PCR试验室新冠核酸检测试验室SOP文件

1、PCR实验室（新冠核酸检测实验室）SOP文件XXXE院检验科基因扩增实验室标准操作规程适用部门： 基因扩增实验室XX医院PCR实验室（新冠核酸检测实验室）SOP文件目 录 TOC o 1-5 h z 第一部分 工作制度及程序 1PCR实验室各区工作制度及程序 . .1 HYPERLINK l bookmark13 o Current Document PCR实验室人员配置及培训程序 .4 HYPERLINK l bookmark21 o Current Document PCR实验室清洁程序 .5 HYPERLINK l bookmark26 o Current Document PCR实验室

2、废弃物处理程序 .6 HYPERLINK l bookmark34 o Current Document PCR实验室生物安全防护程序 .7 HYPERLINK l bookmark38 o Current Document 抱怨的处理程序 .8 HYPERLINK l bookmark40 o Current Document PCR实验室应急处理程序 .9第二部分标准操作规程11临床标本的采集及处理操作程序 11 HYPERLINK l bookmark51 o Current Document 标本接收、拒收及保存程序 12 HYPERLINK l bookmark53 o Curren

3、t Document 实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序 14 HYPERLINK l bookmark55 o Current Document 标本前处理（核酸纯化）标准操作程序 .16 HYPERLINK l bookmark57 o Current Document 新型冠状病毒核酸检测标准操作程序 18 HYPERLINK l bookmark71 o Current Document 人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程 24 HYPERLINK l bookmark119 o Current Document 核酸扩增及产物分析检测的操作程序 30 HYPERLIN

4、K l bookmark121 o Current Document 检测结果分析的标准操作程序 31 HYPERLINK l bookmark129 o Current Document 检测结果报告程序 34 HYPERLINK l bookmark131 o Current Document 实验记录管理程序 35第三部分设备SOP文件 .36 HYPERLINK l bookmark133 o Current Document AU1001-96全自动核酸提取仪（96通道）操作流程、校准及维护保养程序 .36 HYPERLINK l bookmark147 o Current Docu

5、ment 乐普Lepgen-96全自动医用 PCR分析系统操作流程、校准及维护保养程序 .41净化工作台SW-CJ系列操作流程及维护保养程序 .48博科生物安全柜操作流程及维护保养程序 49多恒DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱操作流程及维护保养程序 .54多恒HH-100干式恒温器（金属浴）操作流程、校准及维护保养程序 .56多恒TD4Z低速离心机操作流程及维护保养程序 .60多恒DH18R台式高速冷冻离心机操作流程及维护保养程序 .66PCR实验室（新冠核酸检测实验室）SOP文件 TOC o 1-5 h z 多恒MIN110K迷你离心机操作流程及维护保养程序 .74多恒MIX-

6、2500微型旋涡混合/匀器操作流程及维护保养程序 .76多恒2-96板式离心机操作流程及维护保养程序 .78威高MSL.NC80高压灭菌器操作流程及维护保养程序 80紫外线消毒车操作规程操作流程及维护保养程序 .91澳柯玛药品冷藏柜操作流程及维护保养程序 .93澳柯玛普通冰箱操作维护规程 .95移液器操作流程、校准及维护保养程序 97传递窗操作流程、校准及维护保养程序 .101第四部分 实验室质量控制 .102实验室试剂、耗材购买管理程序 .102试剂的质检标准操作程序 .104实验耗材质检的标准操作程序 .105室内质控标准操作程序 .107室间质评管理程序 .111XX医院基因扩增实验室S

7、OP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第1页共111页第一部分工作制度及程序PCR实验室各区工作制度及程序目的：实现PCR实验室日常专人负责，确保实验室操作的规范性。实验室分区设置本院在检验科设置临床基因扩增实验室。按国家卫生部医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法以及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则的要求，从房屋配置、装修、采光、通风、隔离等条件将实验室设置分为试 剂准备、贮存区（第一区）、标本制备区（第二区）及扩增和产物分析区（第三区）三个独立区域。各区门前有醒目标志，每个区都设置缓冲区，用于更换工作服、鞋套及维持空气流向。进入各个工作 区域工作时，

8、必须严格遵守单一方向顺序：即从第一区的试剂贮存、准备区一-第二区的标本制备区 一-第三区的扩增及产物分析区。严禁误入和逆向进入各工作区。各区的实验物品（含移液器、试管架、吸头盒、记录本、笔等） ，不得混用，须贴上不同标 签予以区别。各区配有不同颜色工作服：第一区试剂准备、贮存区为白色，第二区标本制备区为蓝色，第三区扩增及产物分析区为粉红色。进入各区实验室，必须更换本室有颜色标识的工作服，带上手套。各分区工作制度试剂贮存、准备区工作制度本区只进行如下工作：试剂的制备、分装和反应液的制备及试剂贮存；其它操作不得在此 区进行。实验人员进入该区须穿本区专用蓝色工作服。实验中须戴一次性手套。记录实验室温

9、湿度和冰箱的温度。根据当天所要检测标本的种类、数量，取出和配制当天实验所需的试剂，其余试剂要立即 收好放回冰箱内。实验中所使用的离心管、吸头等需经高压灭菌处理，应在消毒有效期内使用。第1/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第2页共111页试剂准备工作完成后，将使用过的离心管、吸头置于盛 2000mg/L有效氯消毒液的废物盒 中，消毒清洁实验台面。将准备好的试剂放入一区到二区的传递窗。（注：传递窗的两扇门不能同时开启）；其他区的用品不得带入本区。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。实验完

10、毕打开紫外灯消毒 3060分钟，记录紫外灯使用情况。标本制备区工作制度本区只进行如下工作：临床标本的保存，核酸提取、贮存及加样至扩增反应管，RNA检测逆转录（RT）合成cDNA ;其它操作不得在此区进行。实验人员进入该区须穿本室专用白色工作服。实验中须使用一次性手套，手套需常更换。从传递窗中取出试剂放入冰箱冷冻室试剂存放专区暂存。记录实验室温湿度和冰箱的温度。核对标本的编号、类型和标本数量。按操作规程在生物安全柜内进行标本的裂解、提取和加样，加样后，将其放入二区到三区 的传递窗。（注：传递窗的两扇门不能同时开启）；使用带有本室专用标志的加样器以及经过消毒处理的离心管和带滤芯的一次性吸头。使用过

11、的离心管、吸头须置于盛有 2000mg/L有效氯消毒液的废物盒中。污染的处理：实验中若在操作台面上发生液体外泄，应立即用浸有2000mg/L有效氯溶液的滤纸覆盖发生污染处半小时，然后用酒精擦洗，并开启紫外灯消毒。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。标本处理完成后，关闭所有仪器，记录仪器使用时间和运行状态。其他区的用品不得带入本室。实验完毕要开启紫外灯消毒3060分钟，记录紫外灯使用情况。扩增及产物分析区工作制度本区只进行如下工作：DNA或cDNA的扩增、实时荧光 PCR扩增产物的分析、结果判断、记录结果和生成检测报告等；其它操作不得在此区进行。实验人员进入

12、该区须穿本区专用粉红色工作服。实验中须使用一次性手套，手套需常更换。第2/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第3页共111页记录实验室温湿度。将从传递窗接收来的加好样离心后的反应管上机扩增。扩增结束后，关掉扩增仪。记录仪器使用时间和运行状态。扩增结果分析完后，在工作清单中填入检测结果。得到当天室内质控结果后，输入质控软件。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。实验完毕要打开紫外灯消毒3060分钟，记录紫外灯使用情况。第3/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号

13、：XXYY-pcr sop-001页码：第4页共111页PC读验室人员配置及培训程序目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。细则：人员要求本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有初级以上技术职称或专科以上学 历。实验室工作人员应参加山东省临床检验中心举办的PC叱术培训，并取得临床基因扩增检验技术上岗证。对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应尽快取得上岗培训合格证。人员配置实验室应根据工作需要配备足够的工作人

14、员。各级技术人员履行相应的工作职责。人员培训及考核实验室工作人员每 12年至少参加1次PC叱术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学 术交流会议。安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。科室定期组织实验室内部实验人员进行业务小讲课、PCR实验室人员每年进行本小组内核酸扩增方面的相关培训，提升自身的理论学习水平。本实验室工作人员每年至少进行考核一次。人员管理实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等 相关材料复印件。第4/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第5页共111页责任部门

15、：检验科PCR实验室清洁程序目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。2范围：实验室相关人员及医院清洁工人。3细则：合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处， 常用的物品要容易寻找到。抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。实验结束后清洁台面，并用移动紫外灯进行消毒。每周对使用过的移液器用 75%酒精进行擦拭，若使用过程中发生污染应随时移液器咀进行75%酒精浸泡15分钟左右。实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用浸有 2000mg

16、/L有效氯溶液滤纸盖上半小时, 然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、移动紫外灯 （对实验台面消毒）、天花板紫外灯消毒实验室，每次开启3060分钟。待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。依次清洁三个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。处理好各区废弃物，交医院集中处理。每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。第5/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第6页共111页PCR实验

17、室废弃物处理程序1目的：确保废弃物得到恰当的处理，防止污染环境。预防工作人员在实验过程中被感染或污染。保证实验室、实验人员和外部环境的安全。2适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂（ NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物的处理；3细则：科室职责应对本室工作人员讲明本程序在预防交叉、实验室污染及切断传播途径中的重要性，并要求严格执行。实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色）。污染的标本容器、使用过的一次性消耗品（如试管、吸头、离心管、等 ），置于盛2000mg/L有效氯消毒液的的容器内浸泡一昼夜后再交由医院集中处理，使用过的手套

18、、鞋套等直接放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。无需保存的检验标本，不论检验结果如何，均需高压灭菌或煮沸灭菌，或用强力消毒液处理，污染的纸集中收集焚毁，污染的布可进行高压灭菌。污水和标本不能直接流入下水道，必须经过污水处理后再流入下水道。对各种有毒化学试剂应用后，要做相应的无害化处理，防止污染环境。日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交医院处理。第6/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第7页共111页责任部门：检验科PCR实验室生物安全防护程序.目的：实验人员和外部环境的生物防护。预防工作人员在实验过程中被感染 或污染。.适用范围：适用于实验室人员

19、 和外部环境的生物防护. 程序：工作人员在实验过程中应严格遵守相应的操作规程。感染途径：空气传播：如气溶胶直接接种：工作中偶然的针刺、碎玻璃划伤直接引起传染。皮肤、粘膜接触：临床标本中的感染源通过破损皮肤，粘膜接触造成感染。预防措施：所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本 容器应完好无泄漏。处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液 标本以及试剂，应立即冲洗干净。在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压

20、伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施（如HBV DNA阳性时可及时注射高效价的 HBV特异性免疫球蛋白）。在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏工作桌面或地面时，应及时用 4% 84消毒剂清 洁桌面及地面，然后用清水擦净。第7/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第8页共111页抱怨的处理程序.目的：以病人为“中心”，以质量为“核心”，优质服务。“抱怨”基于对临床和病人（包 括家属等）的返馈意见的重视，往往从中能发现实验室存在的问题或漏洞。有利于提高检验和服务质量，减少医疗差错和事故，巩固和有效改进实

21、验室质量体系，.范围：来自于患者或家属，临床医护人员或实验室工作人员针对检测结果质量、服务质量和实验室管理等问题的投诉或抱怨。. 职责：通常由实验室负责人负责抱怨的处理，必要时应会同科主任一起处理。对外部抱怨，实验室工作人员不得推卸，应负责将抱怨人领到实验室主任处，对电话抱怨须 作记录并及时报告负责人。. 工作流程：抱怨的接受：执行者在接受抱怨时应热情、友好、礼貌、严肃和认真，应记录抱怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容（首先注意稳定抱怨者情绪）。抱怨的处理：能及时处理的抱怨应给予及时解决，记录处理结果。不能及时处理的报怨应争取与抱怨者约定反馈时间，尽可能将问题向实验室主任汇报，寻求妥善的处理方

22、法，尽快答复抱怨者。抱怨的处理一般步骤：接受、安抚、倾听、回应、致歉、解释、处理、回复抱怨的处理以抱怨者的满意为目的，但必须以遵重科学，遵重事实为原则，在不违背科学原则，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者最大程度的理解。抱怨处理的善后执行人对报怨作两份记录：保留一份，上交检验科一份。对抱怨的审核遵照科内部审核安排执行。对抱怨中反映出的影响到试验室质量及质量体系有效性的问题，室验室负责人应会同相关人员及时分析存在的问题，提出有效的纠正措施，并由试验室负责人负责组织执行。. 4实验室工作人员在向实验室负责人报怨得不到满意解决时，有权向科主任提出报怨。第8/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责

23、任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第9页共111页PC读验室应急处理程序.目的：在实际工作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题时，为保证检验结果的准确性、及时，应正确采取应急措施，最大程度上避免或减轻不利影响。.适用范围：适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备和试剂盒。.细则：3. 1核酸扩增荧光检测实验室工作人员在职责范围内均有责任熟悉各种仪器和相关设备的性能、要求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。3. 2工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪器设备和试剂盒的异常情况。3. 3作

24、为应急处理，潜在着一定的可能影响检测质量的不确定因素。室负责人负责在第一时间检查核实应急措施的有效性。3. 4仪器设备故障3. 4. 1室负责人接到异常情况报警后，立即现场确认异常情况的性质：观察有无误操作、偶发 现象或确属不能立即排除的故障。3. 4. 2用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。3. 4. 3有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器）。借用其他部门仪器设备时，及时联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。3. 4. 4不能解决的问题，应及时与供应方会同解决。根据双方合同约定，及时

25、通知供应方。供应 方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。3. 4. 5仪器维修后，必须经验收合格并供需双方签字，调试实验通过后才能重新启用。取下红色 故障标示（暂停使用），换上绿色正常标示（正常使用）。3. 4. 6室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。3. 4. 7对未能及时排除故障时，必须及时上报科室，在科主任批准下，应积极联系附近的其他已得到山东省临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足患者和临床需求。第9/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第10页共111页责任部门：检验科3. 5试剂盒质量发生问题，

26、经核实后，及时通知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作质 量检测，合格后方可使用。3. 6仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标 本送至其它已得到上海市临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检查；如已影响到报告的 及时发出，应在门诊取报告处向病人公告或向相关病区公告，取得病人的谅解。3. 7影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。第10/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-ooi页码：第11页共111页第二部分标准操作规程临床标本的采集及处理操作程序.目的：规范临床待检标本的正确采

27、集、送检和处理。.适用范围：基因扩增检验实验室的所有临床检测标本。.职责：所有采集标本的人员均需按本SOFB作，实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病人宣教。.操作程序本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。血液标本：用真空采集管采集血液标本，病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采 集，血标本采集后在 2小时内送达实验室。实验室工作人员对标本进行查验，如标本采血量不 足、严重溶血、采样时间过长（特别是进行RNA检测时）或出现其它不合要求的情况，应拒收标本，登记并告知相关科室。痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一 口痰标本送检。（对于无痰或少痰

28、的患者，可用45c加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压 胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。）标本在室温下保存不能超过 24小时。样本处理时，在样本中加入2倍体积的4%NaO解液，吹打均匀后于室温放置30分钟使之液化。取液化后的痰标本1ml于1.5ml无菌离心管中，15000r/min离心10min,弃上清，在沉淀中加 TE溶?夜1ml （自备）混匀，15000r/min 离心10min 弃 上 清，重复上述洗涤步骤一次。沉淀中加入 50ulTB DNA提取液，震荡混匀后 100摄氏度沸水浴 15分钟，15

29、000r/min 离心10分钟备用。生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。 采集生殖道拭子标本，要求病人在采样有2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口 23cm,转动一周以获得上皮细胞。将取样后的棉拭子放入含1ml无菌生理盐水离心管中洗涤片刻，在管壁上挤干后丢弃拭子，13000rpm离心10min,弃上清，保留沉淀。尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的试管中送检。取1ml于无菌离心管中，13000rpm离心10min ,弃上清，保留沉淀。脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。取1ml于无菌离心管中，13000rp

30、m离心10min ,弃上清，保留沉淀，置 -20 C保存。第11 / 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第12页共111页标本接收、拒收及保存程序.目的：本程序是对分析前标本的质量管理，是与确保检验质量为临床提供准确有效结果密切相关，实验室工作人员必须重视标本的采集、处理、贮存、安全处置等全过程。.范围：PCRT增的临床各类检测标本；.职责：PCR佥测实验室现有工作人员须熟知标本的采集、处理、贮存、安全处置等全过程。并有责任向临床医护人员进行宣传培训如PCR项目选择、标本采集、运用、处理等技术要求和注意事项。.标本的唯一性标

31、识：标识由三部分构成：检测项目、标本采集日期、该检测批次的标本序号，三部分间无间隔符号，例如：B111210001分别表示实验项目、年、 月、 日、 序号，序号（001-999 ）,整个标识为10-11位；由于标本容器太小，对应标本唯一性标识，产生工作标本序号，其组成有检验项目加序号 （1-99 ）。 HBV用B表示、HCVffi C TB用TB CT用CT、UU用11以示等。. 2标本种类用中文表示：全血、血清、血浆、痰、尿、分泌物、各种穿刺物、组织等。. 3标本的唯一性标识须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改；必须时，在旧标识上划双线更改， 更改后应保持旧标识可辨识。.标本的接收：所有标本均

32、可能具有传染性，须严格遵守医院有关院内感染及医用垃圾的管理和处理规定，工 作人员须注意保持并随时检查容器的完整和无标本外泄发生。接收标本时应核对标本与检验申请单的一致性。工作人员有权拒收与检验申请单不一致的标本、标识不清的标本。检验申请有不清晰情况时，应即时与临床科室或相关人员联系核实。标本接收人须检查标本状态 .标本合乎要求，须在可接收标本记录本上按内容记录，作进一步处理，标本不合乎要求，须在 记录本上记录拒收原因。.标本的拒收：标本在下列情况下，视为不合格，工作人员有权拒收标本；无被检标本基本信息或与申请单不符合（姓名、年龄、性别、住院号、检验项目等）使用不适当的容器；第12/ 111页X

33、X医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第13页共111页容器有破损；标本外泄污染；标本溶血；标本量不足其它如后续处理过程中发现的不合格，应记录其状态并通知临床重新送检。对拒检的不合格标本应登记在拒收标本记录本上。填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。必要时电话告之相关科室医生或护士。.标本的保存：处理前的标本保存：HBV全血中本可4c下短期（12周）保存，或分离出血清（血浆），保存于-20 C下。HCV在室温下1小时内分离血清，吸取 200 口，保存于-20 C。尽可能快的提取 RNATB:液化的痰标本如果不立即用于核酸提取，可

34、保存于 -20 C下。处理后的痰或胸腹水、脑脊液、脓?用于 TB检测的标本可置于 4c下短期保存。长期保存于 -20 C下。CT和UU:处理后的沉淀标本可置于20c下短期保存。报告发出后的标本保存：a）提取的核酸标本当天检测可置 4 c保存，如当天不检测应置 -20 C保存。报告发出后丢弃。b）原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-2 0C保存3个月，以备查。超过 3个月保存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。c）血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录，按检测项目分类存放，并由专人负责管理。第13/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文

35、件编号：XXYY-pcr sop-ooi页码：第14页共111页实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序目的：保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。.适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用溶液：4%NaOHm夜、75%的酒精、4%84消毒液、2000mg/L有效氯溶液等。.管理程序：化学试剂的购买或领用：每月清点一次试剂，发现试剂存量不足时，及时领用或提交请购申请。发现有试剂过期或明显变质时要立即报废，并将报废试剂妥善处理。化学试剂贮存：临床基因扩增实验室常用化学试剂均置于避光、阴凉、干燥处保存。实验中常用到的一些化学试剂则根据要求保存于不同环境（如预冷乙醇保存于4C）。PCR试剂一律贮存于-20

36、 o化学试剂使用：临床基因扩增实验室常用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时主要应 注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后的及时清洁等。配制用具 干燥洁净的1000ml量筒一只，200ml量筒一只，50ml量筒一只，三角烧瓶两只，天平一 架，250ml、1000ml 广口瓶各一只。配制步骤配制4%脂0的液a.用天平称取4克分析纯的NaO唯1体，置于一只三角烧瓶中。b.用200ml量筒准确取100ml蒸储水，缓缓注入盛放 NaOHK体的三角烧瓶中。c.摇荡三角烧瓶使NaOHfl体充分溶解。d.然后缓缓倾倒入 250ml广口瓶中密封保存备用。配制4% 84消毒液a.用50ml量筒准确取40m

37、l84消毒液原液，缓缓注入一只三角烧瓶中。b.用1000ml量筒准确取960ml水，缓缓注入盛84消毒液的三角烧瓶中。c.摇荡混匀溶液，将混匀的溶液转移入广口瓶中。配制2000mg/L有效氯溶液消毒剂本室采用片剂配制有效氯溶液，根据实际配制液体体积加入适当数量片剂。第14/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第15页共111页配制1%-2聊基橙溶液a.用天平称取2克分析纯的甲基橙固体，置于一只三角烧瓶中。b.用200ml量筒准确取100ml蒸储水，缓缓注入盛放甲基橙固体的三角烧瓶中。c.摇荡三角烧瓶使甲基橙固体充分溶解。d.

38、然后缓缓倾倒入 250ml广口瓶中密封保存备用。配制75%酒精溶液a. 一般常规消毒的75%酒精由医院库房提供。b.RNA提取的75%酒精的配制，试剂盒提供DEPCK,酒精用分析纯的无水酒精。c.根据当天的标本数量配制。注意事项：每份配制好的溶液保质期为14天。第15/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-ooi页码：第16页共111页标本前处理（核酸纯化）标准操作程序.目的规定DNA和RNA核酸样本提取和纯化实验应遵守的操作。.适用范围从人体体液、细胞、组织等标本大批量提取和纯化DNA和RNA。，并包括对核酸样本的长期保存。.定义和术语

39、DNA Deoxyribonucleic Acid即脱氧核糖核酸，是遗传信息储存及传递者。RNA Ribonucleic Acid由脱氧核糖核酸（DNA ）为模板转录合成的核糖核酸的片断。.职责实验技术员负责从不同样本中提取和纯化DNA和RNA。.设备和器材见正文内容.正文实验室设置在实验室内，试剂贮存，核酸提取，核酸质量控制以及核酸样本保存的区域应相互隔离。严禁 不同工作区内的设备物品如加样器、试剂等的移出移进造成不同的工作区间发生交叉污染。进入各个工作区的所有人员和物品必须遵循严格的顺序，只能按单一方向进行，即从试剂贮存和准备区一提取区一质量分析区一标本保存区。工作人员穿着的工作服应经常洗

40、涤，尽量避免不同工作区内的工作服相互混穿，造成污染。同时，应假定样本可能含有病原微生物，样本 DNA提取工作应参考 P2级实验室操作规范进行。工作区域功能和设备试剂贮存和准备区该工作区用于贮存溶液的制备、溶液的分装。本工作区仪器设备配置应包括如下：A. 4 c冰箱和-20 C冰箱、混匀器、微量加样器（覆盖11000 d各个容量的加样器）、生物安全柜（带 紫外灯）；B.专用办公用品、专用工作服和工作鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。提取区第16/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第1

41、7页共111页该工作区用于标本贮存、核酸提取。本工作区仪器设备配置应包括如下：A. 4 c冰箱、20C冰柜、高速台式冷冻离心机、混匀器、水浴箱或加热模块、 微量加样器（包括1入1000科各个容量的加样器）、核酸提取仪、可移动紫外灯（近工作台面）；B.超净工作台和超声波水浴（处理大分子DNA）,专用办公用品、专用工作服和工作鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。质量分析区该工作区用于核酸浓度和纯度测定。本工作区仪器设备配置应包括如下：A.核酸分析仪；微量加加样器若干支（覆盖 l100科）1;B.专用办公用品、专用工作服和工作鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性

42、吸水纸、离心管和加样器吸头等。标本保存区该工作区用于标本贮存。本区仪器设备配置应包括-80 C冰柜。RNA酶污染源及预防实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶污染，使用前必须于180c干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）。对于塑料制品等不适合高温烘烤的材料，使用 RNA酶的抑制剂焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。 通常是以0.1 %的DEPC水溶液浸泡用于制备 RNA的烧杯，试管和其他用品。灌满 DEPC的玻璃或 塑料器皿在37c放置2小时，在121c高压蒸汽灭菌15分钟。预防研究人员造成的污染RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主要涉及RN

43、A的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触脏的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。防止溶液的污染用高压灭菌的水和 RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无 RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1%DEPC于37c至少处理12小时，然后于100c加热15分钟或在15lbf/in2 （1.034x105Pa）的高压下蒸汽灭菌 15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因此不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。核酸标本保存质检完毕后，打印条码贴于样品冻存管外壁，置于-80 C保存，可保存5年以上。做好标本贮存

44、登记。第17/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第18页共111页新型冠状病毒核酸检测标准操作程序1目的在当前新型冠状病毒肺炎疫情期间，规范PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保证实验结果的正确可靠。2范围适合于卞验科PCR实验室。3职责检验人员负责按照本检测细则对被检样本进行检测；复核人员负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；专业组负责人负责对专业组综合管理和检测报告的审核。4检测流程核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）穿戴流程：在基因扩增实验室的清洁区（更衣区）或者普通实验室的洁净

45、区，工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医用N95 口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套， 进入样本处理工作区域或实验室。要点提示：具备标准基因扩增布局条件的实验室，应在清洁更衣区做好个人三级防护，条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。雷佩戴医用 N95 口罩，若无医用 N95 口罩，可以考虑用普通 N95/KN95 口罩外加一次性外科口罩 的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95 口罩。佩戴N95 口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求，有条

46、件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣，穿衣时需由他人协助。穿戴整齐的工作人员，应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作，严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。第18/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第19页共111页4.2样本的灭活处理操作流程：两名完成三级防护的工作人员，进入样本处理区或样本处理专用实验室，将接收到的样本二级包装在安全柜内打开，检查样本主容器是否为严格密闭；对密封袋表面进行消毒后，对送检样本进行56 C下30分钟的灭活，灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最内层的容器，将拭子保存液混匀后进行分装和

47、用于核酸提取。要点提示：涉及高致病性病原微生物的实验室活动，需由两名工作人员完成，其中一人负责主要实验操作，一人提供必要的协助。主操作者应避免反复多次进出安全柜。灰活形式：可以采用水浴或空气加热形式完成灭活，采用空气加热时可适当延长灭活时间。有条件时可以采用小型化设备在安全柜内操作，减少样本进出安全柜的次数。灭活前的样本严禁在生物安 全柜外打开和操作。应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。羊本管每次进出安全柜均需对外表面进行消毒。我就近配备适量的消毒处理物品，以防止实验操作过程中可能发生的意外溢洒事故，有条件时建议在安全柜内配备一次性吸水台布。4.3样本的核酸提取A、手工核酸提取操作流

48、程(1)裂解液配制：在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的普通试剂配制实验室中，准备核酸提取所需的洗液1 (AW1 )、洗液2 (AW2)和carrier RNA 。按照要求，分别向洗液 1和洗液2中加入 分子生物学级别的 130ml和160ml的无水乙醇并及时做好标记； 取310 dl洗脱液(AVE )溶解310 g/ 支的Carrier RNA。配置好后，通过传递窗进入核酸提取区或由工作人员送入核酸提取专用实验室。(2)样本裂解： 取560。AVL裂解液到1.5ml无菌EP管中，加入5.6科配制好的Carrier RNA , 再加入已经灭活的140 口样本(例如咽拭子、血浆等)，混匀振荡15

49、秒，室温静置10分钟，充分裂解样本中的核酸。将 EP管瞬时离心后加入 560口无水乙醇，充分混匀 15秒，再次瞬时离心后备 用。吸取630口裂解产物，小心加入至离心柱中，8000rpm (或6000g)离心1分钟，转移离心柱第19/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第20页共111页责任部门：检验科至新收集管，将剩余630 口裂解产物加到离心柱中，重复上一离心操作 (若样本体积大于140 口，则在此步骤重复将630 口裂解产物过滤收集在一个离心柱上)。(3)核酸的洗涤： 取500口洗?夜1 (AW1 )至离心柱中，8000rpm (或60

50、00g)离心1分钟；换新 收集管后，取500 口洗1夜2 (AW2)至离心柱中，8000rpm (或6000g )离心1分钟；换新收集管 后，用14000rpm (或20000g )离心3分钟，去除洗液2 (AW2 );换新收集管后，继续用离心机 最大转速(20000g )离心1分钟，充分甩离残留的洗液 2 (AW2 )。(4)核酸的洗脱和回收： 取一 1.5ml无菌EP管，将离心柱放入其中， 加入洗脱液(AVE ) 4060科1, 室温静置1分钟后，用8000rpm离心1分钟回收核酸，以备 PCR检测使用。要点提示：新鲜裂解液的配制应尽可能在专门的洁净区域或单独的实验室进行。要用分子生物学级

51、别的无水乙醇试剂进行配制。向离心柱中加入裂解产物、洗液时操作要非常小心，尽量将洗头下探到离心柱内部后靠管壁加样，切忌出现溢洒后污染到离心柱的密封圈，这可能会导致乙醇残留，抑制后续PCR反应。队离心机中取出离心柱时应小心操作，避免离心柱下缘被收集管中的滤过残液污染。勤口入洗液2 (AW2)后的第二次空管全速离心非常关键，能帮助充分甩离离心柱滤膜中残留的洗液2残液，确保洗脱核酸的纯度。洗脱液加样时需小心操作，确保洗脱液尽可能覆盖全部离心柱滤膜，充分洗脱核酸，提高核酸提取的产量。工核酸提取可优选使用检测试剂盒说明书推荐的配套手工提取试剂，也可选用通用手工提取试 剂。样本处理过程中，工作人员觉得有必要

52、时，应随时更换新的外层乳胶手套。B、采用核酸提取仪提取核酸的操作流程根据核酸提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，取200 口样本上机提取核酸，并按照要求回收提取好的核酸备用。要点提示：不同的提取仪器和试剂的提取效率可能存在差异，请一定严格按照提取试剂盒的说明书进行核酸提取操作。第20/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第21页共111页有条件时可以考虑配备小型化的核酸提取仪在安全柜内使用，以进一步加强生物安全防护；若使用在安全柜外的核酸提取仪，则一定要做好生物安全防护及样本的防污染保护。PCR体系的配制和模板加样操作流程：

53、在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的专用实验室，配制PCR体系。根据试剂盒说明书的要求，将试剂盒的不同组分（一般包括反应液、酶、引物等）按照各自必须的体积量进行配制混合，充分混匀并离心后，通过传递窗传递到核酸提取和加样区，或由专人从试剂配制实验室送至核酸提取和加样专用实验室。在加样专用生物安全柜内，根据检测样本例数分装体系到每个反应管中，逐一将样本核酸加入到对应的反应管中，并加盖密闭好PCR反应管；每批次检测需要做一个阳性对照和3个阴性对照。要点提示：式剂配制必须严格在试剂配制区或单独、洁净的专用实验室和安全柜内进行，以确保试剂不会有被污染的可能。式剂配制时要根据检测样本数量进行合理配制，每批

54、次检测均需要包括3个阴性对照和1个阳性对照的试剂，同时还需要考虑试剂分配过程中的正常损耗等消耗。rn样可以和样本处理/核酸提取在同一分区或同一间实验室进行，但如有条件最好在单独的加样区或至少使用专用安全柜进行加样。体系分装建议每次更换新的吸头，避免反复使用带来体积误差和交叉污染。应配置体系加样登记表，确保加样过程准确无误。PCR密闭管盖应特别谨慎，建议更换新的手套，防止手套等接触管盖内部带入污染的风险。上机检测及结果分析操作流程：在扩增区或专用扩增实验室，由专人取出配制好的PCR检测管，混匀、离心后，小心上机检测，按照试剂盒说明书设置扩增参数并分析判读结果。进行结果分析时，应认真阅读试剂盒说明

55、书，在了解该试剂盒的灵敏度、检测方法和局限性等技术特点的基础上，结合该批次阴性质控的结果，综合判读样本的检测结果。检测结束后，为防止可能的扩增污染，扩增结束后的PCR管严禁开盖或带离第21 / 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第22页共111页责任部门：检验科扩增实验室，应尽快通过可密封塑料袋等容器盛装密闭后，放入指定专用医疗垃圾桶中做进一步处理。要点提示：因基因扩增区存在污染的风险，应设专门的扩增区域或在单独的专用实验室进行扩增，必须和核酸提取、试剂配制区域有严格的物理分割。不同操作区域的工作服不要混穿，特别是基因扩增区的工作服，建议仅

56、在扩增区域或扩增实验室内使用。熟悉检测用PCR仪器的基本性能和特点，能客观分析判断检测结果。4.6检测后的消毒处理操作流程：(1)生物安全柜内： 在完成样本核酸提取后，应在安全柜内用75%消毒酒精对外层手套进行消毒处理，并将外层手套取下后弃至安全柜内的垃圾桶中。小心收纳并丢弃使用过的一次性吸水台布， 用0.5%1%的有效氯消毒剂或 75%酒精擦拭安全柜台面、移液器等安全柜内全部仪器的表面。将 安全柜内产生的新型冠状病毒相关医疗垃圾经3层包装后，转移至实验室的专用医疗垃圾桶中。开启紫外灯照射生物安全柜，时间应大于30分钟。(2)样本核酸提取工作人员实验室内：他人协助用0.5%1%的有效氯消毒剂或

57、 75%酒精均匀喷洒内层手套、袖口、手臂及隔离衣后，将外层反穿隔离衣脱下至新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高 压处理。(3)样本处理实验室内： 用0.5%1%的有效氯消毒剂或 75%酒精消毒实验室台面和地面；开紫外 灯进行大于30分钟的空间消毒。(4)工作人员摘脱三级防护：在缓冲区戴新的外层手套，摘护目镜置于75%酒精浸泡消毒，从头开始，自上而下、由内而外缓慢翻转脱下一次性防护服，直到将一次性防水靴套全部脱下，将防护 服置于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。摘口罩、帽子、内层鞋套和内层手套后同样置 于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。(5)新型冠状病毒相关医疗垃圾：所有新型冠状病毒相

58、关医疗垃圾均需经湿热高压灭菌后再作为普通医疗垃圾处理，且垃圾袋上应标注新型冠状病毒医疗垃圾的相关信息。高压处理前后的垃圾要严第22/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第23页共111页格区分，在高压灭菌专用区域对新型冠状病毒医疗垃圾进行湿热高压灭菌处理，高压参数为121 C、30分钟。高压要做物理、生物指示，以确保高压灭菌的效果。4.6.2要点提示：生物安全柜内是风险最高区域，操作者的外层手套经消毒后必须脱在安全柜内。靴套或鞋套的主要作用是对操作者的脚和腿部进行防护，要求必须防水，以确保在实验室内发生意外遗洒时可隔离污染。

59、核酸提取仪内部、生物安全柜内部和实验室空间均应进行紫外线消毒，但紫外线对空气的消毒效果好，对物体表面的消毒效果随距离变远而减弱，故在紫外线消毒前，仍需对各种仪器表面、台面、 地面用消毒剂进行擦拭消毒。工作人员在摘脱个人三级防护后，仍应参照实验室原有实验后操作流程进行严格认真的常规消毒处理，特别是实验后的手卫生环节。第23/ 111页XX医院基因扩增实验室SOP文件责任部门：检验科文件编号：XXYY-pcr sop-001页码：第24页共111页人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程1.0 目的规范人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）操作程序。2.0范围临床基因扩增实验室对HPV羊本进行基

60、因分型检测的操作。3.0职责取得临床基因扩增检验上岗证的实验室人员负责本规程的实施。4.0内容样本收集标本类型 生殖道脱落细胞（如宫颈口、尿道口等部位脱落细胞）。采样方法 对可疑生殖道HPVg染者，采样前拭去宫颈口或尿道口过多的分泌物。将棉拭子（或宫颈刷）于子宫颈外口或尿道口处，轻压并依顺时针方向旋转34周，取得脱落细胞。对尖锐湿疣患者，将棉拭子（或宫颈刷）于疣体表面反复擦拭以取得脱 落细胞。将采样棉拭子（或宫颈刷）浸入盛有 1 ml无菌生理盐水的样本管中，充分漂洗。将棉拭子（或宫颈刷）贴壁挤干后丢弃，立即送检。标本保存 米集的标本应尽快送检，建议标本4c保存不超过24小时，-20C保存 不超