴性、阳性和阳性强度。1.凝集判断标准：若红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性；2.凝集强度判断，见表4-1（实验书61页）5.判断配血是否相合 ABO同型配血，主侧、次侧均无溶血及凝集，血型相合，可输血；主、次侧任何一管发生溶血或凝集，不可输血，应查找原因。异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血，可少量输血；如主侧、次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，需查找原因。 6.报告方式（1）受血者（ 型）血清+供血者（ 型）红细胞 凝集与否及强弱程度。（2）供血者（ 型）血清+受血者（ 型）红细胞 凝集与否及强弱程度。（3）受血者 与供血者配血是否相合。【注意事项】1.器材 器材要清洁、干燥、防止溶血。2.试剂 不能使用过期、无效试剂。3.标本 新鲜、无污染。4.配血 红细胞要用生理盐水洗涤干净，防止血浆中的血型物质中和抗体。红