血液标本中常见化脓性球菌的分离培养与鉴定

1、血液标本中常见化脓性球菌的分离培养与鉴定 一、实验目的 巩固人类常见化脓性球菌的基本知识 熟悉其分离培养与鉴定的基本方法二、实验要求 掌握血液标本中常见化脓性球菌的检验程序及检验方法。 熟悉血液标本中常见微生物的种类。 了解血液标本的采集要点及注意事项标本 模拟血培养标本实验方法及技术 无菌操作 细菌分离培养 细菌鉴定：染色、镜检、生化反应等 药物敏感试验 血液标本采集及血培养培养基的制备基础培养基（营养肉汤）牛肉膏 0.3% 蛋白胨 1% NaCl 0.5% pH 7.2-7.6营养琼脂：营养肉汤添加1.5%琼脂半固体培养基：营养肉汤添加0.25%琼脂 培养基制备的基本过程调配成分：加定量蒸

2、馏水， 准确称取各成分，混合溶解：沸水浴校正pH：用NaOH校正，高压灭菌后，下降0.1-0.2滤过澄清定容、分装：斜面（试管高度的1/3-1/4）灭菌：121 15-20min培养基的制备血液琼脂培养基的制备 将灭菌后的普通琼脂培养基，冷却至50左右，以无菌操作加入5-10%的脱纤维羊血，轻轻摇匀（避免产生气泡），分装无菌试管或平皿，凝固后，即成。培养基的制备血液标本采集基本原则即刻采集、在抗菌药物使用前在病人发热初期或发热高峰时采集采血量：成人5-10ml、儿童3-5ml、婴儿1-2ml 根据不同的人、不同的病情选择最佳的采血时间、部位、频率和血容量增菌培养 标本接种于硫酸镁葡萄糖肉汤中（

3、1:51：10），37孵育，每日观察，连续7天。如疑有菌生长，涂片、革兰染色、镜检，初步报告。 根据涂片结果，选择相应的抗菌药物进行初步药敏试验血液标本培养自动血培养检测系统原理：细菌和真菌生长时释放CO2，通过各种手段检测CO2来判断阴阳性培养瓶需氧、厌氧小儿专用、结核菌、高渗、中和抗生素等分离培养标本的分离培养 于血液琼脂平板上，分区划线，35培养后观察并记录菌落大小、形态、颜色、溶血性等 挑取单菌落涂片、革兰染色、镜检并记录结果 挑取单菌落转接血液琼脂斜面，待进一步鉴定单菌落血液标本中常见的病原菌种类 病 原 菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链

4、球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌鉴定程序革兰阳性菌球菌杆菌触酶阳性触酶阴性葡萄球菌链球菌/肠球菌表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌腐生葡萄球菌溶血：肺炎链球菌草绿色链球菌溶血：化脓性链球菌无乳链球菌溶血：牛链球菌肠球菌棒状杆菌梭菌属芽孢杆菌李斯特菌丙酸杆菌乳酸杆菌丹毒丝菌 链球菌检验程序 链球菌检验程序 菌 种 optochin敏感试验 胆汁溶菌试验 胆汁七叶

5、苷试验 肺炎链球菌S+草绿色链球菌R 肠球菌R+生化反应鉴别标本中可疑菌的鉴定重要生化反应1）过氧化氢酶试验 取菌于载玻片，滴加3%过氧化氢，有大量气泡为阳性葡萄球菌“+”； 链球菌“-”2）氧化酶试验 主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。对苯二胺醌类化合物标本中可疑菌的鉴定3）凝固酶试验（玻片法） 金黄色葡萄球菌“+”4）甘露醇发酵试验 金黄色葡萄球菌“+”标本中可疑菌的鉴定5）新生霉素敏感试验 抑菌圈直径16mm 耐药 抑菌圈直径16mm 敏感表皮葡萄球菌对新生霉素敏感，腐生葡萄球菌耐药标本中可疑菌的鉴定6）胆汁溶菌试验 取10%去氧胆酸钠溶液，滴加于被测菌落，37孵育30min，观察菌

6、落是否消失 肺炎链球菌 “+”标本中可疑菌的鉴定7）菊糖发酵试验 肺炎链球菌 “+”8）Optochin试验 抑菌圈直径 14mm敏感 抑菌圈直径 14mm，胆汁溶菌试验证实 肺炎链球菌 “敏感” 标本中可疑菌的鉴定9）杆菌肽敏感试验 抑菌圈直径 10mm， 敏感 抑菌圈直径 10mm，耐药 A群链球菌 “敏感” 标本中可疑菌的鉴定药物敏感试验 检测分离菌株对各种药物的敏感性，为临床治疗提供依据AntibioticDiameter of zone of inhibition(mm)ResistantIntermediateSensitivePenicillin G(S.aureusE.coli)2021282911122122Streptomycin11121415Amikacin14151617Cefradine14151