盐酸小檗碱的分离纯化论文

1、.PAGE . - . - - 可修编-黄连中盐酸小蘖碱的提取别离与鉴定：王倩系别：信息工程系 班级：13级生物二班指导教师 ： 静 日期：2014年11月30日. TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc22563 摘 要 PAGEREF _Toc22563 1 HYPERLINK l _Toc27600 第1章 前言 PAGEREF _Toc27600 2 HYPERLINK l _Toc1498 1.1小檗碱特性 PAGEREF _Toc1498 2 HYPERLINK l _Toc18170 1.2小檗碱作用 PAGEREF _Toc18170 2 HYPERLIN

2、K l _Toc19664 1.3小檗碱提取纯化鉴定方法 PAGEREF _Toc19664 2 HYPERLINK l _Toc31022 1.4本工程研究的意义 PAGEREF _Toc31022 3 HYPERLINK l _Toc5670 1.5 研究容 PAGEREF _Toc5670 3 HYPERLINK l _Toc19461 第2章 黄连中小檗碱的提取 PAGEREF _Toc19461 4 HYPERLINK l _Toc6400 2.1实验材料与方法 PAGEREF _Toc6400 4 HYPERLINK l _Toc27325 2.2 结果与分析 PAGEREF _T

3、oc27325 4 HYPERLINK l _Toc32302 第3章 盐酸小檗碱的别离纯化 PAGEREF _Toc32302 5 HYPERLINK l _Toc20942 3.1实验材料与方法 PAGEREF _Toc20942 5 HYPERLINK l _Toc5982 3.2 结果与分析 PAGEREF _Toc5982 6 HYPERLINK l _Toc5461 第4章 盐酸小檗碱的鉴定 PAGEREF _Toc5461 7 HYPERLINK l _Toc4476 4.1实验材料与方法 PAGEREF _Toc4476 7 HYPERLINK l _Toc4627 4.2 结

4、果与分析 PAGEREF _Toc4627 8 HYPERLINK l _Toc27545 第5章 结论 PAGEREF _Toc27545 9 HYPERLINK l _Toc24019 参考文献 PAGEREF _Toc24019 10摘 要生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别为:小檗碱,1冷水,110

5、0(冷乙醇);盐酸盐,1500(冷水);硫酸盐,130(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。主要研究结果为:盐酸小檗碱精制2.氧化铝柱层析别离纯化盐酸小檗碱。3.盐酸小檗碱的鉴定。关键字:盐酸 小檗碱 提取别离第1章 前言1.1小檗碱特性小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别为:小檗碱,1冷水,1100(冷乙醇);盐酸盐,1500(冷水);硫酸盐,130(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。

6、1.2小檗碱作用小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，抵抗多种原因引起的腹泻， 并具有抗病原体作用，通常用于治疗原发性高血压、心律失常、高脂血症、消化性溃疡和2型糖尿病等疾病。常用的小檗碱提取方法有：醇提、酸水、石灰乳、酶解和酸性乙醇等。本实验以黄柏为原料，分别用以上5种方法提取其中的小檗碱，并对各种方法的得率进展了比拟，以期筛选出适于黄檗中小檗碱提取的最正确方法1.3小檗碱提取纯化鉴定方法掌叶防己碱本实验是利用小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。而它们的盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶于水，其盐酸盐在水中溶解度则更小。利用此性质结合盐析法，可从黄连中提取小檗碱。再利用两种生物

7、碱极性不同，采用柱色谱别离。1.4本工程研究的意义2014年中国小檗碱市场研究报告依托多年对小檗碱行业的研究，结合小檗碱行业历年供需关系变化规律，立足国市场，兼顾全球市场环境，对小檗碱行业企业群体进展了深入的调查与研究。同时，2014年中国小檗碱市场研究报告也针对小檗碱行业及其上下游行业的特点，从不同角度切入行业，为小檗碱行业企业提供了强大的数据支持与专业级的市场导向。并为企业制定开展战略、进展投资决策和企业经营管理提供权威、充分、可靠的决策参考。1.5 研究容1.5.1黄连中盐酸小檗碱的提取1.5.2 小檗碱的别离纯化1.5.2 小檗碱的鉴定第2章 黄连中小檗碱的提取2.1实验材料与方法2.

8、1.1实验材料黄连粗粉2.1.2实验试剂2%硫酸溶液、石灰乳、Hcl、Nacl.2.1.3实验仪器粉碎机，渗漉筒，烧杯2.1.4实验方法取黄连粗粉，放入粉碎机，称重约50g加0.3硫酸500ml超过药材0.2cm浸渍20分钟，装入渗漉筒30分钟，滤过药渣滤液加石灰乳调PH值至中性放置10分钟抽滤滤液加HCl调PH23，加滤液体积10的NaCl，放置过夜，抽滤盐酸小檗碱粗品2.2 结果与分析通过以上操作，制得盐酸小檗碱的粗品，由于操作过程中试剂配制微小误差，使得提取的盐酸小檗碱的粗品比预计的少。第3章 盐酸小檗碱的别离纯化3.1实验材料与方法3.1.1实验材料盐酸小檗碱的粗品，3.1.2实验试剂

9、黄连根粉,0.5%硫酸，石英砂，脱脂棉，石灰乳，10%盐酸，浓盐酸，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，10氢氧化钠溶液,滤纸，硅胶，氯仿-氨-甲醇(3011 盐酸 (111，下层)3.1.3实验仪器层析柱、研钵、烧杯、硅胶薄层板、滤纸、抽滤装置、紫外灯、层析缸等3.1.4实验方法3.1.41盐酸小檗碱精制取所得粗品(未枯燥)放入20倍量沸水中，搅拌溶解后，继续加热数分钟，趁热过滤4。滤液滴加一滴浓盐酸，静置(过夜),滤取结晶，用蒸馏水洗数次,抽干，50以下真空枯燥，即为精制盐酸小檗碱氧化铝柱层析别离纯化盐酸小檗碱5a 氧化铝层析柱制备:取一支2.0cm30cm层析柱,柱底覆盖少许脱脂棉,柱参加一定

10、体积95%乙醇,翻开活塞,让溶液慢慢流出。此时将已搅拌混均的氧化铝95%乙醇悬液(层析氧化铝120-140目,25-30g)不断参加层析柱,至加完后,轻敲柱体,使各局部氧化铝均匀严密一致。待氧化铝沉降稳定(外表应平整),外表保持有少量溶剂(0.5cm左右)，关闭活塞。b 进样:取约50 mg左右的盐酸小檗碱粗品，用尽量少的无水乙醇溶解制成溶液。用吸管吸取样液沿柱壁四周小心参加,翻开层析柱活塞使有溶剂滴下,待液面近与氧化铝外表相平,迅速用少量无水乙醇将柱壁样液洗下,待液面下降后再洗,反复屡次,直至外表溶剂无色,让样品完全持留于氧化铝中,并保存有1cm左右溶剂,此时参加少许石英砂覆盖氧化铝外表,并

11、沿管壁参加足量洗脱剂。在此过程中要准确迅速,洗涤溶剂尽量少并尽可能不要扰动,氧化铝外表平整。c 洗脱:使溶剂继续滴下,(注意向柱添加无水乙醇,保持柱体湿润),洗脱样品。按每流分5-10 mL收集洗脱液,并着重收集各个色段(从下至上):鲜黄色、桔红色(棕色段可不再洗脱),收集到的洗脱液经浓缩后进展检测鉴定。d 氧化铝再生回收:层析后弃去氧化铝柱上端带深色局部,取出剩余氧化铝,依次用10氢氧化钠溶液和水洗涤,晾干后经400烘4-6小时活化再生即可备用。3.2 结果与分析通过以上操作，得到一定纯度的盐酸小檗碱纯品。第4章 盐酸小檗碱的鉴定4.1实验材料与方法1取自制精制盐酸小檗碱0.05g溶于50m

12、l热水中，参加10%NaOH溶液2ml混合均匀后，于水浴上加热至50，参加丙酮5ml，放置，即有柠檬色丙酮小檗碱结晶析出。抽滤，水洗后，枯燥，测mp。 2取自制精制盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml待溶解后，加漂白粉少许，即显樱红色。3取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加12滴，即产生绿色硝酸小檗碱沉淀。 4取自制精制盐酸小檗碱少许，加1ml待溶解后，加锌粉少许，再分数次参加浓硫酸数滴，每隔10min加1次，观察其黄色是否消退。 薄层色谱检识 吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液样品：不同色带的甲醇溶液 展开剂：CHCl3-MeOH-冰醋酸7：1：2检视：先在紫

13、外灯光365nm下观察荧光，再喷改进碘化铋钾试剂。记录图谱并计算Rf值4.1.1实验材料盐酸小檗碱纯品4.1.2实验试剂NaOH溶液、稀盐酸、漂白粉、浓硝酸、锌粉、浓硫酸、盐酸小檗碱甲醇溶液、CHCl3-MeOH-冰醋酸、改进碘化铋钾试剂。4.1.3实验仪器紫外可见分光光度计、烧杯，硅胶G-CMA-Na薄层板，真空枯燥箱。 4.1.4实验方法取自制精制盐酸小檗碱0.05g溶于50ml热水中，参加10%NaOH溶液2ml混合均匀后，于水浴上加热至50，参加丙酮5ml，放置，即有柠檬色丙酮小檗碱结晶析出。抽滤，水洗后，枯燥，测mp。2.取自制精制盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml待溶解后，加漂白粉少许

14、，即显樱红色。3.取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加12滴，即产生绿色硝酸小檗碱沉淀。4.取自制精制盐酸小檗碱少许，加1ml待溶解后，加锌粉少许，再分数次参加浓硫酸数滴，每隔10min加1次，观察其黄色是否消退。 5.薄层色谱检识 吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液样品：不同色带的甲醇溶液 展开剂：CHCl3-MeOH-冰醋酸7：1：2检视：先在紫外灯光365nm下观察荧光，再喷改进碘化铋钾试剂。记录图谱并计算Rf值结果与分析通过颜色与RF值分析，得出薄层色谱检验后纯度大大提高，但收率降低。第5章 结论小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，抵抗多种原因引起的腹泻

15、， 并具有抗病原体作用，通常用于治疗原发性高血压、心律失常、高脂血症、消化性溃疡和2型糖尿病等疾病。本工程以黄连作为试验材料，从黄连中提取盐酸小檗碱，通过氧化铝层析柱的方法进一步纯化，进而得到纯度较高的盐酸小檗碱。主要研究结果为:1通过硫酸酸化水、石灰乳沉淀的方法，高效简便的提取得到了一定量的盐酸小檗碱粗品。2 通过盐析和氧化铝层析柱的方法，对盐酸小檗碱粗品进展了纯化。3 对盐酸小檗碱粗品和纯品进展纸层析和薄层层析测定，得知盐酸小檗碱纯度提高，但收率降低。注释1各地产黄连根茎小檗碱及总生物碱含量分别为4.2-6.7%，6.6-9.6%；栽培种比野生种含量少20左右。黄连除根茎作药材外，各部位均

16、含小檗碱，黄连须根0.8-5.5，叶为1.49，老叶为2.5-2.8，花为0.56，种子为0.23.2浸泡药材粗粉的硫酸水溶液，浓度不宜过高，一般为02-03为宜。假设硫酸水溶液浓度过高，小檗碱可成为硫酸氢小檗碱，其溶解度1：100明显较硫酸小檗碱1：30为小，降低提取效率。硫酸水溶液浸出效果与浸泡时间有关，浸泡12小时约可浸出小檗碱80，浸泡24小时，可浸出92。常规浸出应浸泡屡次，使小檗碱提取完全，本实验中浸出液只收集第1次的浸泡液。3盐析时，参加氯化钠的量，以提取液量的10计算，即可到达析出盐酸小檗碱的目的。氯化钠的用量不宜过多，否则溶液的相对密度增大，造成盐酸小檗碱微细结晶呈悬浮态难以下沉。4在精制盐酸小檗碱过程中，因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶，所以加热煮沸后，应迅速抽滤或保温过滤，防止溶液在过滤过程中冷却，析出盐酸小檗碱结晶，过滤困难，降低收率。5进展柱层析别离时,洗脱过