FLASH快速制备色谱分离提纯的方法

1、睿智分析部报告人：俞世雄分离提纯的方法?蒸惚?重结晶?萃取?柱层析 （爬板传统的玻璃柱过柱仪器过柱）在这些常用的分离方法中，柱层析是最常用的，而今天我们 所要讲的就是仪器过柱又称 flash“ flash1978 年 W.C.Still 等化学家提出了快速备色谱这一概念，与传统的柱色谱相该技术在“一闪间”就可以完成分离化，这就是 flash 说的由来。快速制备色谱的原理此图为flash仪器的一个简单构造图?省时 ?省力 ?省溶剂 ?紫外检测易判断目标产物减少点板次数? flash 正相应用? flash 反相应用? fl ash 仪器操作一 TLC 爬板选择极性和溶解性都较合适的展开齐| ，

2、并使目标产物的 Rf 值保证 在0.15-0.3 左右为最好左图为某个组份点在某个 Rf 值出需 要多少个 cv （柱体积）的溶剂 才 能洗脱下来一般情况下我们在实际的 flash 应用 中应用的柱体积都会多于这个 数据，以保证产物的纯度二溶剂的选择为了确保产物既要在TLC板上Rf处于 0.15-0.3也要保证各组份分离 度，因 此我们往溶创的选择上也需要尝试不 同k勺配搭。右表为我们在正相柱层析中常用溶剂的极性表展开剂的极性可以根据极性强度和溶剂所占体积百分比计算得出eg:正己烷：乙酸乙酯（仁1） =0.5*0.01+0.5*0.58=0.3溶剂极性强度一牺乙酸乙醋 四哺二氟甲烷正己烷阳蛾0

3、.950.580.570.560.380.420.01正己烷：二氯甲烷 （3: 7）=0.3*0.01+0.7*0.42=0.3flash 柱的选择和上样量的关系公司现在常用的 flash 正相柱为奥秘科技公司生产的柱 P ， 具装柱的填料为普通硅胶目数为 200-300 0, 规格有 4g、 12g 20g 、 40g、 80g、120g等？根据样品的质量可选择相对应的，一般柱子最大载样阜为该柱子硅胶量的 1/20, 即 20g 的柱子一般最多为 1 克的粗品， 在实际的应用中还应根据各组份的分离程度和溶解性等来判断具体的上样量 ?四上样方法的选择湿法和干法湿法上样：一般样品的溶解性较好时可

4、以采用湿法上样， 湿法上样具有方便损失少的特点。但必须注意湿法上样的 溶剂必须是淋洗剂中极性较小的溶剂或掺入百分比较少的K则组份将很容易被洗脱下来。且溶剂量不宜暹过柱体积 10%干法上样：绝大多数的样品我们都采用干法上样，干法上 杆所要注意的是， 建胶量和规格的选择。 硅胶量控制任是 *羊品的倍，硅胶规格址择上尽量和柱手的目数一样的 200-300 的硅胶，切记当样品比较难以拌匀拌干时请选择 100-200 目硅胶，主要是因为当你拌样硅胶越多时整个柱子的压力就会上去，以免出现仪器过压现象！flash 反相应用一反相的原理反相填料是在硅胶基质上键合的诸如 C4,C&C18 月旨 肪链的非极性填料

5、。非极性或疏水性化合物被强烈保留， 而极性样品被璃保留，更快的通过柱床。“反相”用来描述其色谱过程专正相色谱正好相反。二反相色谱的流动相常用的流动相为水和乙月青或水和甲醇，偶尔我们也会采用水 和 四氢联喃。在水相中我们一般都会滴加些弱酸弱碱，把整个体系调至偏 酸偏碱，以保证组份能起峰。常用的弱酸弱碱是甲酸、三 氟乙酸，氨水，碳酸氢镀督，所加的百分比一般与液质体 系相同。三反相柱的选择公司现在用的反相柱大多是自己装填的（进口填料加国 产这柱套），现成的成柱也有，为国产柱，效果上比自填 柱稍差，但其有价格优势！这些都可以在在公司采购平台 上可以询价订购。一般我们经常用的反相柱规格为 40g, 其上

6、样量一般在200mg 左右。四反相样品的上样反相上样我们一般都采用液体上样，一般用水，甲醇， 四氢哄喃，乙月青，DMF,DMS0等溶剂来溶解样品。选取 能使样品溶解状态最好的溶剂溶解！ 最好是 100mg 样品能 溶解在 1 ml 溶剂中为佳！样品中的重金属和催化剂以及一些与水不互溶的正相 溶剂 都要处理掉，才能上反相柱子。五梯度编辑反相的梯度设置与正相不同，我们无法通过点板也确定，只能靠液质上的保留时间来设置来设置梯度。液质一般采用的一个线性梯度5%至 95% （流动相是水和乙 月青） ， 根据目标峰的保留时间推算出该峰起来时的乙月青含量，由于液质使用的柱子粒径一般为 3um3.5um, 而

7、反 相柱所用的填料粒径是4060um, 粒径越小保留性越好， 所以在反相柱flash 反相应用上它的出峰浓度会比液质上小。flash 仪器操作?公司现有2 种型号的 flash 仪器? ISCO COMPANION? BIOTAGE SPI? 2 种仪器的原理是一样的，各有其优缺占主要的区别在与软件操作上的不一样！ 王Sample NameMax %0 *OeTectlon X.RedlSep ColumnRun length. MlnriFauo仪器开机之后会进入这样一个工作界面Ei作日加 McAod Tools p 厂 HeipEdit Method TOC o 1-5 h z Run l

8、eng*他剖-I321二 u-I编辑具体详细的方法应点击 edit method进入编辑菜 单，界面如下ISCO COMPANION 的操此界面就是具体方法编辑菜单作旋钮水平说明上管路是通的旋钮垂直说明上管路是关闭的T而 ISCO COMPANION 的操T 血 Eart MethodTools HelpCMttetcSave mcrSbtodrr: cim.ovj a s JrnpcsFr*-A.EjCAkGrtTTIMB*导出结果在File选项里选择查看结果，提取方法（点open）；保存方法;点击open后可根据样品的名字以及日期，打开你所需ISCO COMPANION 的操 的结果。这是一个样品过完之后的结果图，不同颜色代表不同ToqIs HelpAuto primeManual controlo recommendationsEdit defau