郑州市动物园东北虎细小病毒病的诊断

1、幼龄猫科动物犬细小病的李同义，450008郑州市动物园 郑州摘要：细小病是常见的传染病，可以多种肉食动物，特别是幼龄动物高，率高。犬科病的技术已经很成熟，通过临诊检查、试剂盒检测、病理解剖学检查和 PCR 检测即可确动物细小诊。猫科动物（东北虎、非洲狮）细小称为猫瘟热，较常见，而猫科动物犬细小的目前分析和 PCR 检测，尚未见。对动物园幼东北虎、幼非洲狮犬细小病例发病情况进行全面确诊为犬细小病。：猫科动物；犬细小；PCRThe young feline animal diagnosis of canine parvodiseaseTong-yi Li, Jian-tang Wang, Chao

2、-jun Li , CZhengzhou zoo Zhengzhou 450008-pu PeiAbstract:Parvodisease is the common infectious disease, can infect a variety of predators, espelly highincidence of young animals, high mortality. Canine parvodisease diagnosis technology is already very mature,through clinical examination, detection k

3、it, pathological anatomy examination and PCR detection can be diagnosed.Cats (Siberian tiger, African lion) infection parvosaid to feline panleukopenia, more common, and cats ofcanine parvoinfection has not been reported. The young tiger, young African lion in zoo infected canineparvodisease.illness

4、 of comprehensive diagnosisysis and PCR detection, diagnosed with canine parvoKey words: feline; canine small; diagnosis; PCR肉食动物细小属于细小科细小属，可以多种动物，临以幼龄动物的发烧、性肠炎、脱水、白细胞减少和心肌炎等症状为主要特征。在我国，无论是家养动物还是野生动物均有细小病的流行，对我国犬科、猫科和鼬科等家养、圈养、野生和经济动物的危害十分严重1。近年来，随着的接种，家养宠物尤其是犬猫的细小病得到良好的控制，而非家养的可动物该疾病也时有发生。目前，临对于犬猫细小

5、病的主要通过临诊检查和试剂盒检测，野生动物细小病没有的试剂盒检测。文章对动物园猫科野生动物犬细小病的过程进行论述。1 临床资料2014 年 2 月动物园诊治几只发病东北虎、非洲狮，5-10 月龄，开始表现为精神沉郁，厌食，病初表现发热，软便或轻微，鼻镜干燥；结膜前期、后期苍白；初期呕和剧烈腹泻。起吐物为肉块，之后为粘液状（图 1）及黄绿色液体，随后发展成为频繁初粪便带果冻状粘液，后粪便呈番茄酱色或咖啡色甚至血便（图 2），味腥臭，排便次数不定，有里急后重的症状。血便后病虎表现为眼球下陷，全身无力，体重明显下降，后期出现喷射状腹泻，带有特别难闻的腥臭味。迅速消瘦、脱水，眼窝塌陷，毛细再充盈时间延

6、长。被毛凌乱，皮肤无弹性，四肢发凉，精神高度沉郁，休克，于腹泻后 3-5 天左右从病初症状轻微到严重一般超过 2 天，整个病程一般不超过二周。有的出现呼吸。，走路摇摆，甚至站立。图 1 粘液状物图 2 血便2方法2.1 临诊检查部分患病动物体温升高 40以上，严重者体温低于正常值。心区听诊有心内性杂音，有的肺部听诊有温进行细胞计数。患病虎血液 1ml 至真空肝素抗凝管中，混匀后用血常规分析仪2.2 犬细小CPV 试剂盒快速法将试剂盒取出平放，用棉签取患病虎直肠粪便放入配套稀释液中，充分混匀后用吸管吸取上清液，加 2-3 滴至板条一端加样，可见有紫色条带向试纸窗口另一端移动，5min左右判定结果

7、。反应槽内只出现 C 线出现为2.3 病理解剖学检查，C 线、T 线均出现为阳性。眼观病变尸体消瘦，皮肤缺乏弹性，可视黏膜苍白，严重脱水,剖检可见心肌松软，颜色变淡，肺充血、；胆囊充盈，肝质脆易碎；腹腔积液，浆膜面有素性渗出物；胃底部有性炎症，呈深红色；小肠中段肠管扩张，肠内容物水样并混有血液，肠黏膜严重脱落、呈暗红色，空肠、回肠黏膜面充血、，肠内容物为淡红色枯液；直肠内膜也较多；肠系膜淋病料 PCR 检测病料处理肿大、充血、，切面。采取东北虎全血，4 3000r/min 离心 5min 收集，4保存备用。东北虎粪便加入 PBS 缓冲液充分研磨，反复冻融 3 次，4 12000r/min 离心

8、 10min 收集上清液。2.4.2 主要试剂DNA 提取试剂盒、MarkerDL2000、2Taq P公司。2.4.3 主要仪器ix 酶、蛋白酶 K、琼脂糖凝胶购自 TakaraPCR 仪（Thermo）、凝胶成像系统（ProteinSimple）、电泳仪（DYCZ-28A）。2.4.4 PCR 方法应用 Primremier 5.0，参照 Genb中登录的 CPV VP2 蛋白（GenB引物由登录号：M38246）设计一对特异性引物，扩增 CPV VP2部分片段 630 bp，生工生物工程技术服务。上游引物：5-ACCGTTACTGACATTCGCT -3，下游引物：5-GTTAAAGTC

9、ACCCA-3。取 100L 临床样品，按 DNA 提取试剂盒提取总 DNA 做为 PCR 反应模板。在 20L 反应体系中，各组分含量为：上下游引物各 20mol/L，模板 2L，2Taq Pix 酶 10 L，ddH2O补足 20L，扩增参数为 94 5 min； 95 10 s、58 10 s、72 30 s，循环 35 次，同时做对照。PCR 产物经 1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。3结果3.1 临床结果此次发病呈性，且出现高烧、血便，高度怀疑为传染性疾病。患病动物多死于脱水、电解质紊乱、酸个/mm3），淋巴细胞增多。和心肌炎。血液结果显示白细胞显著减少（4 0008 0003.2 犬细小

10、用犬细小剂盒检测为CPV、猫瘟热、弓形虫试剂盒快速结果CPV 试剂盒检测发病动物的粪便，结果为弱阳性（如图 3-1）；猫瘟热试（图 3-2）；弓形虫试剂盒检测为（图 3-3）。图 3-1 CPV 试剂盒图 3-2 FPV-Ag图 3-3 Toxopl.Ab结果结果结果3.3 病理解剖学检查结果眼观病变尸体消瘦，皮肤缺乏弹性，可视黏膜苍白，严重脱水,剖检可见心肌松软，颜色变淡（图 4-1），肺充血、（图 4-2）；胆囊充盈，肝质脆易碎；腹腔积液，浆膜面有素性渗出物（图 4-3）；胃底部有性炎症，呈深红色；小肠中段肠管扩张，肠内容物水样并混有血液，肠黏膜严重脱落、呈暗红色，空肠、回肠黏膜面充血、，

11、肠内容，切面物为淡红色枯液；直肠内膜也较多（图 4-4）；肠系膜淋。肿大、充血、图 4-1 心肌松软、颜色变淡图 4-2 肺充血、图 4-3 腹腔积液、图 4-4 肠道充血、素性渗出物3.4 PCR 检测结果利用设计的引物进行 PCR 扩增 ，经 1.0 %琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示，从粪便和中扩增均出约 630 bp 的片段(图 5)。图 5 CPV VP2综合发病情况、临床症状、剖检病变及。的 PCR 扩增检测方法将该病例确诊为猫科动物犬细小分析细小犬细小同属于细小流行特点（Canines parvo,CPV）和猫细小（Feline parvo,FPV）科细小属，无囊膜单链 DNA，许多

12、研究证实，两者之间具有共同的抗原组成，能发生交叉性学反应。迄今为止，CPV 只有一个抗原型，即 CPV-2，并有新亚型 CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c 出现2-5。CPV 除能科动物，新亚型还能猫、豹、熊、虎等动物6，此为国外犬外，还能，国内野生猫科动物是全身性的，狐狸、狼等犬FPV野生猫科动物的较多，而 CPV此次病倒证实了 CPV 也可不是肠腔到达肠黏膜，主要家猫已有7，目前未见野生猫科动物。细小CPV 的，通过血流而两种类型的细胞：肠上皮细胞和心肌细胞，导致肠腺上皮细胞脱落，出现肠道症状和心肌炎症状。同时可引起淋巴坏死，破坏骨髓增殖细胞，导致淋巴细胞和白细胞减少8-10。4.2

13、 细小的临床确诊目前已经建立的细小检测方法有很多种，如血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验、电镜、分离（VI）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）等方法11，就临床而言，犬用细小（胶体金）快速测试条测试操作简便快速，结果易于分析判定，但是却没有针对虎、狮等野生动物的快速测试条。本次从动物园东北虎、非洲试剂盒检测，测试线不十分明狮临床表现症状严重疑似细小病，使用犬 CPV 快速显，表现弱阳性。为进一步确诊，采用 PCR 检测，显示为强阳性，PCR 具有较好的特异性，灵敏度远远高于试剂盒4.3 致病性观察本次猫科动物发病方法，为该疾病的提供最有力的。均在 5-10 月龄，相邻的

14、成年动物未见发病，说明犬细小感染猫科动物幼龄动物敏感性强，而成年动物未见发病症状，是否带毒未做检测（采样原因）。幼年发病动物从率看，首次发病率约 50%。1 年后，再次有发病动物症状有所减轻，病程缩短，率明显下降，因此次发病仅一只动物，经治疗很快痊愈。4.4 幼年猫科动物犬细小病的预防野生动物东北虎、非洲狮属于保护动物，数量较少，近年来频有猫科野生动物细小，危性，首(FPV)的12-14，因其特殊的生活习性不宜采取预防措施，进行及时治疗较害极大，亟待引起重视。本次动物园猫科动物发病(为 CPV 而非 FPV)即呈次发病率极高，约为 50%，且病兽的物、唾液、粪便和尿液中含毒量最高，病兽不断向外

15、排毒而其他健康动物及易感的野生猫科动物。犬细小很难彻底清除，对患病动物进行并对其居住环境进行全面有效，来预防健康动物的是非常有必要的。临犬细小犬猫细小病可以对犬猫细小起到良好的控制作用，对野生猫科动物病尚未用过，是否有效有待考究。参考文献：1杨,夏咸柱. 肉食兽细小研究概述A. 中国畜牧兽医学会兽医外科学分会、中国畜牧兽医学会小动物医学分会.兽医外科学第 13 次学术研讨会、小动物医学第 1次学术研讨会暨奶牛疾病第 3 次学术会小动物医学分会:,2006:7.集C.中国畜牧兽医学会兽医外科学分会、中国畜牧兽医学会2345,. 犬细小VP2的遗传变异分析J.学报,2009,06:452-459.

16、,. 犬细小,. 犬细小:从到进化J. 微生物学报,2011,07:869-875.的分离鉴定、序列分析及VP2的融合表达D.中国农业,2008.,郭冬春,. 虎源细小的分离鉴定及其VP2分析J. 中国预防兽医学报,2015,09:721-724.6Decaro N, Desario C, Addie D D, Mar la V ,Vieira M J, Elia G, Zicola A, Davis C ,Thompson G, Thiry E,Truyen U,Buonavoglia C. 2007. The study molecular13(8):1222-1224.demiology of canine parvo, Europe. Emerg Infect Dis,78910，师志海.猫瘟热的与防治J. 兽医导刊,2007,02:55-56.，. 犬细小病的病理学观察J. 动物医学进展,2009,08:125-128