最终灭菌注射剂的质量控制

1、 最终灭菌注射剂质量控制 1污染微生物的来源内源性的影响因素空气净化系统水工艺过程物料 外源性的影响因素人员 2芽孢是关键控制点G+G-微生物无处不在气源性微生物革兰氏阳性菌较多它们可形成芽孢，难以杀灭因此，药品生产需要HVAC水源性则革兰氏阴性菌居多不会生成孢子但会形成细菌内毒素3一、什么是芽孢？当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的体眠体，该体眠体即称芽孢（Spore）或孢子。由于其对不良环境的耐受性远高于生长态细胞，常被用于挑战灭菌工艺，以确认被灭菌物品无菌的可靠性。4芽孢的特性主要产生于Gram+ 细菌的两个属芽孢杆菌属 Bacillus梭菌属 Cl

2、ostridium能抵御各种恶劣环境，可存活上百万年，因为它有厚的皮层结构仅含核酸及少量萌发必需物含水量极低休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只产生一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，不具上述特性。5细菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母细胞孢子壁的形成生长态细胞6热对活细胞的作用有一种可引发克雅氏综合症 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原体，在132下加 一小时才可完全杀灭（克雅氏综合症：俗称人体疯牛病）需氧菌中的芽孢杆菌属(Bacillus)和厌氧菌中的梭状芽孢杆菌属(Clostridium)，耐热性较强它们能产生内源性孢子/芽孢，或胞间休眠体，

3、对热、干燥及化学消毒剂的耐受性大大增强这类芽孢的干热灭菌温度一般在100 170，湿热灭菌的温度则在80 129之间。7从“欣弗”事件谈灭菌工艺欣弗事件的发生2006年7月安徽华源克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液不良事件报告81例，涉及10个省份8欣弗到底怎么了？9克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g）采用半无菌工艺生产灭菌条件100、7分钟贮存条件阴凉有效期1年有些企业的处方中含有苯甲醇稳定性考察有一批留样的有关物质为7.9有关物质总杂不得过8.0 单杂不得过5.010克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g）灭菌条件100、31

4、0分钟贮存条件遮光、密闭保存有效期2年处方中含有苯甲醇有关物质总杂不得过6.0（2004年底改为8.0）单杂不得过4.011从上述调查看国内灭菌注射剂生产的缺陷对灭菌的认识不正确产品研发未考虑灭菌工艺的可行性忽视工艺的可行性，盲目跟风报批注射剂用原料药的杂质控制不严忽视产品的安全性12中国医药报 2007年1月4日 A6版13无菌药品常用灭菌工艺的比较类别Fo值微生物存活概率要点说明过度杀灭法Fo1210-6热稳定性产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存概率法8Fo710-3不能加热的产品不能除去病毒、支原体等微生物LRV=log reduction value 过滤对数下降值一般上游为107

5、下游为1，则LRV=7由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌过滤的水平14影响湿热灭菌效果的因素待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的装载方式和装载数量湿热灭菌工艺条件湿热灭菌设备15无菌保证水平SAL无菌保证水平（Sterility Assurance Level）表示物品被灭菌后的无菌状态按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。16灭菌工艺验证的必要性灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系灭菌工艺的验证是无菌保

6、证的必要条件灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产17国内企业灭菌工艺验证常见缺陷无包装规格无装载方式未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证采用留点温度计监测温度无温度探头校准记录验证的灭菌工艺与实际工艺不一致未验证最差灭菌条件设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6生物指示剂使用不规范18灭菌工艺检查要点生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量灭菌工艺条件灭菌设备关键控制参数的控制和记录仪表的校准设备维护和维修灭菌的记录灭菌工艺的验证选用的生物指示剂热分布试验，找出最冷点位置无菌检验样品的取样19无菌检查20无菌

7、检查的局限性无菌的定义理论上：无菌没有任何活的微生物实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行100%检验无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断无菌检验用培养基有其局限性只进行细菌和真菌的检验对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件（如温度和时间）是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态21美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法真实的不合格率测试20支样品不合格的可能性测试40支样品不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099

8、.9%100.0%22上述无菌测试结果的启示含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大23如何用无菌检验来证明整批产品无菌要求有一个取样计划来涵盖整个批号有足够的取样量和检验量选择适用的培养基采用经验证的无菌检验方法良好的环境监控24检验标准制定依据2003验证指南 QC-751E注射剂药液过滤前含菌量测定M-00 061A 注射剂灭菌前药液污染水平及耐热性检查25大容量注射剂举例灭菌前药液的含微生物的计算过程：根据2003版药品上产验证指南 lgP=lgN-F0/D121P:灭菌后产品内微生物存活概率 N:灭

9、菌前药液的含耐热孢子的量 D121:微生物耐热参数，系指一定温度下将微生物杀灭90%或使之下降一个对数单位所需的时间（分）lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值与FT成正比，与DT成反比)该产品（葡萄糖）采用115灭菌32min,产品灭菌的F08,为更严格的控制灭菌前产品的生物负载，F0取8计算。26大容量注射剂举例DT与生产环境，以及过滤截留得到的微生物有关，需要确认污染微生物的耐热性，在未检测到耐热微生物时，DT通常按1计算。为更严格的控制灭菌前产品的生物负载， 取DT 为1计算。lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（产品规格为250ml）N=40CFU/100ml27检测重点污染水平微生物耐热性28取样 灭菌前药液直接取样，每个样品取样大容量注射剂（两个最小包装，最少各 100mL）。小容量注射剂两份，最少各100mL。灭菌后取样大容量注射剂各约50mL。29检测方法污染水平检查先用灭菌的含5吐温80的pH7.0氯化钠蛋白胨润湿0.45m滤膜，然后过滤100mL灭菌前药液，有抑菌性的药液需用已验证量的缓冲液冲洗滤膜，以消除药液的抑菌性），再以无菌方式将滤膜菌面朝上贴于准备好的胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）上，同时做1个阴性对照。胰