基因工程制药

1、基因工程药物 举例 药物特点1简介及发展2过程34基因工程药物2-1 简 介定义： 用现代基因重组高科技对基因进行克隆，通过重组DNA导入大肠杆菌、酵母或动物细胞成功构建工程菌株或细胞株，在工程菌株、细胞中所表达生产的新型药物包括细胞因子、多肽类激素、溶血栓药物、疫苗、抗体、反RNA及基因治疗药物等等多种难治疾病的基因工程药物.3发展我国基因工程药物的研究和开发起步较晚，直至20世纪70年代初才开始将DNA重组技术应用到医学上，但在国家产业政策的大力支持下，这一领域发展迅速，逐步缩短了与先进国家的差距。1989年我国批准了第一个在我国生产的基因工程药物重组人干扰素1b，标志着我国生产的基因工程

2、药物实现了零的突破。从此以后，我国基因工程制药产业从无到有， 不断发展壮大。截止1998年底，我国已批准上市的基因工程药物和疫苗产品共计15种。至2000年，我国已有200多家生物技术公司，有20多家生产销售人干扰素、白细胞介素、乙肝疫苗等12种基因工程药物。4基因工程的操作流程上游下游5目的基因的获得获取目的基因是实施基因工程的第一步。两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。6另一条是人工合成基因。两种方法： （1）以目的基因转录成的信使RNA为模版，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的

3、基因。 （2）根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对的原则，推测出它的基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。7目的基因与运载体结合基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。一般以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶

4、，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。8目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌，枯草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌和动植物细胞等。用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。9目的基因的筛选和表达在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测

5、。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。方法： 抗生素抗性基因插入失活法 直接法 -半乳糖苷酶基因插入失活法 分子杂交法 非直接法 免疫化学法 酶联免疫检测法10产物分离纯化基因工程药物的分离纯化一般不应超过4-5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品以及成品加工。11基因工程药物的特点目的产物在初始物料中含量低含目的产物的初始物料组成复杂目的产物的稳定性差种类繁多应用面广，对其质量、纯度要求高，甚至要求无菌、无热源等12基因工程技术可生产的药物和制剂（1）免疫性蛋白，如各种抗原和单克隆抗体；（2）细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子、凝血因子；（3）激素，如胰岛素、生长激素、心素纳；（4）酶类，如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂、超氧化物歧化酶。13 2003年抗非典期间，江南大学与丽珠集团苏州新宝制药厂合作攻关，通过发酵工程和生物制药工程研制成功了重组人-2b干扰