分析化学吸光光度法的基本原理和仪器分析

1、分析化学吸光光度法的基本原理和仪器分析化学分析：常量组分(1%), Er 0.1%0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 化学分析与仪器分析方法比较仪器分析：微量组分(105为高灵敏度; 104*选择性好*显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, max60 nm .*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，重现性好。448.4.2 显色条件的确定c(R)c(R)c(R)1. 显色剂用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+ 浅红Mo(SCN)5 橙红Mo(SCN)6- 浅红Fe(SCN)n3-n452. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定）pH1pHpH2pH46邻

2、二氮菲亚铁反应完全度与pH的关系 Fe2+3RHHA柠檬酸c(R)R=10-4molL-13103FeR347pH38为适宜的酸度范围483. 显色温度及显色时间另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等T1()T2()t(min)A498.4.3 干扰及消除Co2, Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2 (蓝)NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN测Co2(含Fe3+) : (掩蔽法)1.化学法 50Co2+, Zn2+,Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeRCoR, Zn2+ ,Ni2+ , Fe2+ 钴试剂RH+测Co2 :(生成

3、络合物性质不同)如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。测Fe3:(控制pH)Fe3+, Cu2+FeSS （紫红）Cu2+pH 2.5SS512. 物理法 选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 AA络合物络合物试剂试剂52 1. 仅络合物有吸收，溶剂作参比。 如 phenFe2+ 标准曲线2.待测液也有吸收，被测液作参比。 如 测汽水中的 Fe3. 显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。4. 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测

4、组分，再加入显色剂，作参比.2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比. - 选择适当的参比溶液538.5 吸光光度法的应用1. 单一组分测定1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂2) 磷的测定: DNA中含P9.2%, RNA中含P9.5%, 可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼黄(小)磷钼(V)蓝(大)Sn2+543) 蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等4) 氨基酸测定茚三酮(紫色化合物)5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6) 药

5、物含量测定比吸光系数定量；荷移光谱法测定.7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。552. 多组分的测定 xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y标液 在1, 2处分别测得在1处测组分x, 在2处测组分yb) 在1处测组分x; 在2处测总吸收,扣除x吸收,可求yc) x,y组分不能直接测定A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在1处测得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy(在2处测得A2)56 3. 光度滴定NaOH滴定 对硝基酚 pKa=7.15 间硝基酚 pKa=8.39 pKa

6、 =1.24V1V2V(NaOH)/mL对硝基酚间硝基酚酸形均无色.碱形均黄色57典型的光度滴定曲线依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。Vsp滴定剂吸收Vsp被滴物吸收Vsp滴定剂与待测物均吸收Vsp产物吸收584. 络合物组成的测定(1)摩尔比法: 固定cM ,改变cR 1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 59(2)等摩尔连续变化法:M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:260表观形成常数的测定 (设M、R均无吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型 ?615.一元弱酸离解常数的测定 p330HL HLK

7、aH+L/HL高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHLHLc(HL)；低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL Lc(HL).代入整理：HLL或配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A.62MO吸收曲线Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350400450500550600/nmA曲线pH11.10, 1.3822.6533.0643.4853.9865.53,6.80由每份溶液的一对pH、A，可求得一个Ka, 取平均值即可.63MO离解常数的测定作图法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.34646. 双波长分光光度法消除干扰(不要求)在2， A2 = Ax2+Ay2在1， A1= Ax1+Ay1A= A2 - A1 = Ax2+Ay2 (Ax1+Ay1) = Ax2 Ax1 = AxAy2 Ay1Ax =(x2 x1)bcx消除了y的干扰X被测Y干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/nm65双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 1 2AA 1 -A