14维生素类药物的分析

1、药物分析Pharmaceutical Analysis第十四章 维生素类药物的分析8/3/20221维生素类药物的分析 维生素维持人类机体正常代谢功能所必须的一类活性物质,主要用于机体的能量转移和代谢调节,体内不能合成,须从食物中摄取。通俗来讲，即维持生命的物质，是维持人体生命活动必须的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素在体内的含量很少，但不可或缺。8/3/20222维生素类药物的分析 维生素醇从化学结构上来讲，维生素类均属于有机化合物，但并非同一类化合物。酯酸胺酚醛各具有不同的理化性质和生理作用8/3/20223按溶解度分8/3/20224维生素类药物的分析方法生物法微生物

2、法化学法物理化学法都是依据药物的化学结构、理化性质与生物特性来进行分析8/3/20225AB1CDEVitaminsContents主要讲解8/3/20226维生素A的分析维生素A是一种不饱和脂肪醇，在自然蜀中主要来源于鲛类海鱼肝脏中提取的脂肪油（鱼肝油）。鲛类海鱼？具有多种异构体，有不同的名称，其中活性最好的是维生素A1，也是通常所指的维生素A8/3/20227维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体8/3/20228维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体维生素A醇（Retinol)8/3/20229维生素A的分析维生素A具有一个共轭

3、多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体维生素A醋酸酯（Vitamin A Acetate)8/3/202210维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体维生素A棕榈酸酯（Vitamin A Palmitate)8/3/202211维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体去氢维生素A（A2 dehydroretinol)8/3/202212维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体去水维生素A（A3 anhydroretinol)8/3/202213第一节 VitA912345678Retinol (Vit A alco

4、hol)VA acetateVA palmitate2-Cis Neovitamin Aa 4-Cis Neovitamin Ab2,4-dicis Neovitamin Ac6-Cis Isovitamin Aa 8/3/202214第一节 VitA二、主要性质 溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。 紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别 与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳

5、定的蓝色8/3/202215第一节 VitA二、鉴别试验Vit ASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色1.三氯化锑反应(Carr-Price反应)书上的有点小错误8/3/202216第一节 VitA二、鉴别试验反应应在无水无醇条件下进行。因为水可使三氯化锑水解，而乙醇可以使碳正离子作用而使反应不能进行Notice8/3/202217第一节 VitA2.UVVit AVit A3维生素A在无水乙醇盐酸溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰.如1.水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰8/3/202218第一节 VitA2.UVVit AVit

6、 A33.TLC：三氯化锑显色，磷钼酸显色维生素A去水维生素A最大吸收峰向长波方向移动：红移8/3/202219三、含量测定 维生素A的测定CHP收载三种HPLC法UV三氯化锑法8/3/202220三、含量测定 UV维生素A常混有杂质，包括多种异构体，氧化降解产物，合成中间体，副产物等以及常用稀释油类。都有紫外吸收，干扰测定。咋办呢？请用三点校正法！8/3/202221第一节 VitA维生素A在325-328nm的波长范围内具有最大吸收，其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异。如下：应用三点校正法时要注意8/3/202222第一节 VitAAnmVit A samplepure VA acetat

7、eimpurities测定原理 杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（假设） 物质对光的吸收具有加和性。（真理）8/3/202223第一节 VitA第一法等波长差法213nmAVit A samplepure VA acetateimpurities328340316A1A2A3A1A2A3X1X2X3设：已知A1=A1-X1=A1-(m1+C)A2=A2-X2=A2-(m2+C)A3=A3-X3=A3-(m3+C)VitA醋酸酯Y=mX+C8/3/202224第一节 VitA第一法等波长差法213nmAVit A samplepure VA ace

8、tateimpurities328340316A1A2A3A1A2A3X1X2X3A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)VitA醋酸酯经过一系列变换,得出下式通过实验求出A1、A2、A3，再用纯品求出K1、K2，再转换波长为chp2010药典规定8/3/202225第二法等吸收比法第一节 VitAA213nm310325334A2=A3=6/7A1A1A2A3A2A1A3FLDMEA325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334VitA醇波长为chp2010药典规定8/3/202226测定方法一、基本步骤第一步：选择A （A328 或A328(

9、校正后)）选择依据所选A值中杂质的干扰已基本消除第二步：求第三步：求效价（每克供试品所含维生素A的国际单位数）规定具体步骤测定A8/3/202227测定方法1IU=0.344g Vit A 醋酸酯1gVit A 醋酸酯=106 g/0.344 (g/IU) =2.907106IU Vit A 醋酸酯换算因子 =2.907106 IU/1530 =19008/3/202228第四步：求标示量(百分)测定方法Why?8/3/202229第四步：求标示量测定方法这是因为标示量是以效价的形式存在的8/3/202230第四步：求标示量测定方法测定含量单位质量1g对应的效价效价占单位样品质量的百分比效价占

10、单位质量的百分比经过变形可得下式8/3/202231第四步：求标示量测定方法这是因为标示量是以效价的形式存在的8/3/202232二、第一法纯度高的VitA acetate测定方法合成 Vit A天然鱼肝油max应为328nm。若max不在326329nm之间，则不能用本法测定，改为第二法计算，选择AA值的选择测量吸光度判断8/3/202233测定方法A. 若【(A/A328nm)-规定值】 (0.02) A328不校正B. 若【(A/A328nm)-规定值】 有超过 (0.02)者A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)A328不校正A=A328校正第二法8/3/2022

11、34测定方法三、第二法VitA alcohol皂化法 6/7法 样品前处理酯 乙醚提取VA醇，洗涤，过滤异丙醇溶解残渣在 300，310，325，334nm处分别测Aimax应为325nm。若max不在323327nm之间，则供试品中杂质含量过高，改为色谱法将未皂化部分纯化后进行测定。计算，选择A8/3/202235测定方法A. 若(A300/A325) 0.73A325不校正A=A325校正A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334B. 若(A300/A325) 0.73色谱法纯化后再测8/3/202236测定方法应用示例一VitAD胶丸中VitA的含量测定

12、精密称取本品(规格10,000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度如下，计算Vit A的标示量百分含量。8/3/202237测定方法A=A328校正8/3/202238测定方法8/3/202239测定方法应用示例二称取Vit A滴剂0.1082g(标示量50 000I.U./g)，加环已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50 ml量瓶中，加环已烷至刻度，摇

13、匀后置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得相应的吸收度值，试求此滴剂中Vit A的标示量百分率：8/3/202240A=A328校正测定方法8/3/202241测定方法8/3/202242第一节 VitA(二)HPLCRF-HPLC同时测定人血清中Vit A和Vit E含量色谱条件 色谱柱：C18 流动相：甲醇-水 流速：1.2ml/min 检测波长与AUFS： 08min(330nm,0.25AUFS); 8min后(292nm,0.05AUFS) 内标：Vit A 酯Vit AVit E8/3/202243(三)三氯化锑比色法第一节 VitAmax 618nm620nm缺点呈

14、色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性8/3/202244习题1. 药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列三种类型 对照法 、 灵敏度法 、 比较法 。8/3/202245习题2. 药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即 和 。8/3/202246习题3. 药物中微量的氯化物在 酸性条件下与 反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液（浓度为 ）在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是否符合限量规定。8/3/202247习题4.巴比妥类药物具有的特性为：A. 弱碱性 B. 弱酸性 C. 易与重金属离子络合D. 易

15、水解 E. 具有紫外特征吸收 8/3/202248习题5. 苯巴比妥钠与铜盐的鉴别反应生成物为:A. 紫色 B. 绿色 C. 蓝色 D. 黄色 E. 紫堇色 8/3/202249习题6巴比妥类药物在吡啶溶液中与铜吡啶试液作用，生成配位化合物，显绿色的药物是:A. 苯巴比妥 B. 异戊巴比妥 C. 司可巴比妥 D. 巴比妥 E. 硫喷妥钠 8/3/202250习题7. 巴比妥类药物的鉴别方法有:A. 与钡盐反应生成白色化合物B. 与镁盐反应生成红色化合物C. 与银盐反应生成白色沉淀D. 与铜盐反应生成有色产物E. 与氢氧化钠反应生成白色沉淀 8/3/202251习题8. 于Na2CO3溶液中加A

16、gNO3试液，开始生成白色沉淀经振摇即溶解，继续加AgNO3试液，生成的沉淀则不再溶解，该药物应是: A. 盐酸可待因 B. 咖啡因 C. 新霉素 D. 维生素C E. 苯巴比妥8/3/202252习题9. 与NaNO2H2SO4反应生成橙黄至橙红色产物的药物是: A. 苯巴比妥 B. 司可巴比妥 C. 巴比妥 D. 硫喷妥钠 E. 硫酸奎宁 8/3/202253习题10. 银量法测定苯巴比妥钠含量时,若用自身指示法来判断终点,样品消耗标准溶液的摩尔比应为: A. 1:2 B. 2:1 C. 1:1 D. 1:4 E. 以上都不对 8/3/202254习题11. 用酸量法测定巴比妥类药物含量时

17、，适用的溶剂为: A. 碱性 B. 水 C. 酸水 D. 醇水 E. 以上都不对 8/3/202255第二节 VitB亦称盐酸硫胺,具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能，主要用于治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病氨基嘧啶环噻唑环亚甲基季铵8/3/202256第二节 VitB性质噻唑环溶解性季铵干燥品在空气中迅速吸收4%的水分。在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性8/3/202257第二节 VitB性质硫色素反应噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光8/3/202258第二节 VitB性质分子中

18、具有两个杂环，可与某些生物碱沉淀试剂如碘化钾、三硝基苯酚、碘溶液、硅钨酸反应生成恒定的沉淀紫外吸收特性8/3/202259第二节 VitB性质维生素B1为盐酸盐，可呈氯化物的鉴别反应氯化物的特征8/3/202260第二节 VitB一、Identification1.硫色素荧光反应为维生素B1所特有NaOHH2O8/3/202261环合O2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，显蓝色荧光第二节 VitB8/3/202262第二节 VitB取本品约5mg，加NaOH T.S. 2.5ml溶解后，加铁氰化钾 T.S. 0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分层，上层显强烈的蓝色荧光；加酸

19、使呈酸性，荧光即消失；再加碱使呈碱性，荧光又重现。方法8/3/202263第二节 VitB沉淀反应维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀B.H2HgI4维生素B1与苦酮酸生成扇形白色结晶维生素B1与碘生成红色沉淀B.HI.I2维生素B1与硅钨酸反应生成白色沉淀B2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O8/3/202264氯化物反应本品是盐酸盐,水溶液呈氯化物的鉴别反应硫元素反应8/3/202265红外分光光度法本品对照品对照8/3/202266第二节 VitB三、含量测定 非水溶液滴定法 (Non-aqueous Titrimetry) 紫外分光光度法 (UV) 硫色素荧光法 (Thiochr

20、one Fluoremetry)8/3/202267第二节 VitB三、含量测定非水滴定法原理维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团,在非水溶液中均可与高氯酸作用,以电位指示终点.根据消耗的高氯酸量即可算出维生素B1的含量.8/3/202268第二节 VitB1. Non-aqueous Titrimetry喹那啶红亚甲蓝 （紫红天蓝）8/3/202269第二节 VitB紫外分光光度法原理维生素B1分子中含有共轭双键结构,在紫外区有吸收,根据最大吸收波长处的吸光度即可以计算含量.8/3/202270第二节 VitB2. UV10.1M HCl2H203H3PO4 buffer4a

21、lcohol2462322558/3/202271第二节 VitB3. Thiochrone FluoremetryVitB1铁氰化钾NaOH硫色素异丁醇荧光ex-365nmem-435nm+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇对照液+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇供试液SdAb硫色素荧光法8/3/202272第三节 VitC612345烯二醇结构共轭酸性强酸性弱内酯结构8/3/202273第三节 VitC一、主要性质 溶解性 酸性 旋光性 还原性L-抗坏血酸(有生物活性)L-二酮古罗糖酸L-去氢抗坏血酸无生物活性8/3/202274第三节

22、 VitC 水解性 糖类性质50 UV8/3/202275第三节 VitC二、鉴别1.与AgNO3反应2.与2,6-二氯靛酚反应氧化型还原型酸式色碱式色3.与氧化剂反应8/3/202276第三节 VitC4.与糖类反应H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50蓝色其它还有薄层色谱法,百分吸收系数法8/3/202277杂质检查溶液的澄清度与颜色检查维生素C长期贮存会被氧化变色,因而应通过此项检查控制其纯度.铁与铜离子的检查维生素C中可能存在一些铁与铜离子,因而可以采用标准添加对照法进行检查.草酸的检查一般加CaCl2形成草酸钙对测定其浊度.8/3/202278三、含量测定(强还原性)第三节 VitC1

23、.碘量法取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O68/3/2022792. 2,6-二氯靛酚滴定法第三节 VitC快速滴定，用于含Vit C的制剂与食品分析3.HPLC人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定8/3/202280第三节 VitC标准溶液制备：取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血

24、浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：V C在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。8/3/202281第四节 Vit D胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3维生素 D2麦角甾醇甾醇衍生物8/3/202282第四节 Vit D 维生素D2 维生素D3 溶解性:在三氯甲烷中极易溶解,在

25、丙酮乙醇乙醚中易溶. 不稳定性:双键极不稳定,易氧化变色,毒性增强. 旋光性:有五到六个手性碳原子,均具有旋光性. 显色反应:在三氯甲烷+醋酐+硫酸会从黄到紫再到绿色. 紫外吸收:具有吸收基团8/3/202283第四节 Vit D二、鉴别显色反应:三氯甲烷+醋酐+硫酸三氯甲烷+三氯化锑三氯化铁=橙黄色初显黄色逐渐变红迅即变紫最后变绿溶液显橙红色,逐渐变粉红色二氯丙醇和乙酰氯=绿色8/3/202284第四节 Vit D二、鉴别比旋度鉴别测定比旋度进行鉴别其它鉴别法TLCHPLC熔点UVIR等8/3/202285第四节 Vit D三、杂质检查1、麦角醇的检查90乙醇溶解后，加洋地黄皂苷溶液，放置1

26、8h，不得发生浑浊。2、前维生素D的光照产物280nm320nm8/3/202286第四节 Vit DCh.P 2010NP-HPLC含量测定USP34-NF29化学法色谱法微生物法BP2010化学法色谱法光谱法8/3/202287 固定相：硅胶 流动相：正己烷正戊醇（997：3） 检测波长：254nm第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品第二法：(1)皂化提取 ;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液B;(3)按第一法进行测定。第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受干扰时，采用此法。第四节 Vit D8/3/202288第五节 Vit ER1R

27、2苯并二氢吡喃醇Vit E (dl-Tocopheryl Acetate)Synthetic Natural8/3/202289苯并二氢吡喃环 + 饱和烃链第五节 Vit E 溶解性 水解性 氧化性 紫外吸收二、鉴别1.硝酸反应生育酚HNO3（橙红色）生育红8/3/202290第五节 Vit E2.三氯化铁反应生育酚O对-生育醌3.UV 0.01%无水乙醇中，max = 284nm，min = 254nm8/3/202291第五节 Vit E4.三氯化铁反应薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105 5） VitE Rf = 0.78/3/202292第五节 Vit E三、杂质检查1.酸度2.生育酚取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml8/3/202293第五节 Vit E四、含量测定载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500 R21.GCCh.P24.40内标14.54VEUSP 内标 十六酸十六醇酯 R1.08/3/2022