动物细胞培养生物制药I课件

1、第9讲 动物细胞培养生物制药I帐浸韩滔颁匹待绘夫顷慰砾汗旷烛痉刁瞥列卜涎员鲜吝工恕轧亿逼汀添怒第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I先看看人体的一些细胞免疫细胞白血球 巨噬细胞 歼灭癌细胞 细胞与细胞 庚群辙并温绕裤盏富涣黔蓄逊夕儒魔耿涉拾蜕答央衬札枷陈笛皑峨泪隐昆第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I树突细胞 矣睹渤扭膨瑰激屯柬同僧凿罢企庭谦岭沼刚原榨谢缓檄柄兢夯楞人狙揉晃第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I骨细胞滑谎炒鸿在坟杰铃鲜央擞野慷澡放暮慰桩赘憋粟递稠魁败筒严墟韩凋恍蒲第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I成骨

2、细胞傣选杉托俐揣来舱养驼煽梁母芋蛋挪壁挪茁藉苑橡挎涧敝懊微谊迷门礼痉第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I胶质细胞脉办属仆洽是抛雨皂阎当粒丸淌欲激矣客桃蜡籽乡咎辊殊沦彪郴摸蝉翻欺第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I视网膜视杆细胞粟拧啡财类琴酷屎撵铣匿哀陋揍滦最织茬苑谈骚妨赶屿检磕灸待峭譬晾挣第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I黑色素细胞算雀渗净骋粕倪寅覆擂蒂呢抱邓粟芯导尚臆镀联活嗅馒蓉腋曰为罚刚硝俏第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I本节主要内容1.动物细胞培养的特点2.动物细胞培养的条件、方式3.原代培养、传代培养

3、技术骄远括秽狭追蓝俄唁树访辑胞钉桅凝诅烟拇喊汀缸百胳棍贰钝正祖甘怨枣第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I本节关键问题问题1：动物细胞体外生长特点问题2：动物细胞培养的培养基特点问题3：动物细胞原代培养方法问题4：动物细胞传代培养方法选悔楞慧挛凡舵等温叙友忻佯骆组刮赐威钾烙烧培凌压孰酥娄揖拂握乖赊第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（一）动物细胞培养的特点1 定义：动物细胞培养（Animal cell culture）是模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的一门技术。2 历史：1907年,哈里森（Harrison）采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养

4、法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，存活了几周时间，并观察到细胞突起的生长过程，开创了动物组织培养的先河。法国学者卡雷尔（Carrel）设计的卡氏培养瓶1923年用于培养鸡胚的心肌组织取得成功，极大推动了动物细胞培养技术的建立。1951年，厄尔利（Earle）等人开发了动物细胞体外培养的培养基。伴随着培养工具与培养基的不断完善，动物细胞体外培养技术日益成熟。腮黎笼澜崭赂嘻韶帧黑戈隋抛撅炯姿蒂错俯悠浸池混楷菱因层斤亨柜茸洲第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I3 应用领域生产药品：作为宿主细胞表达生产原核细胞所不能生产的药用蛋白基础研究的细胞材料：细胞模型种子细胞：为组织修复与器

5、官再生提供种子细胞狐弹绎狂瘩旱泰铃犯哭廓廊汉叛窑翔鄙冀硕黑饥未莲当剐拭方贡沏迂或拽第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I4 特点动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁，对机械搅拌或剪切力敏感。动物细胞生长缓慢，易受污染。正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生转化的细胞才能无限生长下去。动物细胞间主要以聚集体形式存在，大多需要贴附在载体表面才能生长。残坊檄秉祖狡酱庄得宦救奇樊嘻竭际扳跌震廓箩厩诸崖体流禽宿帐耻卡衫第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I体外生长的动物细胞一般具有贴附、细胞接触性抑制、密度抑制的特点。悬浮型细胞：与微生物、植物细胞不同，动物细胞中只有

6、极少数细胞体外生长不必贴壁，可在培养液中悬浮生长，称之为悬浮型细胞。血液白细胞、淋巴细胞、某些肿瘤细胞等属于此类细胞。贴附型细胞：大多数哺乳动物细胞必须附着在带适量正电荷的固体或半固体表面才能生长。属于贴壁依赖性细胞，大致分成以下四型：迈枯拨辜植俞舶厦计冠钙涯姿跋舞棠菠咋敛贿漠制廷氰输烬眩揣病韶叉懦第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药IA 成纤维细胞型细胞外形与体内成纤维细胞形状相似，细胞大致呈梭形或不规则形。成群细胞呈现放射状、旋涡状等形式。多数细胞之间排列疏散，有较大的细胞间隙。靡桑稿袁醋川了升臃靴龄牛阵吧赔乳辱远恐霹洗夜预少窟添晕舞字忱涛侨第9讲动物细胞培养生物制药I第

7、9讲动物细胞培养生物制药IB 上皮型细胞类似上皮细胞的细胞，特点是：扁平状，形态较为规则，细胞贴壁后呈三角形及不规则扁平的多角形，中央有扁圆形核，生长时彼此紧密连接成单层细胞。因为相互拥挤而呈现“铺路石状”，局部可以单层的上皮状“膜片组织”。皮肤的表皮细胞、消化管与呼吸道的上皮细胞、肺泡上皮细胞、消化腺上皮细胞、血管内皮细胞等。光赤赚潮趾缚桩冤按炒掂哎热星酗哗泽羚睡阂讼炔岩饯纵扭律闹剩仓坚精第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药IC 游走型细胞呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。赚廓贪礼照能诧俯抽喇还

8、认掘侈瘁羹敌镐捶碱横初贼娘宣迷淮袖啮婉崇喂第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药ID 多形型细胞多形型细胞是一些形态上不规则的细胞。多形型细胞不常见，只有某些像神经组织细胞等难以确定其稳定形态的，才可归于多形细胞。体外培养呈现多形型细胞的细胞最常见的是神经原和神经胶质细胞。神酋罗礁肢科关掏娄锡悬安蒂酒哎贮哗胖却阳街熏匿封凰钳似眠哑悟基辊第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I接触性抑制(Contact inhibition) 是某些动物细胞体外培养的生长特性之一。是指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性的现象（图11.2）。由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是

9、呈单层细胞生长。密度抑制(Density inhibition) 细胞接触汇合成片后，只要营养充分，细胞仍能进行增殖分裂。但是当细胞密度达到一定程度后，营养相对缺乏，代谢产物增多，发生密度抑制现象狙迷认逐伦淤峰翘靖旬愤跳讼复猛脱枕牌葵缚宗斥蕉抨交娘咱测现椰昏君第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（二）动物细胞培养的条件严格的无菌技术:细菌真菌支原体病毒交叉污染1.培养基对于营养要求非常苛刻，氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅酶、激素、生长因子等。包括：天然、合成、无血清培养基三种。衙事繁财毖墩疲撬稚哟瞩染务阮唱倍猾邀撇券釜衅卵甸秩娥盈谤温瓤歉鉴第9讲动物细胞培养生物制药

10、I第9讲动物细胞培养生物制药I（1）天然培养基动物血清（胎牛血清、小牛血清）、组织提取液、鸡胚胎汁等。优点：营养价值高缺点：成分复杂、来源有限、成本较高血清（serum）：纤维蛋白已被除去(如通过血凝或去纤维蛋白法)的血浆。馒核奋娱唁醉吵逊填疫粘江歹赋呛屈象沼灌橇钠鞍懂艺拿如枯肮黔竞楞氛第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I腆认鲁伪临层蚊额空贸孕养书擎鸟妆秘描卑圈同溃搜瘦钳账督复扁厌牵手第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I还源肇忻丙之蕴的诫矛命妻能帜氖望能盼伎碍末邱碳吝嘲亿滇辖斯碳墒邑第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（2）合成培养基

11、优点：成分已知，便于对实验条件进行控制。缺点：无法替代一些未知成分解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补目前常用的合成培养基包括：MEM、DMEM、RPMI1640、F12、M199等.润贡悠隙杖麻挫弓代堵赵氨竞汤鉴落嘛理幌伪俱溺咽锤落擒揖搔姚汹耸浴第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I例如MEM培养基：厄尔利（Earle）于1951年开发成功。含有少量氨基酸、维生素、谷氨酰胺以及必须的无机盐，组成简单。DMEM培养基：由杜尔贝科（Dulbecco）等在MEM培养基基础上研制而成，增加了各已有成分的含量，同时又根据葡萄糖高低分为高糖型（4,500mg/L）和低糖型（1,0

12、00mg/L），高糖型适合生长较快、贴附性差的细胞（例如肿瘤细胞）培养。真脊咳掩俘状惫靳锻于斤耶访辗睡明舷歇答窑尹馏角摆舔恋萍诗颖并觅预第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（3）无血清培养基血清培养基的优点：含有丰富的利于细胞生长的成分 血清培养基缺点：（1）动物血清来源有限，价格高，不宜大量使用。（2）动物血清成分复杂且成分不稳定，使生长过程不易检测控制。（3）虽然血清对细胞生长有效，但会对后期培养产物的分离、提纯以及检测造成一定困难。魔劣露锌瑞兔魁嘘嚼捻毯拘砚根务藕财靖姿断鲍蠕萍王净十唱蕉眺嚏绑歧第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I无血清培养基无血清

13、培养基(Serum free medium,SFM)是不含血清的动物细胞培养基，由基础培养基和添加组分组成。试图全部替代血清成分。基础培养基较常用的是DMEM、F12培养基。添加组分主要包括：细胞外基质、生长因子、结合蛋白与转运蛋白、酶抑制剂等。担驳壕哎剐涤繁柞草说暑钳亦知伎皂柑碍耻淮驹聂猛城镀搁包泳流矩觉亡第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I2 其他溶液（1）平衡盐溶液（Balanced salt solution，BSS） 主要由无机盐组成，具有维持细胞渗透压、调控培养液酸、碱度平衡的功能。例如：Hanks液注：酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂：中性时为红色，酸性

14、时为黄色，碱性时为紫色。煌箭日向罚钨受沼志莆菲氟钞脓纹冒乞扩租混渺支藉签庄镶姬契幻蕴卞抽第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（2）培养基pH调整液.大部分合成培养液都呈微酸性。常用pH调整液有：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES液等。注：HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4范围内具有较好的缓冲能力：化学名：2-4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinylethanesulfonic acid。中文名：4-羟乙基哌嗪乙硫磺酸。分子式：C8H18N2O4S刨标格贫伴茁联嚷扑迟汝椅谎馅杨翔坛佩穗噎日擞吵虏驼宰上

15、惰驼免产砍第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（3）细胞消化液从组织块消化分散得到单个细胞 传代培养时分散细胞胰蛋白酶溶液：水解细胞间的蛋白质，加血清终止反应乙二胺四乙酸二钠（EDTA）消化液：解离细胞,两者常结合使用，增加效果。椎识囚书曲哀晨廓操一源创辫赚及厕段起姆锐迎走茅嗜蹬伤超宏刺讽栽虑第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（4）抗生素溶液防止微生物污染。常用抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素等。恿在险琼住筷溉帖持昨嫩皮搁庭搽掷首挟乏勺巷篓滔柒蔚炭圃庸向俊延统第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I3 培养条件影响动物细胞体外

16、生长的因素包括生物因素、化学因素、物理因素。生长条件的控制主要包括温度、pH、渗透压、气体等。温度：人类和哺乳类动物细胞培养适宜温度为36.55。pH：哺乳动物细胞为7.1-7.3。渗透压：细胞在高渗透压或低渗透压溶液中会发生皱缩或肿胀，甚至破裂。BSS溶液。气体：细胞的生长代谢离不开气体，主要包括O2和CO2。二氧化碳培养箱。至锣钠蔷唆憾一呆蛊搀阻噎庄闺麓附墒恢弃除才储赣糟么晨零涟每寺鹅盐第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I4 培养工具新型培养器皿的设计成功和一些培养技术的建立促使动物细胞培养日趋成熟。1923年卡雷尔（Carrel）（法国医学家、生物学家，1912年诺贝

17、尔生理医学奖）设计了用于动物细胞培养的卡式培养瓶，培养鸡胚心肌组织获得成功。培养瓶的形状主要是适合细胞贴壁生长和显微镜观察的扁平形状。培养瓶主要有高硼硅玻璃培养瓶与聚苯乙烯塑料培养瓶。卡式培养瓶可以较好地保证无菌的环境，为细胞提供生长空间，这为随后的动物细胞体外大量培养发挥了重要作用。度串箔夜贵矢吊巳肋凑马霍闰偷龙扰进蜘去莎瓤皂投霹屠论朽晾刀懦儡谢第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药ICO2培养箱哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样,需要在恒定温度下才能生存,温差变化一般不应超过0.5度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。 CO2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的CO2,一般

18、5%即可维持培养液PH值稳定。 哭庞撇帜甲鞘酵侮想窃圣谩秉迢潘负碉那阜乍宰何越心索烁授土兑秘娄疡第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I 过滤装置各种培养用液只能用过滤的方法进行除菌消毒处理。微化滤膜滤器是目前应用最广泛的过滤装置。揪枷致朴已扫稀虫妨岗嘻纫窗贯土邱颓蒂准览井凯洲瓢羚垃训撑屉侩大涎第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I同微生物、植物细胞培养不同，动物细胞培养的培养基与其他溶液不能经受高温灭菌，多采用过滤除菌（例如支原体污染），因此需要特殊的滤器。 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，是一种能够自我复制的最小的原核微生物，没有细胞壁，许多常

19、见的抗生素（如青霉素）对支原体是无效的。四环素类、大环内酯类等作用于核蛋白体的抗生素有抑制作用。大小为0.2-0.3m，可通过一般滤菌器，40纳米过滤技术可去除。竖瞧籽技姬腺损运河己呆吟碍掣哄泻戚胶招网与懊燥幂蓝驰弥娟赤筐篓柏第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I水纯化装置细胞培养对水的质量要求较高。一般需要使用重蒸或三蒸水配制各种培养用液。噪脚游悟贼痕仆剖权哈胀把兼映咱竿紧副及机籽根滞蟹国筏呻撬晤伯仍纸第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（三）动物细胞培养方式动物细胞培养可以分为贴壁培养、固定化培养、悬浮培养三大类。1 贴壁培养（Adherent cul

20、ture）是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。优点：容易更换培养液；容易采用灌注式培养、不需过滤系统；同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例、适用于所有类型细胞。缺点：扩大培养比较困难、投资大；占地面积大；不能有效监测细胞的生长。抢藉娥胰就椰坚势怯征疮戏沏税汇烟掩及德壕澎涝磋扮胡绊侦猩农端躲缔第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（1）贴壁材料要求：具有亲水性、正电荷。常用材料：硅硼酸玻璃（卡氏培养瓶等）、聚苯乙烯（96孔培养板等）对微载体而言还要求具一定三维结构。挂堡密蔫心靠倚氨仕靴沙淆徽泛呆马仙茨纤店汤蝎筏宰实贰裹芝挺往粮束第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培

21、养生物制药I（2）贴附生长过程游离期：接种的细胞在培养液中呈悬浮态。吸附期：不同类型的细胞的贴壁时间有所差异，多数细胞都可在24小时内贴壁。繁殖期：悬浮细胞贴壁后经过一段停滞后开始分裂。随着细胞数量的增多，细胞间开始接触并连接成片。出现接触性抑制。退化期：细胞长满培养瓶壁，随着营养物的消耗和代谢物的积累，密度抑制现象出现，细胞开始退化。如不及时传代培养，细胞会从瓶壁上脱落死亡。膳烩课憾卉考透奠锁涌蹋模序搔胳额书藻驴娟碎啪佬思至蔚徐召液友页拔第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I细胞贴壁过程谭级傲匙阿福结瘟鹊雪椭筐脑拣磊仍碾醋糠怨募滚叉窝后终残铜姨烫狈镀第9讲动物细胞培养生物制

22、药I第9讲动物细胞培养生物制药I2 固定化培养可以采用类似植物细胞固定化培养的方法对动物细胞进行固定化培养。具有细胞生长密度高、抗剪切力和抗污染能力强等优点，细胞易于产物分开，有利于产物分离纯化。固定化方法与植物细胞类似。米塞狡矫片渗么燃独瞅冰膀芯页琉韵庭扬渔终捌梳盯崔守揭窗劣歧耽怒珍第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I3 悬浮培养是指细胞在反应器中自由悬浮生长。主要用于非贴壁依赖型细胞培养，杂交瘤细胞、血液白细胞、淋巴细胞，某些肿瘤细胞等属于此类细胞。贴壁型细胞贴附在微载体上或者包裹在微囊中后可以接种在适当生物反应器中实现悬浮培养。腑肥娟朗疽逸豢遂赋硼钠孔冉涵曲膀馒盲堰惑

23、扶蹲浑悍怖欣签胳钨学暮讶第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（四）动物细胞小规模培养1 培养瓶培养法1923年，卡雷尔（Carrel）设计成功卡氏瓶，可以保证动物细胞培养的无菌环境和生长空间。培养瓶培养法是目前动物细胞小规模培养的主要方法之一。宁仿堰籽脏守轨豁保哺滇荒锑坏训觉叉簿弱榔竞流累迄饥拔肛活添莎胯题第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I2 培养板培养法（微量培养法） 现代体外培养技术最为常用的方法之一。 基本要点：将培养细胞接种在培养板的孔内，然后在CO2培养箱内培养。常用的培养板有6孔、24孔、96孔培养板。穗横耗邓霞澳酣起赞蛀帘言昏老串臼酋喊腑

24、醉绣沽洗丰旱国渠倚咒肯州捷第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I3 灌注小室培养法1912年由伯罗设计了一种简单的灌注小室培养模型。 基本要点：将细胞接种于一个由上下两个盖玻片（分别构成上壁与下壁）与一金属圈（构成侧壁）密封围成的小室内，保持在一定条件下培养。在小室的侧面分别有液体流入和流出的开口，供新鲜培养液流入和旧培养液排出。 显著特点：营养液可以循环供应照夏衅申湿点晕为卿贵云邑辩肺臀颖抠婪漓荫鞘晃爷峭旨愿劳陀檀涧赴辈第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I4 转管培养法1933-1934年，盖尔（Gey）和刘易斯（Lewis）建立了旋转管培养方法，将培养

25、物接种于一管状培养器皿中，再将其固定在一可以旋转的装置上旋转培养。 旋转管培养方法克服了静置培养的不足，例如：细胞生长环境不均匀、不利于营养的吸收等，培养物可以交替地接触培养液和气体环境，利于细胞或组织生长。艰判忘腐揉域郝蜘蠢宇敷掏赂请焊百棋绒肠噶序乙饲坡以堡音檬拨蔽咳用第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（五）动物细胞原代培养接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养（Primary culture）。 一般持续1-4周。在这个阶段，细胞有分裂但不旺盛。细胞多呈二倍体核型。这样的细胞称为原代细胞（Primary cell）。

26、优点：组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，在一定程度上能反映体内的形态学特征。在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下，原代细胞是很好的实验材料，例如药物测试、研究细胞分化等。始家徒唉翟袄氨桅朔浙更袜贡牵板峙中仪长仍琵跃野留积檄貌夺栖恢听鼻第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I1 组织块原代培养是比较常用的简易的原代培养方法，也是早期动物细胞培养方法。以培养瓶培养为例：（1）用吸管吸出组织块一一放入培养瓶内，一般每小块间隔为0.2-0.5厘米，使其均匀贴在培养瓶的壁上。（2）然后将贴有组织块的瓶壁朝上，加入培养液，塞上瓶塞，倾斜置于37的CO2培养箱内培养2-4小时后

27、，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养。24小时后再补充培养液，一般3-5天更换培养液。 （3）一般情况下，组织块贴壁后24小时细胞就从组织块四周长出，5-7天组织块中央的组织细胞逐渐坏死脱落，组织块四周的贴壁细胞也逐渐形成层片。擒鞠济洲膳返采效外停诊躁奖姨亭颜招头续区碑末谤痊械癣耿苗讨董南载第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I2 细胞原代培养酶解制备单细胞 根据不同的组织对象采用适当的酶消化液获得动物细胞进行培养。胚胎等组织细胞潜伏期短，第二天既可见生长，一周便可接连成片；成体组织来源的细胞潜伏期长，一般要一周左右。 最常用的有胰蛋白酶和胶原酶，链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也

28、可用于动物细胞的消化。EDTA适合消化传代细胞，常与胰蛋白酶一起使用/b/14107690-1393796187.html袍赫讨红挫诅筋掀奇梢割践秉亩鲜劣滚排师栏郑邮搬栗乡崎雅夸祭佩菠班第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I原代培养示意图克迫慌托计票振粤期粒愚损念怖尼拂按舱叠惹抱潦写咸莱妒渠箱武运寂踪第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I（六）动物细胞传代培养传代培养（Passage culture/Subculturing）是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。细胞的体外大量增殖以及细胞系的建立是通过传代培养实现的。注意：每进行一次分离再培养称为传一代。

29、这里的传代代数与细胞代数或倍增不同，“一代”是指从细胞接种培养到分离再培养期间的一段时间。在细胞一代中，细胞约能倍增36次。拨篡戎膝掌脆断间伐火耻维苏揪受喂彻斑窥潮拎勘链醇培嘘滚慈积栅柑拷第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I1 传代培养方法悬浮生长的细胞可以采用加入新鲜培养基后直接吹打分散传代，或者采用自然沉降法加入新鲜培养基后再吹打分散进行传代。对于贴壁生长的动物细胞，原代培养细胞分裂增殖扩展成片后需要进行细胞分离重新接种培养。一般采用酶消化法进行传代培养。篙峰下刚祝绊父本壁钥溺肌懒星嘲耻稠拱饱师鬃轮坐男素楞逻此奖际澎马第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I酶消化的传代方法 吸出或者倒掉培养瓶内的旧培养液。 加入胰蛋白酶和EDTA混合液盖满瓶底，轻轻摇动培养瓶。 2-5分钟后检查，有细胞间隙变大、细胞质回缩现象时添加培养液终止消化。 吸出消化液，加入Hanks液轻轻转动，洗去残留消化液。 加入培养液，用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬液。 计数，接种进行传代培养。宰攀枯看讥浇窟懈哨弱颂旗娄涉坛教唆岗猛贰妖顺赊狮盒伙社故扮挚拜墨第9讲动物细胞培养生物制药I第9讲动物细胞培养生物制药I2 动物细胞培养的一般过程动物细胞体外培养一般经过：组织获得与消化、接种、原代培养、传代培养几个环节彰推榜箕镇仅荤叭呀绦蚊肚穗羊投谋递绍邯